嘉兴市城区空气微生物污染状况调查

目的 观察嘉兴市城区空气微生物污染状况。方法 于2002年9月30日～10月29日在嘉兴市中心某采样点进行为期30天的空气采样,每天3次,采样高度为距地面1.5m处。用中国科学院生态中心推荐使用的空气微生物评价标准评价空气微生物污染状况。结果 空气细菌和霉菌计数分别为568～4630cfu/m^3和507～5347cfu/m^3,分别占空气微生物总数的47.4％和52.6％。霉菌包括耐高渗透压霉菌(37.9％)和马丁霉菌(14.7％)。细菌的优势菌株为芽胞杆菌(37.6％)和葡萄球菌(36.4％),耐高渗透压霉菌和马丁霉菌的优势菌株均为青霉属(62.5％、61％)。细菌以G^+菌为主(占77.8％)。空气样本中,耐高渗透压霉菌和马丁霉菌含量达污染级以上分别为66.7％和20％。结论 嘉兴市城区空气微生物污染尤其是霉菌的污染较重。

小儿常见感染菌16S-23S rRNA基因区间的分子生物学研究

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)加限制性内切酶片段长度多态性 (RFLP)分析在细菌rDNA区间检测中的应用。方法 以 16S 2 3SrRNA基因区间为靶序列 ,设计引物 ,选择合适的内切酶 ,采用PCR法加RFLP法检测标准菌株及临床菌株的rDNA区间。结果 2 6株不同的标准菌株经PCR扩增后 ,分别出现一条带 ,两条带 ,三条带及多条带的不同DNA图谱 ,敏感性试验可检出 2 .5CFU的细菌 ,与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应。其中 14种菌经一步PCR扩增即可区分。另 12种菌除肺炎克雷伯氏菌与坚韧肠球菌经HinfI或AluI酶切后仍不能区分外 ,其余经其中一内切酶酶切后均能区分。 32例血培养阳性标本均扩增出与相应标准菌株相一致的图谱。结论 16S 2 3SrRNA区间基因PCR扩增加RFLP技术检测细菌rDNA区间 ,具有特异、敏感、快速、准确的特点 ,为细菌感染的病原诊断提供新的科学依据。

健康及炎症种植体龈下厌氧菌群的比较研究

目的 :为了探讨种植体周围炎的病因及发病机制 ,明确其龈下优势厌氧菌群。方法 :运用厌氧培养技术 ,对 33例 39颗种植体周围炎病例及 2 0例 2 2颗健康种植体的龈下厌氧菌进行分离鉴定。结果 :两组厌氧菌检出率分别为 89 7%与6 3 6 % ,有显著性差异 (p <0 0 5 )。结论 :本文认为种植体周围炎是种植后细菌再定植过程中的一种菌群失调症 。

C-erbB-2表达与乳腺癌神经内分泌分化关系的研究

目的 观察乳腺癌伴有神经内分泌细胞 (NE细胞 )分化与 C- erb B- 2表达以及 DNA定量与 C- erb B- 2表达的关系。方法 用免疫组化法 (L SAB)对 131例乳腺癌进行铬粒素 (chromogranin)及 C- erb B- 2表达检测 ,以经典的 Feulgen染色法及图像分析技术对 38例浸润导管癌进行 DNA定量分析。结果 NE细胞阳性乳腺癌 C- erb B-2阳性表达率为 37.5 %及表达强度 (++～ +++) 33.3%均明显低于 NE细胞阴性肿瘤的 6 2 .6 %和 6 8.7% (P<0 .0 5 ,P<0 .0 5 )。在浸润性导管癌 ,C- erb B- 2阳性表达乳腺癌的积分光密度、DNA指数 DNA主干系峰值、峰型 >5 C异倍体细胞数以及异倍体率均明显高于 C- erb B- 2阴性肿瘤 (P<0 .0 5 )。结论 (1) NE细胞阳性的乳癌 C- erb B-2阳性表达率及其表达强度均明显低于 NE细胞阴性肿瘤 ,提示伴有神经内分泌分化的乳腺癌恶性度较低 ,预后好。 (2 ) DNA的定量研究 ,显示在同类型浸润性导管癌中 ,C- erb B- 2表达阳性者肿瘤 DNA含量较阴性者高。

器官移植受者人巨细胞病毒糖蛋白H基因型分析

目的分析器官移植受者人巨细胞病毒(HCMV)临床分离株糖蛋白H基因型,为进一步研究其致病性、免疫性以及研制HCMV亚单位疫苗提供依据。方法以巢式聚合酶链反应(nested-PCR)检测97例器官移植受者外周血细胞中的巨细胞病毒gH基因并测序分型。结果有23例移植受者的标本经nPCR检出gH基因阳性,阳性率为23.71%,其中骨髓移植受者阳性率10.31%,肝移植受者阳性率5.15%,肾移植受者阳性率8.25%。在23例HCMV分离株中,20例得到gH基因型结果,其中gH1型10例,占50%,gH2型6例,占30%,gH1、2混合型4例,占20%,呈散在分布(χ2=4.00,P>0.05);gH基因型在各移植类型间也呈散在分布(χ2=5.652,P>0.05)。结论HCMV临床分离株糖蛋白基因分别属于gH基因型1～2型,呈散在分布。

骨髓移植受者巨细胞病毒感染的研究

目的 探讨巨细胞病毒在骨髓移植受者中的感染状况。方法 应用酶联免疫吸附反应方法、免疫组化方法及多聚酶链反应术后同步测定 3 0例骨髓移植受者的抗巨细胞病毒抗体、巨细胞病毒抗原和巨细胞病毒核酸 ,共 2 71例次。结果 骨髓移植受者的抗CMVIgG和抗CMVIgM阳性率分别为 10 0 %和 1 8% ;CMV Ag阳性细胞数平均为 5 1± 3 9/5× 10 4WBC ,阳性率为 3 6 2 % ;CMV DNA的阳性率为 42 4%。两者同时阳性共86份 ,占 3 1 7%。结论 骨髓移植受者术后存在不同程度的CMV感染。临床上同步开展CMV抗体。

幽门螺杆菌CagA C-端功能域特征及其生物学功能研究

目的 克隆源自临床分离的幽门螺杆菌 (Hp)菌株CagADNA序列 ,比较其C 端氨基酸序列与国外菌株的差异 ,并分析其磷酸化能力和转染胃上皮细胞后的生物学功能。方法 从 39株临床分离的HpDNA基因组中用PCR方法扩增cagAC 端DNA ,经琼脂糖凝胶电泳后割胶回收DNA片段进行测序。分别构建cagA的原核细胞和真核细胞表达载体并进行CagAC 端氨基酸磷酸化能力测定。 结果 有 38株菌株检测到CagADNA片段 ,CagA阳性率为 97.4 % (38/ 39)。测序后发现 ,克隆的 38株阳性菌株CagA蛋白均仅含 1个重复序列和 2～ 4个串联的谷氨酸 脯氨酸 异亮氨酸 酪氨酸 丙氨酸(EPIYA)序列 ,且在重复序列的D2区氨基酸序列均为天冬氨酸 苯丙氨酸 天冬氨酸 (DFD)。来自胃癌和非胃癌患者的CagA蛋白串联的EPIYA序列数目差异无显著性。用原核细胞表达的CagA蛋白进行体外磷酸化试验 ,重复序列中的酪氨酸能被磷酸化 ,其余的在EPIYA中的酪氨酸也能被磷酸化 ,但转染的AGS细胞株中仅重复序列中的酪氨酸能被磷酸化。在转染AGS细胞株后少数细胞 (<10 % )因骨架重构而出现典型的“蜂鸟”样改变 ,与直接用Hp感染AGS细胞时类似 ,且对转染的AGS细胞再用Hp感染后 ,其“蜂鸟”样细胞的百分比也无明显增加。

心肺移植患者巨细胞病毒耐更昔洛韦基因突变研究

目的 建立并应用人巨细胞病毒 (HCMV)行列探针检测 (LiPA)技术 ,快速检测心肺移植患者HCMV耐更昔洛韦 (GCV)基因突变。方法 以HCMV UL97基因为靶序列 ,设计 13条特异性寡核苷酸探针 ,用Nested PCR扩增目的基因 ,LiPA技术检测与耐药有关的碱基突变。并对Nested PCR产物平行做直接序列测定 ,与LiPA结果比较。结果 16例心肺移植患者 ,LiPA技术检测发现 4例患者存在HCMV UL97基因突变 ,突变分别发生在编码子 5 2 0 ,5 95及 6 0 3,与直接序列测定比较 ,两者完全吻合。结论 长期应用GCV预防及治疗HCMV感染可以诱导病毒耐药 ,LiPA技术可作为检测HCMV基因突变的一种有效手段。

聚合酶链反应加限制性内切酶多态性分析快速诊断细菌感染的临床研究

目的 探讨细菌 16S 2 3SrRNA基因区间检测在临床细菌感染病原诊断中的应用价值。方法 以 16S 2 3SrRNA基因区间为靶序列 ,在其保守序列内设计共同引物 ,对临床新生儿败血症 (42例 )血标本及疑似化脑 (6例 )患儿的脑脊液标本进行PCR扩增及进一步的RFLP分析 (聚合酶链反应加限制性内切酶长度多态性分析 ) ,参照已建立的常见菌种的特异 16S 2 3SrRNA基因区间图谱以诊断病原菌 ,同时用血培养法作为对照。结果 42例新生儿败血症血培养 15例阳性 ,阳性率为 35 7% ;2 7例PCR检测阳性 ,阳性率为 6 4 3 % ,PCR阳性率明显高于血培养 (P <0 0 1)。血培养阳性的 15例中 14例PCR检测阳性 ,两者菌种相符。 15例正常对照组的血标本其血培养及PCR检测均阴性。 6例脑脊液标本 ,其中 1例培养为表皮葡萄球菌 ,经PCR检测也为葡萄球菌 ;2例培养阴性 ,经PCR检测图谱分析为葡萄球菌 ;1例培养为新型隐球菌的脑脊液标本PCR检测阴性 ;另 2例培养及PCR检测均阴性。结论 运用PCR RFLP法检测细菌 16S 2 3SrRNA基因区间具有特异、敏感、快速、准确的特点 ,为临床细菌感染的病原诊断提供新的方法。

芩连合剂拮抗幽门螺杆菌延缓胃溃疡愈合作用及机制研究

[目的]探讨芩连合剂对幽门螺杆菌(Hp)延缓乙酸性胃溃疡愈合的治疗作用及其机制。[方法]在乙酸诱导大鼠实验性胃溃疡模型的基础上,感染NCTC 11637株Hp,造成慢性胃溃疡模型,运用原位杂交等技术观察芩连合剂对Hp感染的慢性胃溃疡大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)mRNA、诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)mR-NA等指标的影响。[结果]Hp加乙酸组和乙酸组均出现明显溃疡,芩连合剂高、中、低剂量组与Hp加乙酸组相比溃疡底部及周围胞质中bFGF mRNA表达均明显增强i、NOS mRNA均表达减少。[结论]芩连合剂能有效拮抗NCTC 11637株Hp对慢性胃溃疡的延缓愈合,其作用机制与该方促进溃疡周围bFGF合成增加,抑制iNOS活性等有关。

肾移植受者中CMV感染的检测

目的 探讨巨细胞病毒 (Cytomegalovirus,CMV)在肾移植受者中的感染状况。方法 应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)、免疫组化方法及聚合酶链反应技术测定 167例肾移植受者的CMV抗体、抗原和CMVDNA。结果 肾移植受者的抗CMVIgG和抗CMVIgM阳性率分别为 98 8%和 1 8% ;CMV抗原阳性细胞数平均为 (3 2± 3 1) 5× 10 4WBC ,阳性率为 47 3% ;CMVDNA的阳性率为 5 0 9%。结论 肾移植受者术后存在不同程度的CMV感染。临床上开展CMV抗体。

聚合酶链反应-反向杂交快速检测巨细胞病毒糖蛋白gB、gH基因型变异

目的 建立一种简便、快速、敏感和特异的检测巨细胞病毒 (HCMV)糖蛋白gB、gH基因型变异的方法。方法 以HCMV糖蛋白基因gH、gBn、gBclv为靶序列 ,设计 17条具有型特异性的寡核苷酸探针 ,聚合酶链反应 (PCR)扩增目的片段 ,反向杂交检测 2 3例中国和 6例德国移植患者HCMVgH、gBn、gBclv基因型变异 ,其结果与直接测序进行比较。结果 2 3例中国患者HCMV糖蛋白为gH1和 2型 ,gB1、2和 3型 ,未见gB4型 ;而 6例德国患者的HCMV糖蛋白涵盖gH1和 2型 ,gB1、2、3及 4型。中、德两国患者均可同时感染 2种不同基因型的病毒株。反向杂交技术对检测患者同时感染不同基因型病毒株优于直接测序。结论 PCR 反向杂交技术具有简便、快速、敏感和特异的特点 ,适用于临床实验室检测HCMV糖蛋白基因型变异。

巢式聚合酶链反应和pp65抗原检测早期诊断巨细胞病毒感染

目的 比较人巨细胞病毒 (HCMV)巢式聚合酶链反应 (nPCR)与抗原pp6 5血症检测技术在活动性HCMV感染中的早期诊断价值。方法 以 18例器官移植病人为研究对象 ,收集术后 2～ 12周抗凝血标本 ,分别采用nPCR和血pp6 5抗原检测技术 ,观察两者的敏感性、相符率以及在早期诊断活动性HCMV感染中的作用。结果 18例移植病人的 114份系列血标本 ,nPCR检测阳性 97份 ,pp6 5抗原检测阳性 87份 ,两者均阳性 76份 ,nPCR比血pp6 5抗原检测更敏感 ,两者相符率为 6 6 %。结论 nPCR和血pp6 5抗原检测技术均能作为器官移植病人活动性HCMV感染早期诊断的有效手段 ,两者同时使用能更有效地提高诊断水平 。