益生菌帮助动物抵御流感的机制研究进展

流感是一种重要的人畜共患病,高致病性禽流感不仅给我国养殖业带来巨大损失,还严重威胁公共卫生安全。流感病毒能够在猪体内重组并跨越物种屏障进行传播,这给预防流感带来巨大挑战。由于流感病毒的变异速度快,流行的病毒株和疫苗株之间的差异会降低疫苗的效力,因此增强机体对流感病毒的抵抗力显得尤为重要。益生菌具有调节肠道微生物平衡、促进机体健康的作用,对动物机体抵抗流感病毒是有益的。本文综述了益生菌在动物体内抗流感病毒的作用机制,阐明了益生菌可以通过平衡动物肠道菌群组成、调节机体黏膜屏障功能、增强或抑制Toll样受体相关分子信号通路等方式直接或间接干扰病毒的侵袭,为了解不同菌种发挥抗流感的相应机制及开发更有效的抗流感策略提供了科学依据。

基于CRISPR/Cas系统的病原核酸检测技术研究进展

作为一种古老的细菌和古菌免疫系统,规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白[clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein(Cas),CRISPR/Cas]系统现已发展为新兴的热门基因编辑工具,极大地推动了其他多个生物学相关领域的发展。其中,通过结合CRISPR/Cas系统与核酸恒温扩增技术建立了一些新型的高效、灵敏、不依赖仪器设备的检测方法,如DNA内切酶靶向的CRISPR反式报告系统(DNA endonuclease-targeted CRISPR trans-reporter,DETECTR)、特异性高灵敏度的酶报告器系统(specific high-sensitivity enzymatic reporter unlocking,SHERLOCK)等,不但提高了CRISPR/Cas系统在不同应用场景下的检测性能,更进一步激发了其在现场检测中的应用潜力。本文基于近年来被广泛应用的3种CRISPR/Cas系统(CRISPR/Cas9、CRISPR/Cas12a以及CRISPR/Cas13)的生物核酸检测方法,阐述了CRISPR/Cas系统的生物学意义及一般作用原理,并通过回顾以往开展的CRISPR/Cas系统相关的病原检测研究,比较分析了不同检测系统的特点以及在实际应用过程中可能存在的不足,为针对不同病原在不同应用场景下建立更加高效、合理的CRISPR/Cas系统检测方法提供了有益参考。

禽肉弯曲菌污染分析及冷藏条件下失活动力学特征

为了解空肠弯曲菌（Campylobacler jejuni） 和结肠弯曲菌（Campylobacler coli） 在浙江省肉鸡产业链中的污染状况,及其冷藏过程中的失活特征.研究采用多重P C R 方法对肉鸡养殖、屠宰和销售环节中分别采集的肛拭子、屠宰场环境和鸡肉等样品进行检测,平板计数法对人工污染鸡肉进行活菌数检测,用于失活特征分析.结果显示,采集的样品中,C.jejuni和C.coli的检出率分别为4 5 .3 % （ 1 8 2 / 4 0 2 ）和4. 9 % （ 2 0 / 4 0 2 ） ; 其中,养殖环节中的检出率分别为81. 2% （ 6 5 / 8 0 ） 和0 , 屠宰环节中的检出率分别为30. 5% （ 4 8 / 1 5 7 ） 和5. 1%（ 8 / 1 5 7 ） ,销售环节中的检出率分别为41.8%（69/165） 和7. 3% （12/165） .在6 ℃冷藏条件下,鸡肉中的C.jejuni和C.coli失活曲线具有相似的特征,在30 d 贮藏期内, lg r fu 分别下降了1.98和2.19 ;其中,0-14d 细菌数量下降速度较快, 14 - 30 d 细菌数量下降较为平缓.Log-logistic模型相比于W eibull模型对2 种细菌的失活曲线有较好的拟合性.上述研究表明,肉鸡养殖、屠宰和销售环节中均存在着一定程度的空肠弯曲菌和结肠弯曲菌污染,其中,销售环节中检出率髙于屠宰环节;在6℃冷藏条件下,Log-logistic方程作为2 种菌的一级预测生长模型具有较好的拟合性.

捻转血矛线虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cDNA进行均一化处理,再将纯化后的cDNA与线性化的pGADT7-Rec重组构建的文库质粒转化至Y187酵母中,构建出酵母转录激活结构域(activationdomain,AD)文库。结果表明:本研究构建了重组率为100%,插入片段平均长度为1000 bp,工作液细胞密度大于3.5×10^(7)CFU/mL的捻转血矛线虫均一化酵母AD文库;所构建的表达文库各项指标均达标,符合酵母双杂交筛选要求。本文库为捻转血矛线虫的分子机制研究以及疫苗的开发奠定了基础。

捻转血矛线虫胰岛素样肽编码基因的鉴定、表达与组织定位

胰岛素样肽(insulin-like peptides,ILPs)在线虫新陈代谢、信号转导、发育进程等生物学过程中发挥重要作用,是控制动物寄生线虫感染的潜在靶标。为探究ILPs在寄生线虫发育与感染中的具体作用,对捻转血矛线虫(Haemonchus contortus,H.contortus)ILPs编码基因进行全基因组鉴定、序列和进化分析;通过实时荧光定量PCR方法检测H.contortus不同发育时期ILPs编码基因的转录水平;经原核表达ILPs重组蛋白用于多克隆抗体制备及Western blot分析;采用间接免疫荧光定位试验明确ILPs在H.contortus虫体不同发育阶段的组织分布情况。结果显示,与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)相比,H.contortus ILPs编码基因发生显著缩减,仅有3个具备拮抗性分子特性的ILPs编码基因;ILPs编码基因在H.contortus感染性三期幼虫阶段的转录水平最高;ILPs蛋白主要分布于感染性幼虫的肠道与皮下组织。本研究鉴定3个可能参与调控H.contortus幼虫发育进程及感染过程的拮抗性ILPs编码基因,为寄生线虫在宿主体内的滞育现象研究以及潜在干预靶标的筛选奠定了基础。

基于比较基因组学方法的世界范围的犬布鲁氏菌系统发育群研究

犬布鲁氏菌病是一种世界范围内导致家畜流产和人波状热的人畜共患病,最近随着相关宿主动物如犬类饲养数量的增多,家庭儿童的感染案例报道屡见不鲜,所以研究犬布鲁氏菌具有重要公共卫生意义。使用了全球的91个菌株,利用贝叶斯方法对菌株分群,基于core-SNPs和分子钟模型构建进化树进行种群结构和时空分布分析,使用COG功能聚类进行功能差异研究。发现的4个系统发育群(PG)与它们的地理来源显著相关,PG1~3中,存在亚洲到非洲及欧美间的传播;PG4定殖于北美,且耐药基因逐渐缺失。功能基因在4个PG中的存在/缺失谱不同,PG3功能最完整,其他PG各具独特的功能基因缺失,特别是PG2大多缺失ABC型转运系统组分。掌握犬布鲁氏菌在全球的分布和传播,理解其基因组变异有助于开发新的诊断和疫苗靶点,以对抗由犬布鲁氏菌引起的人类流行病。

捻转血矛线虫与胃癌细胞共培养系统建立

为研究宿主感染捻转血矛线虫的早期免疫应答,本试验使用细胞小室建立了捻转血矛线虫-胃癌细胞气液界面共培养系统。捻转血矛线虫在共培养系统中以弦运动和圆运动的方式生活。细胞远红外荧光染色结果显示,线虫以细胞蛋白为食维持基本营养,进食的方式可能为叮咬胃癌细胞后吸食。脱鞘幼虫在体外培养系统中生长发育速度缓慢,共培养0,4,7 d时的虫体长度分别为(981.5±24.3),(1113.9±24.4),(1157.0±47.6)μm,其中7 d时与宿主感染4 d体内的虫体大小相似。捻转血矛线虫和细胞在共培养系统中互相胁迫,随着共培养时间的增加,线虫呈现活力下降和蜷缩状的生理状态,同时贴壁细胞逐渐从胶原板脱落并进入坏死状态。相较于共培养0 d时,共培养4 d时胃癌细胞(MGC)坏死的比例由12.91%增加到53.25%,胃腺癌细胞(BGC)坏死的比例由2.63%增加到24.81%。线虫还能诱导细胞表达大量的IL-33,MGC与线虫共培养4,7 d时IL-33的表达量分别上升至共培养0 d时的2.520,4.180倍;BGC与线虫共培养4,7 d时IL-33的表达量分别上升至共培养0 d时的1.732,5.150倍,这与宿主早期感染时IL-33的高表达一致。本试验为阐明捻转血矛线虫早期感染时宿主的免疫应答分子机制提供了新方法。