SNP研究概况及其在传染病学领域的应用

随着人类基因组草图的完成、后基因组时代的到来,SNP的研究掀起了热潮。SNP(读音sips),即单核苷酸多态性,是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种DNA序列多态性。它由于高密度、高遗传稳定性、易于分析等诸多优点,被作为一种新的基因研究工具广泛应用于医学、生物学、制药业等领域。将SNP应用到传染病学领域中,无疑会给传染病的防治开辟一个崭新的纪元。

Taqman实时荧光定量PCR快速检测白斑综合症病毒的方法研究

目的:建立一种快速、特异、灵敏的实时荧光定量PCR方法用于检测白斑综合病毒DNA,为控制对虾白斑综合症提供科学依据。方法:根据GenBank登录的白斑综合病毒株序列,使用生物学软件进行序列对比,在白斑综合症病毒保守区序列设计引物和Tagman探针并进行筛选。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化,提高了该方法的特异性、灵敏度和重现性等,并与标准方法(核酸探针点杂交)进行比对,对现场32份虾样进行了检测。结果:Tagman实时荧光定量PCR与标准方法的特异性符合率为100%,灵敏度超过标准方法的10000～100000倍,检测时间为标准方法的1/24,重现性良好(s=0.1～0.49,CV=0.78%～3.72%),并能准确定量。结论:本研究建立的Taqman实时荧光定量PCR方法用于白斑综合症病毒检测具有特异、灵敏、快速、定量、重现性好等优点。

活血渗湿方对实验性肝纤维化的作用研究

[目的]确定活血渗湿方抗实验性肝纤维化的疗效。[方法]用经典四氯化碳肝纤维化模型进行活血渗湿方药效试验,并与复方鳖甲软肝片、干扰素等进行对照观察。[结果]血清HA检测、病理组织学观察显示活血渗湿方治疗组、IFN-γ治疗组及复方鳖甲软肝片治疗组之间均无显著性差异(P>0.05),但与生理盐水阴性对照组比较差异显著(P<0.05)。[结论]活血渗湿方具有显著的抗实验性肝纤维化的作用。

白血病细胞和正常细胞生成树突状细胞的比较研究

目的 体外诱导髓系白血病原代细胞分化生成树突状细胞 (dendritic cell,DC) ,并与正常的 DC比较。方法 分离初诊 2 4例急性髓细胞性白血病和 10例慢性髓细胞性白血病患者的骨髓单个核细胞以及 5例正常人外周血的单个核细胞 ,用 rh GM- CSF 10 0 0 U/ m1、rh IL- 4 5 0 0 U/ m l和 TNF- α5 0 U/ m l联合培养 10天 ;形态学(Wright染色、倒置显微镜、透射电镜 )、免疫学 (CD80、CD86、CD83、CD1a、HL A- DR)鉴定 ,RT- PCR检测白血病克隆以及混合淋巴细胞反应 (ML R)检测抗原递呈功能。结果 细胞因子诱导后 ,正常细胞和白血病细胞均出现典型形态的树突状细胞 ,CD80、CD86、CD83、CD1a的表达明显上调 (正常和 CML- DC的 HL A- DR也明显上调 ) ,急性和慢性髓细胞性白血病以及正常细胞来源的树突状细胞具有不同程度的刺激异基因 T淋巴细胞增殖的能力。结论 无论是急性和慢性白血病细胞均能诱导分化成 DC,并且特征完全相似 ;白血病与正常骨髓的 DC在形态和免疫学表达方面相似 ,但功能较弱。

人端粒酶逆转录酶和人白细胞介素18融合基因真核表达载体的构建和功能研究

目的:以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)融合基因,并观察其生物学功能。方法:健康人单核细胞经RT-PCR扩增hIL-18后、T-A克隆。亚克隆至经N heⅠ、H indⅢ酶切的PCDNA 3.1(+)/hTERT中,限制性内切酶验证后,挑选出含有目标基因的正确克隆。经限制性内切酶和DNA测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中。将hTERT/hIL-18融合基因质粒脂质体介导转染3T 3细胞中表达,经W estern-b lot验证目的基因表达产物,同时对转染细胞作免疫荧光染色。以EL ISA检测转染细胞刺激KG-1细胞分泌γ干扰素的能力,以流式细胞仪检测转染细胞抗MTX诱导凋亡的能力。结果:hTERT/hIL-18融合基因的真核表达载体PCDNA 3.1(+)构建成功,经限制性内切酶验证和DNA测序及同源性对比分析,该基因片段与NCB I基因库hIL-18和hTERT基因CDS序列同源性均达到99.9%;而细胞转染后经W estern-b lot验证,hTERT/hIL-18融合蛋白的分子量约127 kM r,与预期一致,荧光显微镜观察显示融合蛋白在细胞中弥散表达。此融合蛋白能刺激KG-1细胞分泌γ-干扰素,并具有抗MTX诱导凋亡的生物学功能。结论:本实验构建的PCDNA 3.1(+)/hTERT-hIL-18质粒能够在真核细胞中表达,并具有生物学功能,为进一步转染树突状细胞,研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。

脑腓呔基因单核苷酸多态性与阿尔茨海默病相关性研究

目的探讨浙江地区汉族人群脑腓呔基因159C／T多态性与晚发性阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术检测141例AD患者（AD组）和145例健康体检者（对照组）脑腓呔基因159C／T位点多态性，并分析基因与疾病的相关性。结果两组脑腓呔159C／T等位基因频率及基因型构成差异无统计学意义（P〉0.05）。两组女性等位基因和基因型的分布频率差异有统计学意义（χ^2=7．717、8968，P〈0．05或0.01）C／C基因型与AD患病相关。结论脑腓呔159C等位基因的多态性及C／C基因型可增加女性患者AD的风险；推测脑腓呔与雌激素有一定的相互作用。

血清sVCAM-1和sICAM-1与冠状动脉病变相关性研究

目的 探讨血清血管细胞黏附分子 1(sVCAM 11)和细胞间黏附分子 1(sICAM 1)水平与冠状动脉病变程度及稳定性之间的相关关系。方法 采用ELISA方法测定5 2例急性冠脉综合征 (ACS)、2 0例稳定型心绞痛 (SAP)患者和对照组 2 4例血清sVCAM 1和sICAM 1浓度 ,用Gensini积分系统评价其冠状动脉照影结果 ,进行统计学分析。结果 SAP组和ACS组的sVCAM 1、sICAM 1水平和Gensini积分均显著高于对照组 (P <0 0 1) ,ACS组的sVCAM 1水平显著高于SAP组 (P <0 0 1) ;SAP组和ACS组之间的sICAM 1水平和Gensini积分无显著性差别 (P >0 0 5 )。sVCAM 1、sICAM 1与Gensini积分均有高度相关性 (相关系数分别为0 6 94 ,P =0 0 0 0 ;0 4 12 ,P =0 0 0 0 )。结论 血清sVCAM 1和sICAM 1水平与冠状动脉病变程度有一定相关性 ,ACS组的血清sVCAM

陈燕飞:皮肤瘙痒当心肝不好

记者问:什么是原发性胆汁性胆管炎(PBC)?陈燕飞博士:原发性胆汁性胆管炎(之前称为原发性胆汁性肝硬化)是一种自身免疫性肝脏疾病,主要发病人群为中老年女性,近年来发现男性患者也有增多,PBC典型的肝功能异常为碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(γ-GT/GGT)升高,其中ALP特异性更高,多高于正常高限2倍以上,见于95%以上的PBC患者。

病毒性心肌炎慢性期Th细胞凋亡蛋白的表达以及清心Ⅱ号的干预作用

目的:初步探讨病毒性心肌炎(Viral Myocarditis VMC)慢性期Th细胞凋亡的部分调控机制,并观察清心Ⅱ号对这一环节的干预作用。课题的完成将为进一步阐明病毒性心肌炎的发病机制及清心Ⅱ号治疗本病的作用机理提供重要的实验依据。方法:按照文献方法建立病毒性心肌炎慢性期小鼠模型后,随机分为模型组和清心Ⅱ号治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予清心Ⅱ号水溶液灌胃。疗程结束后分别采集T细胞和Th细胞,透射电镜观察T细胞凋亡;运用流式细胞术检测Th细胞凋亡;并用western-blot技术检测NF-κB,caspase-3,caspase-9蛋白在Th细胞上的表达。结果:(1)在VMC慢性期,各组均可见凋亡的T淋巴细胞,相对而言,模型组凋亡细胞数量较多。(2)与正常组比较,慢性期小鼠Th细胞凋亡显著升高(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠Th细胞凋亡显著下降(P<0.01);治疗组与正常组相比较,两者之间无明显差异(P<0.01)。(3)NF-κB,caspase-3,caspase-9蛋白在Th细胞上的表达:与正常组相比较,模型组小鼠caspase-3,caspase-9和NF-κB蛋白在Th细胞上的表达有极显著差异;与模型组相比较:治疗组caspase-3和NF-κb蛋白表达受到明显抑制;而caspase-9的表达则未受到抑制。结论:病毒性心肌炎小鼠慢性期存在Th细胞过度凋亡的现象;清心Ⅱ号干预后Th细胞过度凋亡的现象受到抑制,这一作用的途径可能是清心Ⅱ号抑制了NF-κB,caspase-3在Th细胞上的表达,但未显示出对cspase-9蛋白表达的抑制。

AS_2O_3对多发性骨髓瘤细胞凋亡及其对自分泌VEGF的影响

目的研究三氧化二砷(AS2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3凋亡及其对自分泌VEGF的影响。方法不同浓度AS2O3分别作用于KM3细胞24、48及72小时,用锥虫蓝拒染法检测细胞生长抑制率,经形态学(光镜,透射电镜)和DNA电泳观察KM3细胞凋亡;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液上清血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果AS2O3可抑制KM3细胞的生长,诱导KM3细胞凋亡;AS2O3对KM3细胞自分泌VEGF的抑制作用具有代偿机制,且与时间浓度有关。24小时时,随着AS2O3浓度的增加,VEGF分泌逐渐增强;48和72小时时,随着AS2O3浓度的增加,VEGF分泌则先上升后下降。结论AS2O3可诱导MM细胞凋亡,同时可抑制MM细胞自分泌VEGF。

中药扶正配方在消化道肿瘤治疗中的作用

目的：研究中药“扶正方”在消化道肿瘤治疗中对机体的免疫调节作用。方法：对荷瘤消化道肿瘤建模小鼠进行实验，并同时收集消化道肿瘤术后病人53例。通过服药测定IL-2、TNF和2～5寡腺苷酸合成酶（2-5AS）的活性，以了解治疗前后免疫功能变化。结果：IL-2，TNF，2-5AS的活性治疗前后差异有显著性意义。结论：中药扶正配方在消化道肿瘤的治疗中能提高机体的免疫机能。

慢性乙肝患者外周血Treg/Th17及相关细胞因子的变化

目的检测慢性乙肝患者外周血Treg/Th17及相关细胞因子水平,探讨其与慢性乙肝发病的关系。方法选择30例慢性乙肝患者为观察组,另选择30例健康志愿者为对照组。采用流式细胞术检测两组外周血中Treg细胞和Th17细胞频数,并检测其相关的细胞因子IL-17、IL-23、IL-10及TGF-β1水平。结果研究组外周血Treg细胞频数和Th17细胞频数显著高于对照组,而Treg/Th17显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)。研究组IL-10、TGF-β1及IL-23水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01或<0.05)。而重度患者TGF-β1水平和Treg/Th17显著高于轻中度患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论慢性乙肝患者外周血Treg细胞和Th17细胞均明显升高,而两者的失衡在疾病的发生发展过程中发挥了重要的作用。

病毒性心肌炎慢性期Th细胞凋亡蛋白的表达以及清心Ⅱ号对它的干预作用

目的:初步探讨病毒性心肌炎(Viral Myocarditis VMC)慢性期Th细胞凋亡的部分调控机制,并观察清心Ⅱ号对这一环节的干预作用。课题的完成为进一步阐明病毒性心肌炎慢性期发病机制及清心Ⅱ号治疗本病的作用机理提供重要的实验依据。方法:按照文献方法建立病毒性心肌炎慢性期小鼠模型后,随机分为模型组和清心Ⅱ号治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予清心Ⅱ号水溶液灌胃。疗程结束后分别采集T细胞和Th细胞,透射电镜观T细胞凋亡;运用流式细胞术检测Th细胞凋亡;并用western-blot技术检测NF-κB,caspase-3-9蛋白在Th细胞上的表达。结果:在VMC慢性期,各组均可见凋亡的T淋巴细胞,相对而言,模型组凋亡细胞数量较多。②与正常组比较,慢性期小鼠Th细胞凋亡有显著差异(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠Th细胞凋亡也有显著差异(P<0.01);治疗组与正常组相比较,两者之间无明显差异(P>0.05)。③NF-κb,caspase-3-9蛋白在Th细胞上的表达:与正常组相比较,模型组小鼠caspase-3caspase-9和NF-κB蛋白在Th细胞上的表达有极显著差异;与模型组相比较:治疗组caspase-3和NF-κB蛋白表达受到明显抑制;而caspase-9的表达则未受到抑制。结论:病毒性心肌炎小鼠慢性期存在Th细胞过度凋亡的现象;清心Ⅱ号干预后Th细胞过度凋亡的现象受到抑制,这一作用的途径可能是清心Ⅱ号抑制了NF-κB,caspase-3在Th细胞上的表达,但未显示出对caspase-9蛋白表达的抑制。

不孕不育妇女阴道分泌物病原体检测

目的 探讨不孕不育者妇女淋球菌 (NG)、沙眼衣原体 (CT)、解脲支原体 (UU)、单纯疱疹病毒 (HSV 2 )感染情况。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)对 2 5 6例不孕不育者妇女阴道分泌物进行NG -DNA、CT -DNA、UU -DNA、HSV -DNA检测。结果 2 5 6例中检出率NG为 9 4%、UU为 36 8%、CT为2 4 2 %、HSV 2为 7 8%、NG +UU为 4 7%、NG +UU +CT为 1 6 %、UU +CT为 13 7%、NG +CT为 3 1%、UU +HSV为 1 6 % ,一种病原体检出占 5 5 1%。不孕不育者妇女NG、UU、CT、HSV 2检出率均高于正常对照组。结论 不孕不育妇女不仅要对一种的病原体进行检测 ,而且对多种病原体检测也极为必要 ,尤其对各种原因不明的不孕症 。

佛波脂和离子霉素对大鼠CD_3/CD_4/CD_8分子表达的影响

目的观察不同浓度的佛波酯(Phorbol myfismte acetate,PMA)和离子霉素(ionomycin,Ion)作为淋巴细胞激活剂对大鼠淋巴细胞表面分子表达的影响。方法用不同浓度的PMA和Ion刺激大鼠淋巴细胞后,使用流式细胞仪检测其CD3/CD4/CD8表达的变化。结果单独使用高工作液浓度的Ion(15、20μg/ml)对大鼠淋巴细胞表面CD4有显著下调作用,而中低浓度(2、5、10μg/m1)则影响不明显。单独使用低、中、高三种浓度(25、50、75ng/ml)PMA刺激,发现CD3/CD4/CD8无明显改变,分别以(2、5、10μg/ml)二种浓度的Ion联合高浓度PMA刺激后发现CD3/CD4/CD8也无明显改变。结论在低于10μg/m1的Ion和低于75ng/ml的PMA浓度条件共同刺激下不会引起表面标记物,特别是CD4分子表达的改变,故有助于进行淋巴细胞刺激相关试验时选择合适的淋巴细胞刺激物浓度。

低分子量肝素下调转化生长因子转录表达及抗肝纤维化作用

目的观察低分子量肝素钙对肝纤维化动物模型的干预作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法以四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠为研究对象,观察低分子量肝素的抗肝纤维化作用,同时进一步用酶联免疫吸附法、免疫组织化学法及实时荧光定量RT-PCR法观察低分子量肝素钙治疗动物的血清TGF-β1含量、肝组织原位TGF-β1蛋白表达及mRNA转录水平变化。结果低分子量肝素钙能显著降低CCl4所致实验型肝纤维化大鼠肝纤维化分期(P<0.05);显著降低血清TGF-β1水平、肝组织TGF-β1转录、表达水平(P<0.05)。结论低分子量肝素钙对CCl4所致的实验大鼠模型有抗肝纤维化作用;机制与抑制TGF-β1转录表达有关。

新蝶呤——冠心病活动的一个新标志

目的 为了研究冠心病发病的可能机制 ,探讨可能诊治策略 .方法 对 4 0例冠脉造影证实的冠心病患者 (2 0例急性冠脉综合征 ,2 0例稳定心绞痛 )和 16例正常人测定了血清新蝶呤水平 ,并与临床分型进行了分析 .结果 发现冠心病患者新蝶呤水平显著高于正常人 (分别为(15 .16± 7.4 4) nmol/ L和 (8.38± 4 .6 9) nmol/ L,P<0 .0 1) .急性冠脉综合征患者新蝶呤水平显著高于稳定心绞痛患者 (分别为 (17.83± 8.38) nmol/ L和 (12 .5 0± 5 .34) nmol/ L,P<0 .0 5 ) ;而稳定心绞痛患者新蝶呤水平又显著高于正常人 (分别为 (12 .5 0± 5 .34) nmol/ L和 (8.38± 4 .6 9) nmol/L,P<0 .0 5 ) .结论 冠心病 ,特别是急性冠脉综合征患者新蝶呤水平显著升高 ,免疫激活可能参与了冠心病的病理生理过程 。

纤维连接蛋白在膀胱癌丝裂霉素化疗药物耐受中的作用

目的 :探讨纤维连接蛋白 (FN)在膀胱癌化疗药物耐受中的作用。方法 :将T2 4膀胱肿瘤细胞分别接种于包被FN、牛血清蛋白 (BSA)的培养板上孵育 2 4h ,加入不同浓度的丝裂霉素C(MMC)作用 2h ,用MTT比色法检测作用后不同时间肿瘤细胞的存活率 ,用ANNEXINⅤ流式细胞分析仪检测不同时间肿瘤细胞的凋亡率。结果 :FN黏附的膀胱肿瘤细胞在不同浓度MMC作用 2h、12h和 2 4h后的平均存活率为 6 8.3%、4 5 .7%及 5 9.1% ,与BSA黏附的膀胱肿瘤细胞平均存活率 4 5 .0 %、2 1.3%、2 6 .6 %比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。FN黏附的膀胱肿瘤细胞在不同浓度MMC作用 2h和 12h后平均凋亡率分别为 1.4 %和 1.0 % ,而BSA组的细胞平均凋亡率为4 .9%和 8.2 % ,两组比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :与FN黏附后的膀胱肿瘤细胞对化疗药物MMC的敏感性下降 ,细胞存活率增高 ;FN能抑制MMC引起的膀胱肿瘤细胞凋亡 ,产生药物耐受。

血清乙型肝炎病毒前S1抗原检测在预防性健康体检中的应用

[目的]探讨血清前S1检测在预防性健康体检中的应用价值。[方法]用双抗体夹心ELISA法检测233例健康体检者乙型肝炎病毒（HBV）及正常人血清中HBV前S1抗原（Pre-S1），并将其结果与荧光定量HBVDNA、HBVM及ALT的检测结果进行比较。[结果]在各组HBV感染者中均检出Pre-S1，检出率为20％～75％。HBeAg阳性组中检出率和相对滴度显著高于HBeAg阴性组（P〈0．001）；Pre-S1和HBVDNA检测结果符合率达81．12％，Pre-S1的相对滴度与HBVDNA含量之间呈正相关（r=0．9293，P〈0．001）；HBeAg阴性组ALT异常血清的Pre-S1阳性率高于ALT正常血清（P〈0．05），同是ALT异常，则HBeAg阳性血清的Per-SI阳性率高于HBeAg阴性血清（P〈0．05）。[结论]血清前S1抗原与HBV活动性复制、肝细胞损伤关系密切，可作为健康体检乙型肝炎传染性筛选的重要补充。