留兰香油对大鼠慢性阻塞性肺疾病模型肺组织炎症氧化改变和Nrf2蛋白表达的影响

目的：观察肺炎克雷伯杆菌和脂多糖所致大鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型肺组织炎症氧化改变，以及Nrf2蛋白表达及留兰香油的影响。方法：用经气管滴入脂多糖和肺炎克雷伯杆菌反复感染法12周建立大鼠COPD模型后，留兰香油灌胃治疗3周。观察大鼠COPD模型病理学变化、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞数变化、肺组织匀浆MDA变化、免疫组化检测Nrf2蛋白表达特点，以及留兰香油对其的影响。结果：留兰香油100mg·kg^-1能明显降低BALF中白细胞数，减轻细支气管炎和肺间质炎及炎症细胞浸润；30～300mg·kg^-1能减少肺泡破坏，使细支气管壁变薄以及抑制杯状细胞增生；留兰香油能明显降低肺组织MDA含量，抗氧化效果明显，而且30mg·kg^-1可降低肺组织Nrf2蛋白表达。结论：留兰香油对肺炎克雷伯杆菌和脂多糖引起的大鼠COPD模型的肺部炎症、肺气肿、杯状细胞增生和氧化改变有改善作用，并对肺炎克雷伯杆菌和LPS引起的肺组织Nrf2蛋白表达增强有降低作用。

咯利普兰对大鼠哮喘模型肺组织磷酸二酯酶及IL-4的影响

目的为阐明大鼠哮喘模型肺组织cAMP-PDE活性升高的相关原因和意义,研究了咯利普兰(rolipram,Rol)对大鼠哮喘模型的肺功能、肺组织中磷酸二酯酶(PDE)活性和IL-4含量的影响。方法采用卵白蛋白致敏后重复抗原攻击制备哮喘模型,测定肺功能,肺组织cAMP-PDE活性、PDE4的活性和IL-4含量,分类计数外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞。结果哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE及PDE4活性与正常对照组相比均升高(P<0·05),致敏后重复抗原攻击的哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE活性中PDE4活性比例较高,约占70%。Rol剂量依赖性增加哮喘大鼠肺顺应性,降低肺阻力,抑制增加的哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE和PDE4活性,降低肺组织IL-4含量。以Rol(1mg·kg-1,po)作用最明显。哮喘大鼠的肺组织cAMP-PDE和PDE4活性与IL-4存在相关性(P<0·05)。此外,Rol还能明显抑制哮喘大鼠BALF中和外周血炎症细胞数目,明显抑制BALF中多形核细胞及血中EOS的比例(P<0·05)。结论致敏后重复抗原攻击的哮喘大鼠肺功能明显恶化,肺组织IL-4含量、cAMP-PDE活性明显升高,其中cAMP-PDE活性中以PDE4为主,且cAMP-PDE活性、PDE4活性与肺组织中IL-4密切相关。Rol能有效抑制哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE及PDE4活性的升高,降低IL-4含量,改善肺功能。

蓝桉油对脂多糖引起的大鼠慢性支气管炎及黏蛋白高分泌的影响

目的 :观察蓝桉油对脂多糖引起的大鼠慢性支气管炎及黏蛋白高分泌的影响。方法 :采用一次性气管内注入 0 .2mg脂多糖复制大鼠慢性支气管炎模型 ,观察 3周后的病理学改变、支气管肺泡灌洗液变化、免疫组化特点以及蓝桉油对其的影响。结果 :注入脂多糖后的病理学表现符合慢支的特征。各给药组经不同浓度蓝桉油灌胃后能减少中性粒细胞及淋巴细胞的浸润 ,降低炎症程度 ;尤其是蓝桉油高剂量组 (30 0mg·kg-1) ,能明显减少灌洗液中黏蛋白含量 ,使气管和细支气管上皮内黏蛋白MUC5ac表达的阳性染色区域和程度明显减轻 ,通过图像分析系统测得的吸光度值和黏蛋白面积 %均明显低于模型组。结论 :蓝桉油对脂多糖引起的大鼠慢性支气管炎具有一定的抗炎作用 ,并能抑制其气道黏蛋白高分泌现象。

隐孔菌多糖对肺组织释放白三烯的影响

目的 观察发酵隐孔菌多糖 (以下称隐孔菌多糖 )对豚鼠肺组织释放白三烯及气管Schultz Dale反应的影响。方法 采用生物检定法和反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定致敏豚鼠肺组织抗原攻击释放过敏性慢反应物质 (SRS A)和正常豚鼠肺组织A2 3187攻击释放白三烯D4(LTD4) ,以及用致敏豚鼠气管Schultz Dale法检测隐孔菌多糖的抗变态反应活性。结果 隐孔菌多糖明显减少抗原攻击致敏豚鼠肺组织SRS A释放量和A2 3 187攻击正常豚鼠肺组织LTD4释放量 ;抑制致敏豚鼠气管Schultz Dale反应 ,IC50 =0 4 9g·L-1。

甘草酸单铵对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)气道滴入诱导小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型,研究甘草酸单铵(monoammonium glycyrrhizinate,MAG)对ALI的防治作用及其机制。雄性ICR小鼠随机分为生理盐水(NS)对照组、MAG 3、10及30 mg.kg-1组、LPS组、地塞米松(dexamethasone,DXM)5 mg.kg-1组。MAG各组气道滴入LPS前1 h及滴入后3 h各给药1次,DXM组气道滴入LPS前1 h给药1次。LPS气道滴入后6 h处死动物,测定各组的肺湿重/干重比、肺通透性、肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量、ELISA法检测肺组织匀浆TNF-α、IL-10含量,常规细胞形态学检测中性粒细胞在支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的比例和肺组织病理改变。结果表明,MAG剂量依赖性减轻气道内滴入LPS诱导的小鼠ALI程度,降低肺湿重/干重比及肺组织伊文斯蓝的渗出,降低BALF中白细胞总数和中性粒细胞数比例,抑制组织MPO的释放,降低肺组织匀浆TNF-α的含量,增加肺组织IL-10的释放。以上结果提示,MAG可能通过调节TNF-α/IL-10的平衡而有效保护脂多糖诱导的急性肺损伤。

吡拉米司特在大鼠急性肺损伤模型中降低PDE4活性与TNF-α/IL-10平衡有关

目的观察PDE4活性与TNF-α/IL-10平衡在脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤模型(ALI)中相互关系,探讨选择性磷酸二酯酶4抑制剂吡拉米司特(piclamilast)对ALI的作用及机制。方法脂多糖(LPS)诱导大鼠ALI模型,设对照组、模型组、吡拉米司特组(1、3、10mg.kg-1)和地塞米松组(1mg.kg-1),常规细胞形态学检测肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中中性粒细胞的浸润情况,比色法测定BALF中超氧阴离子自由基(O2.)和中性粒细胞髓过氧化酶(MPO),ELISA法检测肺组织中TNF-α和IL-10含量,高效液相(HPLC)法测定肺组织中PDE4活性。结果①吡拉米司特(1、3、10mg.kg-1)灌胃给予能够抑制BAL中MPO、O2.的增加,改善LPS诱导的大鼠ALI模型BALF中的炎症细胞聚集和肺水肿程度,②吡拉米司特可抑制LPS诱导的大鼠ALI肺组织TNF-α上升(P<0.05～0.01),并能明显提高LPS引起的大鼠ALI肺组织IL-10分泌下降,③大鼠ALI模型肺组织中PDE4活性明显上升(P<0.01),吡拉米司特预处理可抑制PDE4活性的上升,而且其对PDE4活性抑制性变化与TNF-α/IL-10比值的变化基本一致。地塞米松1mg.kg-1也能降低TNF-α和升高IL-10水平,调节TNF-α/IL-10平衡关系,但DXM不能抑制PDE4活性的升高。结论TNF-α/IL-10可能是ALI病理生理学的一对重要的平衡性细胞因子。吡拉米司特可能通过抑制PDE4活性,调节TNF-α/IL-10平衡改善LPS诱导的大鼠ALI。

虫草菌粉对致敏豚鼠肺功能和大鼠气道炎症反应的影响

目的 :探索人工发酵虫草菌粉防治支气管哮喘方面的新用途。方法 :测定肺功能和肺灌流液中嗜酸性粒细胞变化。结果 :虫草菌粉 5 g·kg-1对致敏豚鼠抗原攻击引起的肺阻力增高和动态肺顺应性降低以及致敏大鼠肺灌流液中嗜酸性粒细胞增多都有明显抑制作用 (P <0 .0 5 )。结论

枇杷叶三萜酸的抗炎作用

目的研究枇杷叶三萜酸(TAL)对急、慢性炎症的抑制作用。方法采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性实验、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和福氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型,观察TAL的抗炎作用。结果TAL(75、225、675mg/kg)ig给药对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀和冰醋酸引起的腹腔毛细血管渗出有明显的抑制作用;TAL(50、150、450mg/kg)ig给药可明显减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和AA大鼠的原发性、继发性炎症病变。进一步研究表明,TAL(0.05、0.5、5、50mg/L)体外给药可增加ConA、LPS诱导的AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生,同时抑制AA大鼠PMФ产生过高的IL-1。结论TAL具有良好的抗炎作用。

良园枇杷膏对咳嗽反射和纤毛运动的作用

目的 :评价良园枇杷膏对咳嗽反射抑制和对纤毛运动的增强作用。方法 :用枸橼酸引咳法和辣椒素引咳法观察枇杷膏对豚鼠和小鼠的镇咳作用 ;用小鼠气道酚红排泄法和蛙上腭纤毛运动法观察枇杷膏的祛痰作用。结果 :镇咳作用 :枇杷膏 2 .5 g/ kg和 7.5 g/ kg(ig)明显减少枸橼酸引起的豚鼠咳嗽次数 ,6 .6 g/ kg和 13.2 g/ kg(ig)明显减少辣椒素引起的小鼠咳嗽次数 ,ID50 (95 %可信限 )分别为 2 .6 4(1.12～ 6 .19) g/ kg和 11.4 0 (5 .76～ 2 2 .5 8) g/kg。祛痰作用 :枇杷膏 6 .6 g/ kg和 13.2 g/ kg(ig)明显增加小鼠气道酚红排泄量 ,ED50 (95 %可信限 )为 7.70 (4.6 2～12 .83) g/ kg,0 .11× 10 -4g/ L～ 2× 10 -4g/ L呈剂量反应 ,增加蛙上腭纤毛运动 ,EC2 5(95 %可信限 )为 1.0 7× 10 -4(0 .394～ 2 .92× 10 -4) g/ L。结论

蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响

目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜 ,测定 THP- 1细胞 NF- κB p6 5亚基 (NF- κB/p6 5 )定位 ;Western- blot法分析细胞核内NF- κB/p6 5水平。结果 :免疫荧光分析显示 ,正常细胞 NF- κB/p6 5荧光标记主要分布于胞浆区 ,核区很少 ,L PS刺激后 NF- κB/p6 5荧光标记浓集于核区 ,胞浆区少见 ;但经蓝桉油 (10 0 mg/L)预处理后 ,LPS刺激的 THP- 1细胞NF- κB/p6 5荧光标记则主要位于胞浆区 ;Western- blot分析显示 ,在正常 THP- 1细胞核蛋白中有低水平的 NF- κB/p6 5表达 ,经 L PS刺激 ,核内 NF- κB/p6 5表达明显增高 ;蓝桉油预处理后 ,可以抑制 LPS诱导的核内 NF- κB/p6 5高水平表达 ,且呈剂量依赖关系。结论 :蓝桉油预处理阻止了 LPS诱导的 NF- κB/p6 5核转位 ,从而抑制了其活性功能的发挥。蓝桉油可抑制 LPS刺激引起的 NF- κB核转位活化。

大鼠急性肺损伤模型肺组织中磷酸二酯酶4活性的变化

目的观察磷酸二酯酶4(PDE4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和炎症细胞浸润在急性肺损伤过程中的变化规律,以及它们之间的相关性。方法脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI),高效液相法(HPLC)测定肺组织PDE4活性、ELISA法检测TNF-α含量,常规细胞形态学检测中性粒细胞在支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中的浸润变化。结果气道内滴入LPS,1 h后肺组织中PDE4活性开始增加,6 h达到峰值,与对照组相比(P<0.01),24 h后开始回落。支气管肺泡灌洗液(BALF)的白细胞总数和中性粒细胞数的变化与PDE4活性变化相关(r=0.83,P<0.05),2 h后开始增加,6 h达到峰值,48 h后回落接近滴入LPS前。肺组织匀浆的TNF-α含量在LPS滴入后迅速上升,2 h达到峰值,24 h后开始回落,其上升先于前两者。在LPS滴入6 h测定抗超氧阴离子自由基(O.2)和中性粒细胞髓过氧化酶(MPO)水平也明显上升。给予PDE4抑制剂RP73-401(piclamilast)后,肺组织中PDE4活性与TNF-α含量均下降,肺部炎症也得到改善,与损伤后6 h相比差异有显著性(P<0.01)。结论气道内滴入LPS后肺组织中PDE4活性迅速上升,并与TNF-α上升有一定的相关性,运用PDE4抑制剂后,二者水平均明显降低。PDE4和TNF-α升高可能诱导中性粒细胞聚集和过氧化反应的因素,提示PDE4抑制剂可能是一个治疗ALI的重要靶点。

LPS致大鼠急性肺损伤TLR_4的表达及蓝桉油的影响

目的:观察正常大鼠气道TLR4的分布,LPS对大鼠气道TLR4分布以及蓝桉油对TLR4表达的影响。方法:气管内注入LPS复制大鼠急性肺损伤模型,观察72 h后的病理变化、支气管肺泡灌洗液中细胞总数的变化、免疫组织化学特点以及蓝桉油的影响。结果:免疫组化结果显示TLR4在正常组大鼠气道内有广泛分布。急性肺损伤组大鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数明显增高,病理结果显示支气管、肺内炎症程度均明显高于正常组,免疫组化结果显示主支气管和肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达明显增强。蓝桉油300 mg.kg-1组支气管肺泡灌洗液中白细胞总数明显低于急性肺损伤组,病理结果显示气管和主支气管的炎症程度明显减轻,免疫组化提示肺内细支气管上皮细胞内TLR4的表达量减少。结论:TLR4在大鼠气道内广泛分布,LPS刺激可使TLR4的表达增强,蓝桉油可降低由LPS引起的肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达的增高。

辣椒素吸入小鼠咳嗽模型和记录装置的建立

目的 建立辣椒素气雾吸入小鼠咳嗽模型及咳嗽记录装置。方法 用超声雾化器气雾辣椒素 (0 1mmol·L-1)15s引起小鼠咳嗽 ,MedLab生物信号采集处理系统记录咳嗽次数。结果 小鼠 3min内的咳嗽次数为 16 8± 5 0 (n=6 5 )。可待因预先灌胃给药后 ,减少咳嗽次数 ,ID50 95 %可信限为 9 6 9(7 5 6～ 12 42 )mg·kg-1;非镇咳药盐酸麻黄碱2mg·kg-1和 4mg·kg-1预先灌胃无作用。结论 椒素吸入小鼠咳嗽模型是一个很好的筛选镇咳药物模型。通过小鼠咳嗽记录装置可以客观观察试验结果。

环孢素A气雾吸入对致敏大鼠气道高反应性的影响

目的 评价环孢素A气雾吸入给药对致敏大鼠气道高反应性的影响。方法 用氯化乙酰甲胆碱 (Mch)诱导抗原攻击后的致敏大鼠气道阻力 (Raw)、肺动态顺应性 (Cdyn)、PC50 和PC2 5变化 ,观察环孢素A气雾吸入给药后的抗气道高反应性作用。结果 环孢素A 5 ,2 0g·L- 1 气雾吸入给药 ,色甘酸钠 2 0g·L- 1 气雾吸入给药和地塞米松 (0 5mg·kg- 1 ,ip)抑制Mch诱导的大鼠Raw 增高及Cdyn降低 ,增加RawPC50 和CdynPC2 5值。结论 环孢素A气雾吸入给药能预防Mch引起的大鼠气道高反应性 ,是其治疗哮喘的一个有效途径。

蚯蚓中平喘蛋白组分的提取分离及其作用机制的初探

目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP2)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP2)。采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评价EP2对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP2拮抗白三烯D4引起豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应;同时应用双向凝胶电泳-质谱技术对蛋白组分EP2进行了初步分析鉴定。结果在整体试验中,EP216.8mg.kg-1口含吞服预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和Cdyn下降,作用稍弱于阳性对照药孟鲁司特;在离体试验中,EP2能明显拮抗白三烯D4收缩气管平滑肌的作用,作用强度与孟鲁司特接近;双向凝胶电泳-质谱技术分析证明蛋白组分EP2中含有蚯蚓种属中的蛋白F-I-0、F-I-1以及纤溶酶组分A,均为丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族成员。结论EP2具有平喘作用,作用靶点可能通过拮抗白三烯受体,提示EP2的有效成分可能是白三烯拮抗剂。

隐孔菌多糖成分对致敏大鼠气道高反应性和炎症细胞的影响

目的 :研究隐孔菌多糖成分对大鼠气道高反应性的影响 ,初步探索其作用机制。方法 :采用卵白蛋白致敏雾化吸入攻击制备大鼠哮喘模型 ,隐孔菌多糖成分 A、B(5 mg/ kg、2 0 mg/ kg)和酮替芬 (5 mg/ kg)及溶媒对照(等量生理盐水 )灌胃 10 d。用甲酰胆碱激发气道高反应性后 ,行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗 ,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类 ,和腹腔灌洗液中脱颗粒肥大细胞及白细胞分类。结果 :隐孔菌多糖成分 A、B均能明显抑制致敏大鼠抗原攻击后气道阻力的增加及肺顺应性的下降 ;减少支气管肺泡灌洗液中白细胞总数 ,降低嗜酸细胞的数目 ,以多糖 B作用更明显 ;多糖 A和多糖 B也明显抑制腹腔肥大细胞脱颗粒及腹腔嗜酸性粒细胞的渗出。结论 :隐孔菌多糖 A、B成分抑制大鼠的气道高反应性 ,其作用可能与稳定肥大细胞膜、抑制嗜酸细胞炎症和趋化有关。

鲜鱼腥草提取物对脂多糖所致小鼠肺部炎症的影响

目的研究鲜鱼腥草提取物对脂多糖所致小鼠肺部炎症的影响。方法采用ICR小鼠鼻滴脂多糖(LPS)建立肺部炎症模型,检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数和病理学观察肺组织炎症程度。结果鲜鱼腥草提取物40～400mg·kg-1可减少小鼠LPS所致的BALF中白细胞增高,还可减轻肺组织病理炎症细胞浸润。结论鲜鱼腥草提取物可以减轻LPS所致的小鼠肺部炎症反应,减少炎症细胞浸润。提示鲜鱼腥草提取物对脂多糖所致小鼠肺部炎症有抑制作用。

麻黄碱与总皂苷对豚鼠气管平滑肌松弛的协同作用

目的 探讨麻黄碱与总皂苷在平喘作用方面有无协同作用。方法 将麻黄碱与总皂苷分成麻黄碱 +总皂苷组、总皂苷组和麻黄碱组进行离体豚鼠气管平滑肌松弛作用强度比较。结果 麻黄碱 +总皂苷组直接松弛豚鼠离体气管平滑肌的作用强度是麻黄碱组的 3 5倍 (P <0 0 5 ) ,总皂苷组无作用 (P >0 0 5 )。麻黄碱 +总皂苷组对氨甲酰胆碱(carbamylcholine,CCH)引起气管平滑肌收缩反应的解痉强度与麻黄碱组相同 ,但两者都比总皂苷组强 (P <0 0 5 )。麻黄碱 +总皂苷、麻黄碱和总皂苷组预先处理气管平滑肌均呈浓度依赖抑制CCH收缩反应 ,三者之间的作用强度无差异。结论 总皂苷对麻黄碱在直接松弛气管平滑肌和抑制CCH引起的气管平滑肌收缩方面具有明显的协同作用 。

哮喘大鼠肺与大脑皮层的白三烯B_4含量和白三烯A_4水解酶的mRNA表达上升

目的 :观察抗原攻击的哮喘大鼠肺组织和大脑皮层的 LTB4含量及其合成酶 m RNA表达量的变化。方法 :用卵白蛋白致敏大鼠 ,抗原攻击后 ,用反向高效液相法 (RP- HPLC)测定肺组织和大脑皮层匀浆的 LTB4含量。用半定量 RT- PCR法检测 LTA4水解酶 m RNA的表达量。结果 :哮喘大鼠肺组织和大脑皮层匀浆中的 LTB4含量显著高于正常对照组 ,其 L TA4水解酶 m RNA的表达也明显提高。地塞米松 (DXM,0 .5 mg/ kg,ip)可以减少 L TB4含量的增加 ,抑制 LTA4水解酶 m RNA的表达。结论 :哮喘大鼠肺组织和大脑皮层的 LTB4含量及其合成酶的 m R-NA的表达同步增高 ,提示哮喘时中枢神经系统对肺组织可能有神经免疫调节作用。