2009～2012年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA与NA基因的进化分析

目的研究杭州地区2009年至2012年甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)的基因进化特征,分析该病毒的遗传变异和抗原的分子水平转变。方法用RT-PCR分别扩增甲型H1N1流感病毒HA基因和NA基因片段并进行测序,用DNAMAN和MEGA 4.0生物信息学软件对HA和NA基因序列进行进化分析。结果建立的RT-PCR可成功检测HA(C)、HA(D)和NA基因,遗传进化分析结果表明,杭州地区甲型H1N1流感病毒的HA与NA氨基酸序列的亲缘系数与WHO推荐的病毒株及国内代表株的同源性均为98.9%～100%;三维构象结果表明,HA编码的蛋白质有5个位点发生改变,而NA编码的蛋白质仅发生2个位点改变。结论 2009年至2011年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA和NA基因序列与世界范围内流行的病毒参考株具有高度同源性,但HA与NA蛋白质表位存在某些氨基酸位点的改变。

杭州地区2009-2010年急性腹泻患者中杯状病毒的检测和分型

目的了解2009--2010年杭州地区急性腹泻患者中杯状病毒基因型别和分子流行病学特征。方法收集2009--2010年杭州地区920例急性腹泻患者的粪便标本和流行病学资料，用多重PCR方法进行杯状病毒检测，测定部分标本的阳性扩增片段基因序列，并对序列进行系统进化分析。结果急性腹泻患者杯状病毒检出率为21．8％（201／920），其中诺如病毒（Nv）GI型25例、GⅡ型170例、札如病毒（SAV）11例，4例为NVI型和Ⅱ型混合感染、1例为NVⅡ型和SAV混合感染。NV基因型别包括：GI-1（3株）、GI-2（1株）、GⅡ-4／2006b变异株（7株）、GⅡ-2（1株）、GⅡ-7（1株）和GⅡ-4／2008变异株（2株）；SAV基凶型别包括：GI-2（5株）、GI-1（4株）和GⅡ-1（1株）。杯状病毒的流行在不同季节、年龄组人群均有发病。结论杯状病毒是2009—2010年引起杭州地区急性腹泻的主要病原之一，其病原具有病毒多样性和基因型别多样性，NVGⅡ-4／2006b变异株或类似株可能是2009--2010年杭州地区流行的优势株。

血流感染真菌的分布及耐药性分析

目的了解真菌性血液感染常见病原真茵的菌群分布及耐药性状况，为临床真菌感染性疾病提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院5年（2008-2012年）间导致真菌性血液感染的217株真菌的菌群分布及药物敏感性状况。结果217株真菌标本中以假丝酵母菌属为主，占88. 5%;其中又以白假丝酵母菌比例最高，占35.4%。菌种分布与患者的性别和年龄存在相关性。60-79岁年龄组感染白假丝酵母菌多见，占49% ,这一比例明显高于其他真菌。男性更容易感染白假丝酵母菌（40.1% vs 24.6%，P〈0.05），女性感染近平滑假丝酵母菌更常见（24.6% vs 11.8%,P〈0.05）.假丝酵母菌和新生隐球菌对两性霉素B、伏立康唑、氟康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶的敏感性均较高。光滑假丝酵母菌对伊曲康唑敏感率较低，仅为60.0%。结论真菌血流感染在临床呈上升趋势，抗真菌药物均体现较高抗菌活性，对真菌感染进行地区层面流行病学调查和耐药监测很重要。

基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪在醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群鉴定中的应用研究

目的评价基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）对醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群的鉴定价值，了解浙江大学医学院附属第二医院醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群的菌种分布情况。方法回顾性选取2012年1至7月我院临床分离的502株醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群非重复菌株，用MALDI—TOFMS进行再鉴定，同时用16S-23SrRNA基因间隔区序列分析来确定所有菌株的菌种，比较二者鉴定结果的差异。结果502株醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群用MALDI—TOFMS再鉴定，包括鲍曼不动杆菌431株（85．9％），皮特不动杆菌68株（13．5％），醋酸钙不动杆菌3株（0．6％）；对502株醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群16S-23SrRNA基因间隔区序列分析结果显示：403株为鲍曼不动杆菌（80．3％），68株为皮特不动杆菌（13．5％），28株为医院不动杆菌（5．6％），3株为醋酸钙不动杆菌（0．6％）。与16S-23SrRNA基因间隔区序列分析相比较，MALDI—TOFMS错误地将所有28株医院不动杆菌鉴定为鲍曼不动杆菌，其余菌株的鉴定结果完全一致。结论MALDI—TOFMS可将醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群菌株准确鉴定到种，具有操作简便、快速、成本低，重复性好的优点。MALDI—TOFMS有望在未来成为日常临床微生物鉴定的理想工具。