br基因的克隆及表达

细菌视紫红质 ( Bacteriorhodopsin,BR)是嗜盐菌细胞膜上唯一的一种光能转换色素蛋白 ,BR以视黄醛 ( retinal)作辅基 ,在光诱导下吸收光子后会产生一系列的光循环中间体 ,最后又回到原始状态 .由于 BR这种独特的分子结构和光循环过程 ,及其作为一种具有光敏特性的蛋白质生物分子 ,可通过生物学技术进行改造 ,正引起光子学研究及生物学研究领域的高度注意 .从 Genbank查询 br基因的全序列 ,然后采用聚合酶链反应 ( Polymerase chain reaction,PCR)技术 ,采用 DNA star软件辅助设计了上下游引物 ,以嗜盐菌 ( H alobactrium H alobium)的基因组 DNA为模板克隆获得了完整的细菌视紫红质基因 br,并且将经测序鉴定的 br基因重组到原核高效表达载体 p GEX- 4 T- 2中 ,转化大肠杆菌 E.coli.,将阳性转化子经 IPTG诱导表达获得 BR与 GST(谷胱苷肽转移酶 )的融合蛋白后 ,提取蛋白进行 SDS-PAGE电泳、Western印迹反应 ,检测表达结果为阳性 ,且表达蛋白的大小与预想的一致 .