Tubastatin A对猪心脏停搏复苏后脑损伤时细胞焦亡的影响

目的评价Tubastatin A(TubA)对猪心脏停搏复苏后脑损伤时细胞焦亡的影响。方法普通级雄性白猪22头,体质量34~39 kg,4~6月龄,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组,n=6)、心脏停搏复苏组(CA-CPR组,n=8)和心脏停搏复苏+TubA组(CA-CPR+TubA组,n=8)。CA-CPR组和CA-CPR+TubA组采用心脏停搏9 min、心肺复苏6 min的方法制备猪心脏停搏复苏模型。CA-CPR+TubA组于复苏成功后5 min时,经1 h股静脉泵注TubA 4.5 mg/kg(用50 ml生理盐水溶解)。于造模前及复苏成功后1、2、4和24 h(T0-T4)时,采集股静脉血标本,采用ELISA法检测血清NSE和S100β蛋白浓度。于T4时行神经功能缺损评分(NDS评分),随后处死猪,取大脑皮层组织,采用Western blot法检测组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、caspase-3、活化型caspase-3(cleaved caspase-3)、消皮素E(GSDME)和N端GSDME(N-GSDME)的表达,ELISA法检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、IL-1β和IL-18的含量。结果与S组比较,CA-CPR组和CA-CPR+TubA组T1-T4时血清NSE和S100β蛋白浓度升高,T4时NDS评分升高,大脑皮层组织HDAC6、caspase-3、cleaved caspase-3、GSDME和N-GSDME表达上调,HMGB1、IL-1β和IL-18含量升高(P<0.05);与CA-CPR组比较,CA-CPR+TubA组T3和T4时血清NSE和S100β蛋白浓度降低,T4时NDS评分降低,大脑皮层组织HDAC6、caspase-3、cleaved caspase-3、GSDME和N-GSDME表达下调,HMGB1、IL-1β和IL-18含量降低。结论TubA减轻猪心脏停搏复苏后脑损伤的机制可能与抑制细胞焦亡有关。

TubA对猪心肺复苏后肾肠损伤的保护作用及机制

目的探讨组蛋白去乙酰化酶6特异性抑制剂Tubastatin A(TubA)减轻猪心肺复苏(CPR)后肾肠损伤的保护作用及其潜在机制。方法将25只健康雄性大白猪按照随机数字表法分为假手术(Sham)组(n=6)、CPR模型组(n=10)及TubA干预组(n=9)。经右心室电刺激诱导心搏骤停9 min后CPR 6 min制备猪CPR模型;Sham组动物仅进行插管通气、置管、麻醉监护等常规操作。TubA干预组于复苏成功后5 min经股静脉泵入TubA 4.5 mg/kg,持续1 h;Sham组和CPR模型组泵入等量生理盐水。分别于制模前及复苏后1、2、4、24 h取静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和二胺氧化酶(DAO)血清水平。于复苏后24 h取左肾上极与回肠末端组织,采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡程度,并采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测受体相互作用蛋白3(RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(MLKL)的表达水平。结果与Sham组相比,CPR模型组和TubA干预组动物均在复苏后出现肾功能障碍与肠黏膜损伤,表现为SCr、BUN、I-FABP和DAO的血清水平均明显增加;然而,与CPR模型组相比,TubA干预组复苏后1 h起SCr与DAO、复苏后2 h起BUN、复苏后4 h起I-FABP的血清水平均显著降低〔1 h SCr(μmol/L):87±6比122±7,1 h DAO(kU/L):8.1±1.2比10.3±0.8,2 h BUN(mmol/L):12.3±1.2比14.7±1.3,4 h I-FABP(ng/L):661±39比751±38,均P<0.05〕。组织检测分析显示,与Sham组相比,CPR模型组和TubA干预组动物均在复苏后24 h出现肾肠组织细胞凋亡与坏死性凋亡,表现为细胞凋亡指数均明显升高,RIP3和MLKL蛋白表达均显著上调;然而,与CPR模型组相比,TubA干预组复苏后24 h肾肠组织细胞凋亡指数均明显降低〔肾组织细胞凋亡指数:(21.4±4.6)%比(55.2±9.5)%,肠组织细胞凋亡指数:(21.3±4.5)%比(50.9±7.0)%,均P<0.05〕,RIP3和MLKL蛋白表达均显著下调〔肾组织:RIP3蛋白(RIP3/GAPDH)为1.11±0.07比1.39±0.17,MLKL蛋白(MLKL/GAPDH)为1.20±0.14比1.51±0.26;肠组织:RIP3蛋白(RIP3/GAPDH)为1.24±0.18比1.69±0.28,MLKL蛋白(MLKL/GAPDH)为1.38±0.15比1.80±0.26,均P<0.05〕。结论TubA具有减轻复苏后肾功能障碍与肠黏膜损伤的保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡和坏死性凋亡有关。

体外膜肺氧合在严重创伤救治中的应用研究进展

严重创伤可进展为严重呼吸功能障碍,病死率高,临床救治难度大。近年来体外膜肺氧合(ECMO)在严重创伤所致循环和(或)呼吸功能衰竭中的应用受到越来越多的关注。严重创伤患者有较高的出血风险而难以进行全身抗凝,被认为是ECMO治疗的相对禁忌证。但新近的研究表明,静脉-静脉(VV)-ECMO治疗创伤后严重急性呼吸功能衰竭是安全可行的,静脉-动脉(VA)-ECMO对治疗心源性休克和创伤性心搏骤停有重要价值。有关ECMO在创伤患者中的应用时机、抗凝策略、对生存率的影响及风险效益评价等问题尚需进一步的研究。笔者就ECMO在严重创伤患者救治中的应用及应用时机、并发症预防和处理的研究进展进行综述,为提高ECMO的应用水平提供参考。