细菌氧化还原蛋白azurin诱导U2OS细胞凋亡过程中caspase-3的活化

目的探讨细菌氧化还原蛋白azurin诱导人骨肉瘤细胞U2OS凋亡过程中是否有caspase-3的活化。方法Annexin-V/PIFCM检测细胞凋亡情况,用Westernblot分析caspase-3酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-3mRNA水平的改变,比色法测定caspase-3的相对活性。结果用0、25、50、100、200mg/Lazurin处理U2OS细胞24h,随药物浓度的增加,caspase-3酶原的蛋白水平减少,caspase-3的mRNA水平增加(P<001)。用100mg/Lazurin分别处理细胞3、6、12、24、48h,caspase-3活性于6h开始升高,24h达高峰(为对照组的72倍,P<001),48h仍高于对照组(P<001);用不同浓度的azurin处理细胞,caspase-3活性呈浓度依赖性升高。结论Azurin诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,caspase-3在azurin诱导的骨肉瘤细胞凋亡机制中发挥了重要的作用。

人肝细胞系L-02与聚丙烯生物杂化界面构建的初步研究

目的 建立与人肝细胞相容的聚丙烯生物杂化界面 ,为用聚丙烯中空纤维管构建生物人工肝反应器奠定基础。方法 通过化学接枝的方法在聚丙烯表面引入聚丙烯酰胺形成聚合反应 ,并对人肝细胞系L 0 2在其表面的生长特点进行检测评价。结果 聚丙烯膜的静态水相接触角由接枝前的 (72± 5 )°降低为接枝改性后的 (30± 4 )°,明显提高了接枝改性聚丙烯膜的亲水性 ,并通过简单的静止培养使人肝细胞系L 0 2在其表面呈球形聚集体生长 ,提高了培养密度和活性。结论 在聚丙烯表面接枝聚丙烯酰胺可初步建立良好的人肝细胞系L 0 2与聚丙烯生物杂化界面 。

CMV早期转录增强子对人癌胚抗原启动子效率的作用研究

为了探讨人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子用于癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的靶向基因治疗的意义,我们参考有关文献利用PCR法分别克隆了369 bp的人CEA启动子和531 bp的CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pGL4.74质粒共转染CEA阳性的人肠癌细胞LoVo、HT-29、SW620、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF7和CEA阴性的肠癌细胞SW480、宫颈癌细胞HeLa、人肺成纤维细胞LL47,利用双荧光素酶检测系统检测分析了这些细胞中CEA重组启动子的效率。结果表明,CMV增强子能够明显增强CEA启动子在CEA阳性细胞中的效率(提高7.46至70.16倍),但是也能提高CEA启动子在CEA阴性细胞中的效率(提高24.01至76.40倍)。因此上述CMV增强子虽然可以大大提高CEA启动子的效率,但是对特异性有影响,在将其用于CEA阳性肿瘤基因治疗时还需采用其它保证特异性的手段。