鼠李糖乳酸杆菌对Caco-2细胞抗氧化功能的影响

【目的】研究鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)对氧化应激状态下Caco-2细胞抗氧化功能的影响。【方法】将培养的Caco-2细胞分为4组:对照组和氧化应激组(在培养液中加入100μmol.L-1 H2O2),处理组Ⅰ和处理组Ⅱ在氧化应激条件下分别添加鼠李糖乳酸杆菌(约108 CFU.mL-1)和抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)(2.75μg.mL-1)各1 mL。Caco-2细胞培养至12和48 h时分别测定其上清液和裂解液的抗氧化活性。【结果】添加鼠李糖乳酸杆菌减轻了Caco-2细胞氧化受损,使细胞培养上清中的总抗氧化力(T-AOC)显著高于氧化应激组:12 h时显著提高了细胞培养上清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(P<0.01)、过氧化氢酶(CAT)(P<0.01)活力以及细胞裂解液中超氧化物酶(SOD)活力(P<0.01)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量(P<0.05),48 h时显著提高了细胞培养上清液抗O2-(ASAFR)(P<0.01)、GSH-Px(P<0.01)、CAT(P<0.01)、SOD活力(P<0.01)和细胞裂解液中过氧化物酶(POD)活力(P<0.01),丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01)。添加TBHQ组12 h时细胞上清中T-AOC(P<0.01)和CAT活性(P<0.01)及细胞裂解液中GSH含量(P<0.01)显著高于氧化应激组,而处理48 h后相应指标低于氧化应激组;此时,细胞培养上清液中MDA含量极显著降低(P<0.01),抗O2-、SOD、GSH-Px、POD活力和细胞裂解液中POD活力显著升高(P<0.05)。【结论】在体外条件下,鼠李糖乳酸杆菌可以提高氧化应激状态下Caco-2细胞的抗氧化功能。

鼠李糖乳杆菌对巨噬细胞先天性免疫应答的调节作用

【目的】通过测定先天性免疫效应因子分泌水平的变化,研究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)体外对巨噬细胞先天性免疫应答调节的影响。【方法】将培养好的鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分为4组,分别用PBS(CT组,对照组)、Escherichia coli K88(EC组)和Lactobacillus rhamnosus(LR组)处理12 h,以及先用Lactobacillus rhamnosus预处理1 h,再用Escherichia coli K88处理12 h(LR-EC组)。试验结束时,收集各组的细胞培养液,用ELISA检测TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-8、IL-10,以及PGE2和的含量。【结果】结果表明,CT组(对照组)可产生TNF-α、IFN-γ、IL-8和IL-10,几乎不产生IL-1β、IL-6和IL-12。与对照组相比,EC组TNF-α、IFN-γ、IL-8、IL-10及PGE2和含量均极显著提高(P<0.01),且可大量产生IL-1β、IL-6和IL-12;LR组TNF-α、IFN-γ、IL-10及PGE2和也极显著提高(P<0.01),IL-8显著增加(P<0.05),同样不产生IL-1β和IL-6,但可产生微量的IL-12(P<0.01);LR-EC组所有的促炎细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-12)、趋化因子IL-8和PGE2均极显著高于EC组(P<0.01),但IL-10和含量都显著低于EC组(P<0.01)。【结论】在体外试验条件下,鼠李糖乳杆菌作为益生菌对生理状态下巨噬细胞先天性免疫应答的刺激作用远低于病原菌,不会产生炎症反应,但可极大增强受感染巨噬细胞的促炎免疫应答水平,且可能具有避免过度炎症反应的作用。

乳酸菌对Caco-2细胞分泌APRIL和IL-10的影响

【目的】通过检测促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10的分泌水平来观察屎肠球菌和乳酸乳球菌对肠上皮细胞先天性免疫应答的调节作用。【方法】Caco-2细胞分别和PBS(CT组,阴性对照组)、Escherichiacoli K88(EC组,阳性对照组),Enterococcus faecium(EF组)或Lactococcus lactis(LL组)共孵育2 h,以及先分别和Enterococcus faecium或Lactococcus lactis共孵育1 h,再和Escherichia coli K88共孵育2 h(EF-EC组和LL-EC组)。试验结束时,用ELISA方法检测细胞培养上清中APRIL和IL-10的含量。【结果】结果表明,2株乳酸菌都促进正常状态下的肠上皮细胞分泌促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10,抑制Escherichia coli K88对APRIL分泌的诱导作用,促进Escherichia coli K88感染的肠上皮细胞分泌IL-10。【结论】体外试验条件下,屎肠球菌和乳酸乳球菌能够诱导肠上皮细胞产生先天免疫应答,分泌APRIL和IL-10,抑制大肠杆菌K88引起的促炎反应,表现出抗炎作用。