小鼠角质细胞生长因子重组腺病毒载体的构建

目的探讨构建表达小鼠角质细胞生长因子（KGF）基因重组腺病毒载体的方法。方法提取小鼠肺组织RNA，经逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）获得cDNA后，PCR扩增目的基因片段。将获得的KGF基因插入载体质粒pShuttle—CMV，构建穿梭质粒pShuttle—CMV—KGF（pKGF）。线性化pKGF后，转化人含AdEasy-1病毒骨架的BJ5183细菌中。筛选正确的同源重组质粒pAdEasy-1-pShuttle—CMV—KGF（pAd—KGF），转染HEK293细胞，产生病毒颗粒AdEasy-1-pShuttle—CMV—KGF（Ad—KGF）。进一步大量扩增病毒，氯化铯梯度离心纯化，测定病毒滴度。制备病毒Ad—GFP为对照，显微镜下观察转染率。结果①经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定，证实pKGF构建成功；②限制性内切酶酶切确定穿梭质粒重组于病毒骨架；显微镜下观察HEK293细胞形态，证实病毒包装复制成功；⑧病毒滴度3．0×10^10pfu／ml，达到进一步体内、外实验要求。结论成功构建了重组腺病毒Ad—KGF，为了解KGF在肺部疾病中的作用以及进一步的基因治疗肺纤维化方法奠定了基础。

间充质干细胞在肿瘤靶向治疗中的应用

间充质干细胞是一种来源于中胚层的非造血干细胞,除干细胞所具有的增殖、自我更新、分化能力外,其还具有低免疫原性和肿瘤趋向性。在对于该细胞的不断研究中,人们利用该细胞的这一特点通过细胞工程学改造,使其成为抗癌细胞因子、溶瘤病毒、化疗药物、转化药物等抗癌成分的载体,利用这一细胞载体逃过机体的免疫监控系统后聚集于肿瘤部位释放抗癌成分而对肿瘤组织进行治疗,为肿瘤的靶向治疗提供了新的方向和希望。