16SrRNA实时荧光定量PCR检测肠道菌群的研究

目的:应用细菌的16SrRNA序列设计双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、大肠杆菌(E.coli)、肠球菌(Enterococcus)的引物并对肠道的这4种细菌菌属进行定量测定,绕过分离培养环节,以微生物rRNA/rDNA基因作为种属鉴别序列,确定肠道菌群的情况。方法:采用腹腔注射链脲菌素(STZ)的方法建立小鼠糖尿病模型,分别检测小鼠肠道主要的菌群。结果:造模成功小鼠血糖升高(>12.3mmol/L,P<0.05)时,肠道益生菌(双歧杆菌,乳酸杆菌)数量降低(P<0.05),而大肠杆菌、肠球菌数量增加(P<0.05)。结论:小鼠糖尿病模型可引起肠道菌群失调,荧光定量PCR是一种特异性高、敏感性强的定量方法,可正确定量肠道中的细菌菌群数量。

磷酸二酯酶4B在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织中的表达与作用

目的观察博来霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中磷酸二酯酶4B(PDE4B)mRNA和蛋白表达随时间的变化,初步探究PDE4B在小鼠肺纤维化过程中的作用。方法采用气道滴入博来霉素2.5 mg·kg-1制备肺纤维化模型,在造模后第3,7,14,21和28天进行支气管肺泡灌洗并留取肺组织。应用细胞形态学方法计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和分类;ELISA法测定BALF中巨噬细胞炎症蛋白2(MIP2)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和转化生长因子β1(TGF-β1)含量;胶原试剂盒测定法测定肺组织胶原含量;髓过氧化物酶(MPO)活性测定试剂盒测定组织匀浆液中MPO活性;实时荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织中PDE4B mRNA表达;免疫组织化学法检测PDE4B的分布。结果博来霉素气道滴入诱导的肺纤维化随时间持续加重,第28天最明显,可见肺组织明显实质化。BALF中白细胞总数、IL-1β和IL-6在造模后第3天达峰值,分别为正常对照组的22.0,2.0和2.8倍;MPO和TGF-β1在第7天达峰值,分别为正常对照组的1.9和5.5倍;胶原含量、MIP-2和PDE4B mRNA表达从造模后呈持续增长趋势,分别为正常对照组的1.6,2.7和2.6倍。免疫组织化学法检测结果表明,PDE4B分布于炎症细胞和纤维化的肺组织。结论PDE4B在肺纤维化中发挥重要作用,可能是一个特异性的药物作用靶点。