神经节苷脂GM1对体外缺糖缺氧/再灌注大鼠海马脑片保护作用的研究

目的 :探讨神经节苷脂GM 1对体外缺糖 /缺氧再灌注 (OGD/Rep)大鼠海马脑片的保护作用。 方法 :采用测定脑片OGD/Rep后光通透度改变和 2 ,3 ,5 三苯基氯化四氮唑 (TTC)染色。结果 :①在 0 (对照 )、0 .1、1.0、10 μmol/LGM1四个处理组中 ,1μmol/LGM1组脑片光通透度峰值明显低于对照组和 0 .1μmol/LGM1组 (P <0 .0 1,ANO VA) ,10 μmol/LGM 1组脑片的峰值明显低于其他组 (P <0 .0 1)。脑片OGD后光通透度到达峰值的时间在四组间有显著性差异 (P <0 .0 5 ,Kruskal Wallistest) ,1μmol/LGM1组较对照组有显著差异 (P <0 .0 1,Mann WhitneyUtest)。②GM1与OGD/RP后大鼠海马脑片TTC染色呈现一定的剂量反应关系。在 0 (对照 )、0 .0 1、0 .1、1.0、10μmol/LGM1五组中 ,1μmol/LGM 1组脑片TTC染色最深 (P <0 .0 5vs对照、0 .0 1和 0 .1μmol/L组 ,ANOVA) ,10 μmol/LGM 1组次之 (P <0 .0 5vs对照和 0 .0 1μmol/L组 ,ANOVA)。 结论 :GM 1可以有效的保护体外大鼠海马脑片缺糖 /缺氧再灌注损伤。

氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元缺糖/缺氧和N-甲基-D-天冬氨酸损伤的保护作用

目的 观察氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元的缺糖 缺氧 (OGD)和N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)损伤的潜在保护作用及其机制。方法 海马脑片OGD以无葡萄糖的人工脑脊液中通 95 %N2 +5 %CO2 诱导。通过测定TTC染色后形成的红色产物来分析脑片活性。结果 氟哌啶醇 (1和 10 μmol·L- 1 )抑制OGD损伤 ,抑制率分别为 17 7%和 2 5 %,而D2 多巴胺受体拮抗剂多潘立酮无此作用。NMDA也能显著降低海马脑片及原代神经元的活性 ,而氟哌啶醇可抑制这一损伤作用。结论 氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片OGD和原代神经元NMDA损伤有保护作用。

氟哌啶醇对N-甲基-D-门冬氨酸诱导的大鼠海马神经细胞损伤的保护作用

用原代培养大鼠海马神经细胞的方法 ,观察氟哌啶醇对 N-甲基 - D-门冬氨酸 (NMDA)诱导的大鼠海马神经细胞损伤的保护作用 .结果表明 ,氟哌啶醇能剂量依赖地抑制 NMDA诱导的大鼠海马神经细胞内乳酸脱氢酶 (L DH)的释放 ,并改善受损细胞形态 ,四唑盐比色法 (MTT)显示存活率增高 .提示氟哌啶醇对

NMDA受体在培养海马神经元树突树上的表面表达及定位

目的 研究NMDA受体在不同发育阶段的培养大鼠海马神经元的表面表达以及在树突结构上的定位。 方法 构建绿荧光蛋白 (GFP)标记的NMDA受体NR1a亚单位的表达载体 (GFP NR1a) ,转染原代培养 5d的大鼠海马神经元 ,用抗GFP抗体和Cy3交联的二抗染色活细胞表面的受体簇。结合青荧光蛋白 (CFP)的共表达突出神经元的结构细节 ,观察表面NMDA受体簇的分布。 结果 GFP NR1a转染的神经元能表达点状、且分布于全细胞的绿荧光NMDA受体簇 ,在成熟神经元的树突上多为表面受体簇。培养 7d和培养 17d的转染神经元树突表面的NMDA受体簇密度并无显著差异。另外 ,培养 7d的海马神经元 ,表面NMDA受体簇几乎都位于树突干上 ,而树突丝上则罕见 ;培养 2周后 ,约一半的NMDA受体簇分布于树突棘。 结论 表面NMDA受体簇的分布具有树突结构相关的特异性 ,尤其是发现在发育早期NMDA受体簇罕见于树突丝 ,却已广泛分布于树突干上 ,且密度相当于成熟神经元。

白三烯拮抗剂ONO-1078对小鼠局灶性脑缺血的保护作用

AIM To determine whether ONO 1078 {pranlukast, 4 oxo 8 [p (4 phenylbutyloxy) benzoyl amino] 2 (tetrazol 5 yl) 4H 1 benzopyran hemihydrate}, a potent leukotriene antagonist, has protective effect on focal cerebral ischemia in mice. METHODS Focal cerebral ischemia was induced by permanent middle cerebral artery (MCA) occlusion in mice. ONO 1078 (0 01, 0 05, 0 10 mg·kg -1 ), dexamethasone (0 5 mg·kg -1 ), nimodipine (0 2 mg·kg -1 ) or saline (control) were injected ip once daily for 3 days, and 30 min before MCA occlusion. Twenty four hours after cerebral ischemia, the neurological scores were evaluated, infarct volumes and areas of the right and left cerebral hemispheres were measured by computer imaging analysis. RESULTS ONO 1078, dexamethasone and nimodipine reduced the neurological scores. ONO 1078 and dexamethasone reduced the ratio of right/left hemisphere area, indicating inhibition of brain edema, while nimodipine showed no effect. ONO 1078 dose dependently reduced infarct size, and dexamethasone and nimodipine showed the same effect. CONCLUSION ONO 1078 showed protective effect on focal cerebral ischemia. This may represent a novel approach to the treatment of acute cerebral ischemia.

惊厥和亚惊厥剂量戊四唑对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

目的 :研究不同剂量戊四唑刺激对大脑皮层内 N-甲基 - D-天门冬氨酸 ( NMDA)受体 NR1、NR2 A和NR2 B 3种亚单位表达量的影响。方法 :腹腔注射亚惊厥剂量 ( 35 mg/kg)和惊厥剂量 ( 5 0 mg/kg)的戊四唑 ,注射后不同时间点分离大脑皮层 ,用免疫印迹法检测 NMDA受体 NR1、NR2 A、NR2 B 3种亚单位的蛋白含量。结果 :注射戊四唑亚惊厥剂量和惊厥剂量组大鼠的行为学差异非常显著 ( P<0 .0 0 1) ,但 NMDA受体 3种亚单位仅 NR2 A亚单位在 1h点有显著性增高 ,且惊厥剂量组 NR2 A的表达量比亚惊厥剂量组高 ( P<0 .0 5 )。惊厥剂量组 NR2 A和NR2 B表达有先增加再降低然后恢复至正常水平的趋势 ,而 NR1亚单位改变不明显。结论 :戊四唑引起惊厥的机制可能与戊四唑首先影响 NR2亚单位蛋白的表达 ,以调节

白三烯拮抗剂ONO-1078对小鼠持续性局灶性脑缺血的作用

目的 :在小鼠模型研究白三烯拮抗剂 { 4 -氧 - 8- [对 - (4-苯丁氧基 )苯甲酰氨基 ]- 2 - (5 -四唑基 ) - 4 H- 1-苯并吡喃半水合物(ONO- 10 78) }对脑缺血的保护作用。方法 :以大脑中动脉阻塞法诱导持续性局灶性脑缺血。在脑缺血前 30 min和缺血后 6 0 min腹腔注射 ONO- 10 78、尼莫地平或生理盐水 (对照 )。脑缺血 2 4 h后 ,观察神经症状 ,并测定脑湿重和脑梗死体积。结果 :ONO-10 78(0 .0 1,0 .0 3,0 .1mg· kg- 1 )和尼莫地平 (0 .2 mg· kg- 1 )减少脑梗死体积 ;ONO- 10 78(0 .1mg kg- 1 )减轻脑湿重 ,尼莫地平无此作用 ;ONO- 10 78和尼莫地平对神经症状无明显作用。结论 :ONO- 10 78对持续性局灶性脑缺血有保护作用 。

动脉粥样硬化性脑梗塞和脑出血患者血浆可溶性血栓调节蛋白水平的研究

目的探讨血浆可溶性血栓调节蛋白(Solublethrombmodulin,sTM)与脑梗塞和脑出血患者小血管损伤、动脉粥样硬化的关系.方法应用酶联免疫吸附方法(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays,ELISA),检测60例脑梗塞患者、56例脑出血患者和64例健康对照的sTM水平,并分析sTM与血脂、血压的关系.结果脑梗塞和脑出血的甘油三脂、舒张期血压明显高于对照组;脑梗塞和脑出血的高密度脂蛋白显著低于对照组;脑出血组的收缩期血压明显高于其他两组;脑梗塞的总胆固醇水平显著高于其他两组;脑出血的sTM显著高于脑梗塞和对照组,而脑梗塞的sTM显著高于对照组.sTM与总胆固醇、甘油三脂、收缩和舒张期血压水平显著正相关;sTM与高密度脂蛋白水平成显著负相关.结论脑梗塞和脑出血患者的高水平的sTM提示脑梗塞和脑出血存在由高血压和动脉粥样硬化导致的小血管损伤.sTM是脑卒中的独立危险因子.

NR2A亚单位C末端的部分缺失对NMDA受体功能和表达的影响

目的研究NMDA受体NR2A亚单位羧基末端(以下简称为C末端)不同部位缺失对该受体表面表达和功能的影响。方法以GFP-NR2A为起始质粒构建了4个依次缺失部分C末端的GFP标记的NR2A亚单位表达载体:NR2A-ΔC1(缺失897L至1017S)、NR2A-ΔC2(缺失1024D至1142P)、NR2A-ΔC3(缺失1149D至1347G)及NR2A-ΔC4(缺失1354S至1464V);通过活细胞免疫化学染色分析这些载体与NR1-1a亚单位共转染后在HEK293细胞和海马神经元的表面表达,并通过电生理检测转染HEK293细胞NMDA受体的功能。结果当NR2A-ΔC1、NR2A-ΔC2、NR2AΔC3、NR2A-ΔC4分别与NR1-1a共转染HEK293细胞时,均可获得细胞膜表面表达,其表面染色阳性的细胞在绿色荧光蛋白细胞中的百分比与共转染NR1-1a/GFP-NR2A时的百分比相比均无显著性降低;并且NR1-1a/NR2A-ΔC2或NR1-1a/NR2A-ΔC4转染的HEK293细胞均能记录到谷氨酸诱发的NMDA受体通道电流。在海马神经元中,当转染NR2A-ΔC1、NR2A-ΔC2或NR2A-ΔC3时,单位长度树突表面表达的受体簇数量均显著低于转染GFP-NR2A的神经元,而转染NR2A-ΔC4的树突表面表达的受体簇数量却无显著性降低。结论在HEK293细胞中,C末端部分缺失的NR2A亚单位不影响含NR2A亚单位的NMDA受体在膜表面表达;而在海马神经元中,含NR2A的NMDA受体的表面表达数量受NR2AC末端的调控。