嵌合抗原受体技术免疫治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展

嵌合抗原受体(CAR)是单链抗体的可变区和T细胞信号分子的融合蛋白,它使T细胞可以通过非MHC限制性的方式识别特异性抗原,发挥杀伤作用。目前,CAR的信号域已从第一代的单一信号分子发展为包含CD28、4-1BB等共刺激分子的多信号结构域(第二、三代),在体内的存在时间及杀伤能力明显增强。利用靶向CD19和CD20的CAR修饰的T细胞进行过继输注,治疗血液系统恶性肿瘤是目前临床研究的热点。临床试验表明第二代CAR的抗肿瘤能力较第一代CAR明显增强,对于复发及难治性B系肿瘤有一定的疗效。同时,CAR技术也正研究用于骨髓移植后的过继免疫治疗等领域。在治疗安全性方面,目前临床试验中大部分患者对CAR治疗耐受性良好,但学者们对CAR可能引起插入突变、脱靶效应和炎症反应等不良反应也不无忧虑。本文就CAR技术在血液系统恶性肿瘤免疫治疗中的应用及安全性评价作一综述。

儿童急性早幼粒细胞白血病46例长期随访及预后分析

目的探讨儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗、长期生存和预后因子。方法对该院1998年4月至2005年10月收治的APL患儿46例进行临床分析。诱导缓解采用全反式维甲酸(ATRA)+柔红霉素(DNR)或吡柔吡星(THP),巩固治疗采用大剂量阿糖胞苷与DA(柔红霉素+阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷)、EA(足叶乙甙+阿糖胞苷)方案交替给药,维持阶段ATRA与DA,HA,EA方案交替治疗,总疗程为2.5年。结果39例患儿进行了正规治疗,36例(92.3%)获完全缓解(CR)。39例患儿1年、3年和5年总体生存率(OS)分别为(86.1±5.8)%,(76.1±7.5)%和(70.2±8.9)%,1年、3年、5年的无事件生存率(EFS)分别是(78.4±6.8)%,(63.6±8.7)%和(53.1±10.0)%。5年累积复发率(CIR)28.6%。其中WBC≤10.0×109/L者的5年OS[(81.4±10.3)%]明显高于WBC>10.0×109/L者[(51.6±14.7)%,P<0.05]。获CR的PML/RARα融合基因短型(S型)的患儿5例最后全部死亡,而长型(L型)患儿13例无死亡发生,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论ATRA+DNR或THP诱导缓解治疗儿童APL安全、有效,可以作为初发儿童APL的标准诱导治疗方案。联合蒽环类及阿糖胞苷等药物化疗能明显改善长期生存率。高WBC和S型PML/RARα融合基因阳性的患儿预后不佳。

加强儿童噬血细胞综合征的早期诊断与干预研究

噬血细胞淋巴组织细胞增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)是儿科临床上少见但病情凶险、病死率很高的疾病,分家族性、继发性和肿瘤相关性3种类型。其病因复杂,机制尚未完全阐明。有证据表明,该病的发生与编码免疫应答功能相关的蛋白基因缺陷有关,其基本发病机制是在免疫缺陷的基础上,伴有感染、肿瘤及坏死组织细胞等抗原的诱发下,导致细胞因子的大量释放,进而激活单核巨噬细胞发生吞噬现象和多脏器损伤。HLH-2004诊疗指南是当前诊治HLH的主要方法,细胞因子的快速测定有助于HLH的早期诊断。

拉布立海治疗肿瘤溶解综合征相关高尿酸血症临床进展

肿瘤溶解综合征(tumor lysis syndrome,TLS)是最常见的肿瘤急症之一,在临床上表现为以高尿酸、高钾、高磷、低钙血症为主的代谢紊乱[1]。高尿酸血症所致急性肾损伤代表了TLS最严重的结果,因此,纠正高尿酸血症对于防治TLS至关重要。别嘌呤醇是传统的抗尿酸药物,通过抑制黄嘌呤氧化酶,阻止次黄嘌呤转换为黄嘌呤、阻止黄嘌呤生成尿酸;但不能减少已经生成的尿酸,故对于高尿酸血症,别嘌呤醇只能有一部分的预防作用而无治疗作用,限制了其在TLS防治中的广泛使用[2]。

儿童急性髓系白血病干细胞的测定及其临床意义

本研究检测儿童急性白血病患儿急性髓系白血病干细胞(AMLLSC)的水平,分析AML患儿缓解后白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)含量与微小残留病(MRD)水平之间的关联。采用流式细胞术(FCM)和直接免疫荧光法标记细胞,分别测定初诊AML、ALL和缓解AML、ALL及对照组患儿骨髓单个核细胞(mononuclear cell,MNC)中AMLLSC(CD34+CD38-CD123+)表型阳性细胞的含量及AML患儿缓解后MRD水平。结果表明:初诊AML、ALL及对照组患儿骨髓MNC中AMLLSC或AMLLSC相同表型细胞的中位含量分别为166(14-1459)细胞/10万细胞、7(0-560)细胞/10万细胞和0(0-6)细胞/10万细胞,未缓解AML患儿骨髓MNC中AMLLSC的中位含量为36(5-224)细胞/10万细胞,缓解AML、ALL患儿骨髓MNC中AMLLSC或AMLLSC相同表型细胞的中位含量分别为6(0-41)细胞/10万细胞和10(0-105)细胞/10万细胞,缓解期AML患儿AMLLSC含量与同期MRD水平呈负相关(r=-0.466,p=0.006)。结论:初诊AML患儿骨髓细胞中存在AMLLSC,缓解后AMLLSC含量明显减少,维持一个较低水平;在初诊ALL患儿骨髓细胞中也存在AMLLSC(CD34+CD38-CD123+)相同表型细胞,缓解后AMLLSC相同表型细胞含量没有明显变化;AML患儿缓解后AMLLSC含量与MRD水平呈负相关。

CD分子及其单克隆抗体在小儿血液肿瘤诊疗中的应用

直至第7届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA7,2000.6,英国Harrogate市召开)为止,已有247个人类白细胞分化抗原(Cluster of Differentiation,简称CD)分子及其单克隆抗体被该国际组织鉴定和命名[1].在过去的近30年间,CD分子及其单抗的应用已使小儿血液肿瘤学的基础研究和临床应用取得了令人鼓舞的进展,人鼠嵌合型CD20单克隆抗体在淋巴瘤治疗中的成功应用,又掀起了导向治疗的热潮[2].以下就该领域在小儿血液肿瘤学诊疗中的应用及进展作一简单介绍.

静脉泵注尿激酶在白血病儿童TIAP尖端纤维蛋白鞘形成后成功应用1例

儿童白血病治疗周期一般为2~3年,在此期间需要进行长期化疗。完全植入式输液港(TIAP)的应用可以减少化疗药物带来的静脉损伤,但同时可能出现纤维蛋白鞘形成的远期并发症,一旦出现需要及时有效正确处理,以保证导管的正常使用。临床对于儿童,尤其白血病儿童TIAP所致纤维蛋白鞘的有效处理案例报道较少。本文报道1例浙江大学医学院附属儿童医院2021年12月11日收治的儿童急性淋巴细胞白血病使用TIAP 21周后导管尖端位置发生纤维蛋白鞘,通过尿激酶静脉维持泵注24 h后成功溶解并完全消除纤维蛋白鞘,随访2个月后未复发。为临床有效处理TIAP长期使用导致的纤维蛋白鞘提供参考。

原发性腹膜后肿瘤切除患儿围手术期不同麻醉深度的效果分析

目的探究原发性腹膜后肿瘤切除患儿围手术期不同麻醉深度的效果。方法将200例原发性腹膜后肿瘤切除术患儿按照不同的麻醉深度分为麻醉A组与麻醉B组,每组100例。麻醉A组患儿脑电双频指数(BIS)值为40~49,麻醉B组BIS值为50~59。比较两组患儿的疼痛评分、手术时间、出血量,分析麻醉前及手术后T淋巴细胞亚群水平,统计两组患儿的不良反应发生情况。结果T0时,两组患儿疼痛评分比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);T_(1)、T_(2)时,麻醉A组患儿疼痛评分均明显低于麻醉B组(P﹤0.01)。麻醉A组患儿手术时间明显短于麻醉B组(P﹤0.01),出血量明显低于麻醉B组(P﹤0.01)。麻醉前,两组患儿血清T淋巴细胞亚群水平比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。手术后,两组患儿CD8^(+)水平均明显高于本组麻醉前(P﹤0.01),CD4^(+)、CD3^(+)水平均明显低于本组麻醉前(P﹤0.01);麻醉A组患儿CD8^(+)水平明显低于麻醉B组(P﹤0.01),CD4^(+)、CD3^(+)水平均明显高于麻醉B组(P﹤0.01)。麻醉A组患儿不良反应总发生率明显低于麻醉B组(P﹤0.01)。结论原发性腹膜后肿瘤切除术患儿围手术期的不同麻醉深度中,BIS值为40~49时能够较好地缓解患儿的疼痛情况,对术后患儿影响较轻。

异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞功能的影响

目的:探讨异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞(MSC)在体外对T细胞增殖、活化及分泌功能的影响。方法:分离健康儿童外周血单个核细胞,使用Anti-CD3/CD28单克隆抗体体外激活T淋巴细胞,白介素(IL)2体外刺激培养的T细胞1周。建立异位高表达OCT4的MSC(MSC-OCT4)与活化T细胞的体外共培养体系,收集共培养1周后的上清液,流式细胞仪测定Th1/Th2细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α、γ干扰素)水平。收集共培养1周后的淋巴细胞,通过Countstar软件进行计数,用流式细胞仪测定T细胞及活化T细胞亚群的比例后,计算出绝对值,以均数±标准差表示。结果:与对照单独T细胞培养组相比,MSC及MSC-OCT4均能显著抑制CD3^(+)T细胞、CD3^(+)CD4^(+)T细胞和CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖。与MSC相比,MSC-OCT4能更好地抑制CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖(P=0.049),且主要抑制早期T细胞活化。与对照单独T细胞培养组相比,MSC及MSC-OCT4均能显著下调细胞因子IL-2和γ干扰素水平。与T细胞共培养1周后,MSC与MSC-OCT4组细胞因子IL-6水平显著增加。与对照MSC组相比,MSC-OCT4组在共培养1周后活细胞数更高(P=0.019),且能耐受更高浓度丝裂霉素C的抑制增殖作用。结论:MSC及MSC-OCT4在体外均能抑制IL-2刺激的T细胞增殖及活化,过表达OCT4后MSC能更强地抑制CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖,且具有更好的体外增殖能力,可能具有更好更持久地调节Th1/Th2造血因子平衡的作用。

白血病化疗儿童主要照顾者照顾负担水平对患儿应对方式的影响

目的研究白血病化疗儿童主要照顾者照顾负担水平对患儿应对方式的影响。方法选择浙江大学医学院附属儿童医院2020年6月—2022年12月诊治的白血病患儿96例,选择同期在本院接受住院治疗的非癌症儿童及其主要照顾者102例作为对照,收集患儿、非癌症儿童及其主要照顾者一般资料,采用慢性病患儿应对方式量表(CODI)、照顾者负担量表(CBI)进行调查,分析照顾负担水平对患儿应对方式的影响。结果患儿组主要照顾者的生理性[(12.07±1.48)分]、发展受限性[(12.32±2.27)分]、时间依赖性[(13.35±2.34)分]、社交性[(9.61±2.06)分]及情感性负担[(6.31±3.80)分]评分以及总分[(53.66±11.84)分]均显著高于非癌症儿童组的生理性[(4.65±1.16)分]、发展受限性[(5.63±1.81)分]、时间依赖性[(5.20±2.14)分]、社交性[(4.56±1.19)分]及情感性负担[(3.03±1.12)分]评分以及总分[(23.07±7.31)分],差异有统计学意义(P<0.05);患儿组接受[(3.73±0.94)分]、幻想[(4.02±1.04)分]和自我安慰[(2.87±0.84)分]评分均显著低于非癌症儿童组接受[(4.43±0.91)分]、幻想[(4.42±0.97)分]和自我安慰[(3.48±0.93)分]评分,逃避[(3.09±0.95)分]、负性情绪反应[(2.01±0.58)分]评分均显著高于非癌症儿童组逃避[(2.61±0.89)分]、负性情绪反应[(1.63±0.69)分]评分,差异有统计学意义(P<0.05),远离评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同性别、家庭平均月收入患儿积极和消极方式评分比较差异无统计学意义(P>0.05),不同年龄患儿消极应对评分差异无统计学意义(P>0.05)。照顾者类型为母亲[(10.96±2.73)分]、文化水平为中学以上[(11.17±2.85)分]和照顾负担水平为轻度[(12.15±2.88)分]患儿积极应对方式评分高于照顾者类型为父亲[(9.15±2.62)分]、文化水平为中学及以下[(9.78±2.50)分]和照顾负担水平为中度[(10.85±2.83)分]、重度[(9.89±2.62)分]患儿,照顾者类型为母亲[(7.58±2.13)分]、文化水平为中学以上[(7.29±2.16)分]和照顾负担水平为轻度[(5.75±1.85)分]患儿消极应对方式评分低于照顾者类型为父亲[(9.08±2.14)分]、文化水平为中学及以下[(8.73±2.09)分]和照顾负担水平为中度[(7.45±2.08)分]、重度[(8.93±2.26)分]患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。≥8岁患儿积极应对评分[(11.03±2.52)分]高于<8岁患儿[(9.67±3.15)分],差异有统计学意义(P<0.05)。照顾者类型、文化水平以及照顾负担水平均是影响患儿积极应对方式和消极应对方式的独立危险因素(P<0.05);生理性、发展受限性、时间依赖性、社交性和情感性分别与逃避、幻想、自我安慰呈负相关,与接受、负性情绪反应呈正相关(P<0.05),与远离无明显相关性(P>0.05)。结论白血病化疗患儿主要照顾者照顾负担水平较重,且患儿存在幻想、接受、自我安慰、逃避、负性情绪反应等应对方式,其应对方式受照顾者类型、文化水平以及照顾负担水平影响,照顾者照顾负担水平与患儿消极应对呈正相关,与积极应对呈负相关。

CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化

为了了解CD117/CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化,探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义,采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析,应用RT-PCR技术检测骨髓中PML/RARα融合基因的mRNA表达。结果表明APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33,而几乎不表达CD34、HLA-DR及T,B淋巴系列标志。有14.5%的APL患者表达CD56,有48.2%的APL患者表达CD15,CD15在APL的表达明显低于CML慢性期(48.2%vs95.2%,P<0.01)。有78.3%的APL患者表达CD117,而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16.9%,而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72.3%的APL患者呈CD117+CD11b-表型,而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型,它几乎均呈CD117-CD11b+表型。11例表型为CD117+CD11b-的APL患者经治疗获完全缓解,在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5%,同时细胞高表达CD11b,呈CD117-CD11b+表型。检测31例APL患者PML/RARα融合基因,25例该融合基因阳性,阳性率为80.6%,其中16例(64%)为PML/RARα基因L型,9例(36%)为S型。16例PML/RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例(87.5%),9例S型CD117表达有4例(44.4%),6例PML/RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例(33.3%)。结论CD117/CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别,CD117+CD11b-表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分,对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。

直标鼠抗人CD14单克隆抗体2F9-FITC的研制及鉴定

目的研制异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断。方法2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的2F9-FITC单抗;通过流式细胞术鉴定单抗亚型,比较2F9-FITC和标准CD14-FITC在不同类型白血病细胞上的表达情况。结果制备了大量高纯度的IgG1κ亚型2F9单抗,成功研制了直标单抗2F9-FITC,A495/A280比值为0.44;2F9-FITC与CD14-FITC在单核细胞上反应的阳性细胞百分数分别为84.50%及90.08%,而在淋巴细胞仅为0.52%和1.01%;2F9-FITC与标准CD14-FITC在各类白血病细胞上的阳性细胞百分数的差异不显著(n=23,t=0.922,P=0.367)。结论研制的2F9-FITC能够替代进口的同类高质量单抗试剂,用于单核细胞相关性白血病的免疫诊断。

小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症41例诊断及预后分析

目的探讨小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的诊断及预后情况。方法回顾性分析41例小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症患儿的临床资料。结果41例中男20例,女21例;中位年龄2岁(23d～13岁),均符合诊断标准。2例继发严重心脏并发症。应用流式细胞仪检测血细胞因子9例,结果白介素2、4、6和肿瘤坏死因子正常或轻度增高,白介素10和γ干扰素均增高或显著增高,显著增高与预后不良有关。随访时间3个月～5年,至今好转或治愈23例(占56.1%),死亡11例(占26.8%),失访7例(占17.0%)。结论小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症发病年龄多数较小,病死率高,可见严重心脏并发症;白介素10和γ干扰素显著增高可能与预后不良有关。

急性白血病细胞免疫治疗的研究进展

急性白血病是儿童时期最常见的血液系统恶性肿瘤,由于化疗药物的开发应用和化疗方案的不断改进,长期预后已经获得明显改善。然而对于高危及复发难治性患儿仍缺乏有效的治疗方法。随着对白血病发生、发展、肿瘤免疫及分子技术研究的进展,白血病免疫治疗日益受到重视,并初步显现出良好的应用前景,有望成为白血病治疗的又一新模式。其中细胞免疫治疗的进展尤其引人瞩目,不少已进入临床Ⅰ、Ⅱ期试验。本文就供者淋巴细胞输注(DL I)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、细胞因子诱导的杀伤细胞(C IK)、树突状细胞(DC)、血液肿瘤抗原特异性细胞毒T细胞(CTL)等细胞免疫疗法在急性白血病中的应用及研究进展作一综述。

儿童肿瘤免疫治疗的临床研究进展

过去的40年,儿童肿瘤的治疗取得了令人瞩目的成绩.根据美国癌症研究所的资料,0～ 14岁儿童恶性肿瘤的5年生存率已经由1975至1977年的58％提高到2003至2009年的83％,其中儿童第一大肿瘤急性淋巴白血病（ALL）的生存率已超过90％[1].但是,每年的死亡病例仍不在少数,肿瘤复发和治疗相关的并发症是主要原因.因此,对于难治和复发的恶性肿瘤,开展免疫治疗不失为一挽救性策略.况且,近年来肿瘤免疫治疗领域进展迅速,出现了许多新技术、新方法,临床试验正在开展,使之成为颇具前景的治疗儿童肿瘤的选择.现将近年来该领域的临床研究进展综述如下.