肺结核病原体和易感因素及结核分枝杆菌优势耐药谱分析

目的了解县镇地区肺结核流行现状及其易感因素、结核分枝杆菌耐药谱和优势耐药组合模式.方法采用罗氏培养基和PNB/TCH生长试验,对杭州市周边7个县镇临床诊断为肺结核的2840例初治和712例复治患者抗酸染色阳性痰标本进行分枝杆菌分离培养和菌种鉴定.采用浓度比例法,检测3152株结核分枝杆菌对链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RIF)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFX)和卡那霉素(KM)的敏感性.采用统计学方法分析结核分枝杆菌优势耐药模式以及肺结核易感因素.结果3552株分枝杆菌中,88.7%(3152/3552)为结核分枝杆菌,11.3%(400/3552)为非结核分枝杆菌,复治患者非结核分枝杆菌感染率(23.7%)显著高于初治患者(8.1%)(χ^2=138.67,P<0.05).3152株结核分枝杆菌对6种抗结核药物总耐药率为25.1%,对一线抗结核药物耐药、耐多药和广泛耐药率分别为15.9%、4.6%和0.2%,其中SM(χ^2=50.40,P<0.05)和INH耐药率较高(χ^2=47.81,P<0.05).结核分枝杆菌有35种耐药谱,优势耐药组合模式分别为INH+SM(χ^2=19.19,P<0.05)、INH+RFP+SM(χ^2=24.85,P<0.05)和IHN+RFP+SM+EMB(χ^2=20.11,P<0.05).来自复治患者的结核分枝杆菌总耐药、一线抗结核药物耐药、耐多药和广泛耐药率(38.3%、36.1%、14.0%和0.9%)均显著高于初治患者(22.3%、19.3%、2.7%和0.04%)(P<0.05).本地户籍60岁以上男性农民肺结核发病率显著较高(χ^2=1435.29,P<0 05).结论本县镇地区肺结核疫情防控形势依然严峻,老年男性农民是肺结核易感人群,复治肺结核患者非结核分枝杆菌感染率以及结核分枝杆菌耐药性显著高于初治肺结核患者,提示县镇地区肺结核患者抗结核药物规范化治疗有待加强.

引起儿童呼吸道感染的优势肠道病毒及其血清型和流行特征分析

目的了解近年杭州地区引起儿童呼吸道感染的优势肠道病毒(EVs)及其血清型以及流行特征和易感人群。方法收集2016-2018年本地区2164例发热伴呼吸道感染症状患儿咽拭标本,采用EVs通用引物的实时荧光定量RT-PCR检测EVs核酸,阳性标本采用EVs VP1/VP2基因通用引物的套式PCR扩增后测序分型。分析患儿性别、年龄、感染的优势EVs及其血清型等流行病学特征。结果2164例患儿咽拭子标本中有508例(23.5%)EVs核酸阳性,其中290例成功测序分型。检出的EVs中,柯萨奇病毒A组(CoxA)和B组(CoxB)分别占75.2%和11.7%、EV71占8.9%、埃可病毒(Echo)占4.1%,CoxA检出率高于CoxB、EV71和埃可病毒(P<0.05)。在检出的CoxA中,CoxA6(39.5%)和CoxA10(33.0%)检出率高于CoxA16、CoxA4和CoxA2(P<0.05)。1~3岁男性儿童是EVs易感人群(P<0.05),其中男性儿童易感CoxA6、女性儿童易感CoxA10(P<0.05)。结论EVs是本地区儿童呼吸道感染的重要病原体,柯萨奇病毒及其CoxA6和CoxA10分别是优势EVs和血清型,1~3岁儿童是本地区EVs主要易感人群,男性比女性更易感。

肺炎链球菌耐药分子机制的研究进展

肺炎链球菌感染可引起细菌性肺炎、中耳炎和脑膜炎等疾病,临床上常采用β-内酰胺类抗生素、大环内酯类和喹诺酮类抗生素进行治疗。近年来,肺炎链球菌感染性疾病发病率不断升高,究其原因主要是耐药或多重耐药菌株日趋流行。肺炎链球菌不产β-内酰胺酶,该菌对β-内酰胺类抗生素耐药主要是青霉素结合蛋白(PBPs)突变,其次是与PBPs突变无关的调控感受态ComD/ComE二元信号传导系统(TCSS)以及调控细胞壁合成或完整性的CiaH/CiaR-TCSS和StkP-PhpP信号偶联相关基因突变。肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制主要是ErmB甲基化酶对药物作用的核糖体靶点甲基化修饰和MefA/E药物外排泵功能增强。肺炎链球菌对喹诺酮类抗生素的耐药机制是DNA回旋酶和/或拓扑异构酶Ⅳ中喹诺酮类耐药决定区域(QRDR)变异和药物外排作用增强。肺炎链球菌19F和19A血清型在中国优势流行且对多种抗生素耐药。

问号钩端螺旋体LA_2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究

目的了解问号钩端螺旋体LA_2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和磷脂酶A2(PLA2)的酶活性。方法生物信息学软件预测问号钩端螺旋体赖株LA_2144基因跨膜区、信号肽和结构域。构建无信号肽LA_2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2144后复性。采用分光光度法检测rLep2144水解PAF-AH底物2-thioPAF的活性及其Km和Kcat值以及水解PLA2底物花生四烯酸硫代卵磷脂的活性。采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测问号钩端螺旋体感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)后LA_2144基因转录、蛋白质表达和外分泌情况。结果LA_2144基因无跨膜区但有信号肽和SGNH水解酶超家族结构域。所构建的无信号肽LA_2144基因原核表达系统能高效表达rLep2144,提纯后的rLep2144在分离胶上为单一蛋白质条带并成功复性。rLep2144有较强PAF-AH活性,其Km和Kcat值分别为688.235μmol/L和0.976/s,但PLA2活性较弱。问号钩端螺旋体感染HUVEC和EOMA后LA_2144基因mRNA转录和蛋白质表达水平迅速升高(P<0.05)且外分泌。结论问号钩端螺旋体LA_2144基因产物具有较强PAF-AH活性和一定的PLA2活性,可在钩端螺旋体病出血性病变和炎症反应中发挥作用。