新建体外受精实验室显微注射系统操作改进探究

针对新建成的体外受精实验室中显微注射操作系统不稳定,导致卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)卵膜刺破效果不佳或过程中损伤卵子纺锤体等问题,对连接了显微注射针的Eppendorf CellTram vario油压式手动显微注射仪的整体通道进行调整,提高卵子破膜及单精子注射的稳定性。通过增加显微注射仪管道内矿物油的更换频次并调节活塞相对位置,保证液压系统的通畅,通过控制显微注射针内介质从针尖至针尾依次为聚乙烯吡咯烷酮、培养油、空气、矿物油,保证针尖不污染、不堵塞,同时控制回吸、破膜、注射和退针的节奏,使ICSI操作得以顺利实施。经过分析及改进,ICSI后卵子退化率显著下降(P<0.05),而受精率、优质胚胎形成率以及临床妊娠率均有所提高。

三维扫描重建女性生殖系统模型在胚胎移植培训中的应用

目的探讨三维扫描重建技术在胚胎移植培训中的效果。方法用三维扫描仪、数据处理软件EXScan-Pro、3D打印机重建出标准及子宫颈内口狭窄两套女性生殖系统模型。对20位临床及实验室人员进行废弃胚胎的模拟移植培训教学,并对培训前后胚胎种植部位准确性、胚胎移植操作时间以及更换移植导管的频次进行统计和评价。结果胚胎种植部位准确性得分由(0. 60±0. 41)分提高至(1. 37±0. 29)分(P<0. 05);胚胎移植操作时间由(340±146) s缩短至(180±59) s(P<0. 05);更换移植导管的频次由(0. 83±0. 37)次下降(0. 23±0. 13)次(P<0. 05)。结论三维扫描重建女性生殖系统模型应用于胚胎移植教学培训,能有效增加操作者正式上台手术前的实践经验,提高胚胎移植技术实施的稳定性,也有利于建立规范的操作流程,是传统观摩和带教方法的有益补充。

MSCs治疗早发性卵巢功能不全的免疫调节作用及PGE2/EP潜在机制

早发性卵巢功能不全(POI)严重影响女性的生殖健康。其发病机制与药物、免疫和遗传等多因素相关,而T细胞免疫失衡是自身免疫性POI和炎症性卵巢损伤的重要致病机制,目前采用的雌激素替代治疗虽能缓解POI部分临床症状,但缺乏有效修复卵巢功能的措施。近年的研究表明,间充质干细胞(MSCs)移植已成为改善POI临床症状、恢复卵巢组织结构与功能及垂体-性腺轴激素平衡的新方法,颇具临床应用前景。前列腺素E2(PGE2)通过与其受体(receptor, EP)结合,不但参与多种免疫细胞和炎症反应调节,还可影响血流量、分泌、生殖细胞和MSCs的功能和发育。PGE2可能与其他炎症因子相似,是免疫授权调节MSCs功能活性的关键分子。本文综述了MSCs治疗POI的作用和机制,重点涉及T细胞免疫与PGE2/EP调节机制的研究进展。

以生殖健康为导向的辅助生殖技术发展

辅助生殖技术(assisted reproductive technologies, ARTs)作为生殖医学的核心内容之一,涵盖了从配子成熟、合子形成到胚胎发育等多个关键生命早期发育过程。随着全球生育力下降趋势的加剧,不孕症患者倾向于选择ARTs以实现生育愿望。同时,人们也越来越关注ARTs可能带来的不利影响。本文旨在讨论目前临床上常用的几种辅助生殖技术[如体外受精(in vitro fertilization, IVF)、卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)、双相卵细胞体外成熟(biphasic in vitro maturation, biphasic IVM)、胚胎冷冻及冷冻胚胎复苏移植(frozen embryo transfer, FET)、胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing, PGT)、非侵入性胚胎遗传学检测(non-invasive PGT, niPGT)等]及其前沿发展,重新审视各项技术在以生殖健康为目标的辅助生殖过程中的地位,并进一步讨论辅助生殖技术对子代健康的影响。在保障患者和子代健康的导向下,发展和完善辅助生殖技术,提高技术的高效性和安全性,造福人类生殖健康。

炎症因子在多囊卵巢综合征中作用的研究进展

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性最常见的内分泌疾病,其主要特征包括稀发排卵或无排卵、卵巢多囊样表现以及高雄激素血症及其引起的痤疮、多毛等症状。目前认为PCOS患者的体内处于一个长期的慢性炎症过程,在外周血、颗粒细胞、卵泡液、卵巢组织、脂肪细胞和子宫内膜细胞中均发现炎症因子表达量的增高或炎症水平的升高。通过对炎症因子在PCOS发病中作用的研究,发现这些因子可能通过调控卵泡发育、雄激素水平等对临床结局产生影响。

非编码RNA在多囊卵巢综合征中的作用研究进展

多囊卵巢综合征（PCOS）是一种常见的生殖系统疾病,影响着5%~10%育龄妇女的健康。尽管对其发病机制的研究不断深入,但其发病机制仍不明确。非编码RNA（ncRNA）指不翻译为蛋白的RNA,主要参与基因表达调控、表观遗传学调控等重要功能,近年来逐渐成为研究热点。研究发现多种ncRNA在PCOS患者的血清、卵泡液和颗粒细胞中表达量发生改变,并可能作为PCOS诊断的新靶点,这为PCOS发病机制的研究提供新思路。该文综述了近年来ncRNA在PCOS疾病发生发展中作用的研究进展。

多囊卵巢综合征患者卵泡液外泌体的提取鉴定及其miRNAs的提取和检测

目的·从多囊卵巢综合征患者卵泡液中分离提取外泌体并进行鉴定,明确卵泡液中外泌体的存在;从外泌体中分离提取miRNAs并检测其表达量。方法·利用膜亲和法提取卵泡液中外泌体,透射电镜观察大小和形态;利用流式细胞仪检测外泌体蛋白标志物CD63和CD81的表达;提取纯化外泌体miRNAs,利用Taq Man探针real-time PCR检测miR-125b、miR-19b和miR-222的表达。结果·透射电镜下观察到卵泡液外泌体呈圆形或椭圆形,直径30~100 nm,有完整的膜结构,内含低密度物质;流式细胞仪检测外泌体CD63和CD81呈阳性表达。Real-time PCR检测到外泌体中miR-125b、miR-19b和miR-222的表达。结论·多囊卵巢综合征患者卵泡液中可以收集到外泌体,可以通过电子显微镜和流式细胞仪对卵泡液中的外泌体进行鉴定。卵泡液外泌体中含有miR-125b、miR-19b和miR-222。

脂质体介导SV40LT基因转染构建羊水染色体核型分析质控细胞系研究

目的:研究羊水染色体核型分析质控细胞系的构建方法。方法:以T4DNA连接经BamHⅠ单酶切的SV40LTag-pcDNA和pcDNA3.1 (-) DNA,重组SV40LTag-pcDNA3.1(-)克隆,以脂质体介导法将重组克隆转染至染色体结构异常的羊水细胞,以G418筛选阳性克隆,观察细胞系的传代生长特性及其作为染色体核型分析质量评估的可行性。结果:构建了染色体核型为46,XY,t(8; 19)(q24.3;q13.1)的羊水细胞系,传至第15代的细胞系经染色体核型分析,其核型与原代细胞一致。结论:染色体结构异常的羊水细胞转染SV40LT基因后可转化为无限扩增且染色体核型稳定的细胞系,从而制成羊水细胞染色体核型分析的质控细胞系。

高龄孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查胎儿常见非整倍体的临床意义

目的:评估孕妇外周血胎儿游离DNA检测这一无创产前筛查(NIPS)技术在高龄孕妇产前筛查中的效率,并据此提出高龄孕妇产前筛查及诊断的优化策略。方法:以2015年2月至2016年9月在浙江大学医学院附属妇产科医院和嘉兴市妇幼保健院行NIPS并完成妊娠结局随访的10 584名高龄孕妇为研究对象,统计NIPS在高龄孕妇中检测胎儿常见染色体非整倍体的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并分析孕妇年龄与胎儿常见染色体非整倍体疾病的相关性。结果:NIPS检测高龄孕妇胎儿21三体的敏感度为100.00%、特异度为99.96%、阳性预测值为91.67%、阴性预测值为100.00%;检测18三体的敏感度为100.00%、特异度为99.93%、阳性预测值为68.18%、阴性预测值为100.00%;检测13三体的敏感度为100.00%、特异度为99.97%、阳性预测值为25.00%、阴性预测值为100.00%。胎儿21三体的高风险率和真阳性率随孕妇年龄的增长而升高(均P<0.01)。其中,35~37岁组与38~40岁组21三体的高风险率和真阳性率差异有统计学意义(均P<0.05);38~40岁组与41岁以上年龄组21三体的高风险率差异有统计学意义(P<0.05),但真阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NIPS用于高龄孕妇的产前筛查具有良好的检测效率。对于预产期年龄38岁以下的孕妇,NIPS可作为优先选项;对于预产期年龄超过41岁的孕妇,建议选择介入性产前诊断;而对于预产期年龄为38~<41岁的孕妇,则可充分告知后酌情选择。

肠道菌群在多囊卵巢综合征发生和发展中的作用

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种病因复杂的妇科内分泌疾病,严重影响女性的生育功能,其发病机制尚未明确。近年来,肠道菌群成为感染性、免疫性以及代谢性疾病的研究热点。同时,越来越多的研究证实肠道菌群能调控胰岛素的合成与分泌,影响雄激素的代谢和卵泡发育。这为揭示PCOS的病因提供了新思路。因此,纠正肠道内环境、改善异常代谢活动的粪菌移植可能成为PCOS治疗的新手段。该文综述了肠道菌群在PCOS发生和发展中作用的研究进展。

经产妇发生妊娠期糖尿病的危险因素研究

目的·探究经产妇发生妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)的危险因素。方法·选取2012年1月—2017年1月在国际和平妇幼保健院有连续2次分娩记录的经产妇。按照前次妊娠孕前年龄进行1:4配比,病例组116例,对照组464例。通过病史调取这些孕产妇的临床资料和口服糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)、血脂等生化指标。通过多因素回归分析计算校正比值比(odds ratio,OR)和95%CI,找出经产妇发生GDM的危险因素。结果·相比对照组,病例组孕产妇2次妊娠孕前体质量指数(BMI)增加(校正OR=1.35,95%CI为1.07～1.69),前次妊娠OGTT 1 h血糖(校正OR=1.99,95%CI为1.55～2.55)和2 h血糖(校正OR=2.02,95%CI为1.51～2.70)越高,以及本次妊娠孕早期空腹血糖(校正OR=1.96,95%CI为1.16～3.32)、总胆固醇(校正OR=1.37,95%CI为1.06～1.77)和三酰甘油(校正OR=1.53,95%CI为1.10～2.14)越高,发生GDM的风险越大。结论·2次妊娠间BMI增加,以及血糖和血脂持续性增长是引起经产妇GDM发生的危险因素。

距离-温度联合的新型筛选法提高人精子质量的效果分析

目的探讨基于精子前向运动性和温度趋向性的新型筛选方法在提高人精子质量的效果。方法将密度梯度离心后获能的精子置于不同长度(2、5和8 cm)条状液滴的一端,同时设置不同的环境温度条件(恒温32℃、恒温37℃、32℃~37℃温度梯度),孵育60 min后,从液滴的另一端收集精子样本,比较不同距离及温度条件下筛选获得精子的浓度、活力、正常形态率及DNA碎片率等指标的差异。结果在相同的环境温度条件下,经过长距离(5、8 cm)筛选获得的精子比初始精子(0 cm)具有更高的正常形态率(P<0.05);随着距离的延长,精子活力未见显著性改变,但精子的浓度则呈极显著下降趋势(P<0.01)。长距离(5、8 cm)条件下,32℃~37℃温度梯度环境获得的精子浓度高于无温度差值组(恒温32℃和恒温37℃)(P<0.01),且精子DNA碎片率更低(P<0.05)。结论长距离水平游动能淘汰大量形态异常的精子,但过长的距离将导致精子浓度急剧下降,温度梯度的设置能富集得到更多DNA完整性较好的具有正常趋热应答能力的精子。5 cm,32℃~37℃条件下优选精子效果较好,可降低体外受精过程中缺陷精子与卵子发生结合的风险。

产前筛查与诊断的质量控制与热点问题

母血清学产前筛查的质量控制必须强调：孕周和体重等临床因素、测定结果的准确性、风险计算参数、产前筛查数据库等均会影响筛查质量，且产前筛查的结果只是一个风险提示，后续的诊断与随访是关键。现行的中孕期筛查存在检出效率低、假阳性率高等问题，建立适合我国国情的产前筛查和诊断质量管理体系有望提高筛查效率。此外，高龄孕妇及双胎妊娠筛查诊断问题，改进羊水细胞培养方法、提升染色体分析自动化水平，以及快速产前分子诊断技术的引入及定位等问题亟待我们解决。

Meckel-Gruber综合征的诊断与研究

Meckel—Gruber综合征是一种罕见的致死性疾病，全球范围内新生儿发病率为1／140000～1／13250，随着超声与分子诊断等技术的发展，尤其是第三代试管婴儿技术（胚胎植入前诊断技术）的出现使解决疾病基因携带者的生育问题出现了曙光。本文介绍了Meckel．Gruber综合征的诊断标准，可能的发病机制及与其他疾病的鉴别诊断，希望通过本病的介绍，提高临床对罕见病的认识与重视，提高诊断能力，为受累家庭夫妻再生育提供优生咨询与临床指导。

胎盘生长因子：一项预测子痫前期的重要指标

胎盘生长因子（PlGF）是一种有4种异构体的糖蛋白，主要在胎盘表达，在胚胎发育的血管发生、形成中起作用，是胎盘血管生长的标志物，胎盘生长因子降低可导致血管生成和动脉形成功能障碍。子痫前期患者处于抗血管生成的状态，子痫前期孕妇，在子痫前期诊断前或综合征发病前，血清和尿的PlGF就低于正常妊娠。早孕期PlGF水平明显降低，是预测子痫前期的重要指标。PlGF也有望用于子痫前期的治疗。