CRX基因突变影响视紫红质转录表达和NRL蛋白稳定性的细胞学研究

目的在细胞水平上，探讨存在和缺乏神经视网膜亮氨酸拉链（NRL）的条件下，视锥．视杆细胞同源异形框基因（CRX）突变型对调控视紫红质基因转录表达的影响．并分析CRX突变型对CRX和NRL蛋白稳定性的影响。方法实验研究。分别构建携带野生型和c．C766T（p．Gln256X）无义突变型的CRX基因，以及共表达NRL基因和牛视紫红质基因启动子萤光素酶（pBR130-luc）的表达载体，分别转染体外培养的293T细胞和ARPE-19细胞，再行双荧光素酶检测分析和Western blotting实验。以持家蛋白GAPDH作为内参照。结果与野生型CRX蛋白的表达导致牛视紫红质启动子表达5倍的激活率相比，CRX／c．C766T（p．Q256X）突变所造成的相应激活率降至1／4。共表达野生型CRX和NRL基因后，激活率增高至30倍，而共转染CRX／c．C766T和NRL后，牛视紫红质蛋白的活性降至1／13。以持家蛋白GAPDH作为内参，可见存在CRX／c．C766T突变时，CRX蛋白的稳态水平大幅下降。且CRX／c．C766T突变型对NRL蛋白的稳态有一定的影响，出现NRL增高的现象。结论在细胞水平上，CRX基因的c．C766T（p．Q256x）突变可降低所调控的视紫红质蛋白的表达，并对CRX蛋白和NRL蛋白的稳态均造成一定的影响。