人tPA基因真核表达质粒载体构建及其生物学功能研究

构建携带组织纤溶酶原激活物(tPA)基因真核表达质粒 pcDNA3．1(+)／tPA,并研究其有无生物学活性．用 RT-PCR 法从人心脏组织中克隆 tPA 基因并将其克隆至真核表达质粒 pcDNA3．1(+)中, 对 pcDNA3．1(+)／tPA 进行酶切鉴定和测序．脂质体介导 pcDNA3．1(+)／tPA 转染血管平滑肌细胞, 分别用 Nothern Blot 和斑点印迹法从 mRNA 和蛋白质水平检测 tPA 的表达,并用纤维蛋白板法测定表达产物的生物学活性．成功克隆了人 tPA 基因并构建了 pcDNA3．1(+)／tPA 真核表达质粒, pcDNA3．1(+)／tPA 转染 VSMC 后,tPA mRNA 和蛋白质表达增加,所表达的 tPA 蛋白质具有纤溶活性．