流式细胞术在诊断慢性粒细胞白血病中的作用

目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)免疫学表型,探讨其特点和意义。方法:用多色流式细胞术分析40例CML患儿和40例对照骨髓免疫表型,CD45/SSC基础设门圈出中性粒细胞,分析粒细胞表面CD分子表达率在≥1%、≥5%、≥20%3个范围的分布情况,并统计比较两组CD分子的表达率(≥1%的纳入统计)和平均荧光强度(MFI)差异。结果:CML组的粒细胞比例为(82.1±6.4)%,显著高于对照组的(57.8±11.8)%(P<0.001)。CML组和对照组粒细胞CD15/CD11b/CD33/CD13表达率较高,均分布在≥20%的范围,CD33/CD13分化轨迹正常且表达率和MFI无显著差异,但CML组CD11b表达率以及CD15 MFI都显著低于对照组(P<0.001)。两组CD10表达率和MFI无显著差异且表达水平在不同范围分布情况一致。CML组CD56异常表达病例数多,表达率高,有52.5%的病例CD56表达率≥5%,42.5%的病例CD56表达率≥20%,而对照组不表达CD56(<1%)。两组CD117的表达率分布不同,在表达率≥5%区间,CML组有35.0%的病例,而对照组只有2.5%。CML组CD117表达率高于对照组(P<0.001),而MFI无显著差异。结论:CML的免疫分型表现为成熟的中性粒细胞比例升高、CD15 MFI减弱、CD11b比例减少、CD117表达增高以及可伴异常CD56表达,用流式细胞术分析免疫表型可以有效区分正常粒细胞和慢性粒细胞,有助于慢性粒细胞白血病辅助诊断。

MK—EGFP融合蛋白在人肝癌细胞Hep—G2中的核定位

目的构建MK—EGFP真核表达质粒，研究该融合蛋白在肝癌细胞株Hep—G2中的定位。方法RT—PCR技术扩增MK编码基因，克隆到真核表达载体pEGFP—N2中，重组质粒pMK—EGFP转染肝癌细胞Hep—c2，显微镜下实时追踪观察融合蛋白的胞内表达与定位。结果成功构建表达质粒pMK—EGFP，真核转染后，在宿主细胞内发生核定位，融合蛋白在核仁区富集。结论转染产生的MK—EGFP融合蛋白在人肝癌细胞Hep—G2中大量表达，并发生明显的核定位现象。

细胞因子与降钙素原在预测血液肿瘤患儿感染中的应用价值

目的探讨细胞因子与降钙素原(PCT)预测血液肿瘤患儿感染原及严重程度的价值。方法前瞻性队列研究。纳入2010年11月至2018年6月浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科收治的感染患儿1 543例共3 912例次的病例资料。根据感染情况分为血培养阳性的脓毒症组(380例共608例次)、血培养阴性的脓毒症组(539例共1 484例次)、普通非脓毒症感染组(549例共1 709例次)、病毒感染组(18例共21例次)和真菌感染组(57例共90例次)。根据是否伴随休克分为休克组(171例共187例次)和非休克组(1 372例共3 725例次)。同时纳入同期无感染发热的血液肿瘤患儿89例共112例次作为对照组。检测各组患儿在发热高峰时的PCT和细胞因子值,研究PCT、细胞因子与感染严重程度的关系。两组间连续性变量分析采用Mann-Whitney U检验,三组及以上采用Kruskal-Wallis H检验,预测病情准确性用受试者工作特征曲线分析。结果(1)依据感染分组,白细胞介素(IL)6(H=210.002,P<0.01)、IL-10(H=223.045,P<0.01)和PCT(H=76.799,P<0.01)组间比较差异有统计学意义,曲线下面积(AUC)分别为0.67(95%CI 0.64~0.69)、0.69(95%CI 0.66~0.71)和0.59(95%CI 0.56~0.61)。(2)依据休克分组,IL-6(Z=11.460,P<0.01)、IL-10(Z=14.242,P<0.01)和PCT(Z=10.813,P<0.01)两组间差异有统计学意义,AUC分别为0.75(95%CI 0.70~0.79)、0.81(95%CI 0.77~0.84)和0.73(95%CI 0.69~0.77)。(3)革兰阴性菌(GNB)感染(60例次)比革兰阳性菌(GPB)(22例次)感染更易导致脓毒性休克(χ2=29.665,P<0.01),IL-6、IL-10、PCT预测GNB感染的AUC分别为0.75(95%CI 0.72~0.78)、0.82(95%CI 0.79~0.85)和0.67(95%CI 0.63~0.70)。(4)IL-6、IL-10联合PCT预测脓毒性休克的作用优于单独最佳的IL-10(AUC 0.994比0.810,Z=10.211,P<0.01)。结论 IL-6、IL-10在预测血液肿瘤患儿GNB感染中明显优于PCT,IL-6、IL-10和PCT联合应用在严重感染中更有预测价值。

MK—EGFP融合蛋白的构建和表达

目的克隆中期因子（midkine，MK）的编码序列，构建MK—EGFP融合表达质粒，诱导表达并亲合纯化。方法用RT—PCR技术从人胚胎组织中获得MK编码基因，构建原核表达质粒pET—MK-EGFP；转化大肠杆菌，诱导表达重组蛋白；纯化回收后鉴定生物活性。结果重组质粒经酶切测序与预期相符，融合蛋白表达后的指示荧光于激光共聚焦显微镜下清晰可见，MK在其中保持了原有的完整构象和生物活性。结论MK—EGFP重组质粒构建正确，融合蛋白大量表达，并具有完整的生物学活性。

儿童激素耐药型肾病综合征生物标志物的研究进展

儿童激素耐药型肾病综合征(SRNS)是临床难题,预后较差,易进展为终末期肾病。判断SRNS病理类型及进展主要靠肾活检,然而其创伤性大、不易动态监测。寻找理想的、无创的、易获得的SRNS生物标志物,对早期发现、精准诊断、有效干预、改善预后至关重要。本文回顾儿童SRNS经典生物标志物,从SRNS发病机制着手,探索和识别免疫学、遗传学、转录组学及影像学潜在生物标志物,并对其未来走向进行展望。

IKZF1基因多态性与中国儿童急性淋巴细胞白血病的相关性

急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童发病率最高的白血病类型，好发于2-5岁。目前ALL的发病机制仍未明确，但以往研究大多认为其受遗传因子及环境影响。IKZF1（Ikarosfamilyzincfinger1）基因位于染色体7p12．2，其编码蛋白IKAROS是和淋系发育相关的重要转录因子。