显微外科技术在小鼠器官移植中的应用与体会

探讨交流显微外科技术在小鼠心脏和肝脏移植中的应用。探讨掌握显微外科技术的要点,并根据文献和自身的经验讨论小鼠动静脉在显微镜下的缝合,以及采用双人"双袖套"法进行门静脉、肝下下腔静脉吻合,支架法重建胆管连接的经验和体会。为器官移植实验技术操作提供参考。

实验动物手术室使用臭氧和紫外线灭菌的效果观察

目的观察以肝、心、肾等器官移植为主的医学实验动物手术室,使用臭氧和紫外线的物理学方法灭菌的效果。方法在实验室运转后,用物理的臭氧和紫外灭菌与化学的2%戊二醛灭菌方法进行比较,用平皿菌落记数和物品表面微生物检测,重复消毒灭菌和检测各3 d,观测消毒灭菌效果。结果臭氧的泄漏不多,易于隔离和应用。两种方法的平皿菌落记数和物品表面微生物检测均达标。结论臭氧和紫外线物理灭菌方法在完成消毒后无残留物质,可进入缝隙,在实验动物手术室等存放大量仪器物品的实验室,用物理方法替代化学方法值得提倡。

实验动物随机分组的计算机程序处理

目的建立精细的动物实验的分组方法,作为有关实验设计的标准操作程序(Standard Operation Procedure,SOP)。方法用计算机Excel程序对大量实验动物按体重排序进行随机分组。结果 500只大鼠用Excel计算机程序随机分组研究27周后,线性回归分析动物的组间平均体重无统计学差异,达到理想的分组结果。结论改以往不按照体重的单纯随机表分组法为按体重排序随机分组,可在概率上使科研设计更为精细。

臭氧在IVC实验动物环境中的应用研究

目的探讨独立通风系统(IVC)动物实验室内使用臭氧发生器消毒的可行性。方法使用臭氧检测管测定实验室内的和运行中的IVC内的臭氧浓度,观察大鼠的健康状况、生化指标、气管和肺的组织病理学状况。结果发现IVC笼盒的低、中、高3级过滤器,对臭氧有一定的屏障作用,可以减少80%。大鼠在无特殊保护的情况下,对臭氧的耐受能力较高,在面积为35 m3的IVC动物实验室内,对采用臭氧发生量3 g/h的设备开启35 min,没有检测到大鼠生理和病理的变化。结论臭氧发生器能够用于IVC动物实验室的环境消毒。

移植物动脉硬化模型大鼠血管平滑肌细胞原代培养及鉴定

目的探讨大鼠腹主动脉移植后，血管平滑肌细胞（VSMC）的分离、培养方法。方法建立BN至Lewis腹主动脉移植的慢性排斥反应、动脉硬化模型，60d后用组织块贴壁方法分离、培养血管平滑肌细胞并进行传代。采用形态学和肌动蛋白免疫组化鉴定证实为VSMC。结果细胞呈典型的“峰．谷”样生长，历次传代鉴定均为高纯度VSMC，传代至6代左右仍能保持原有性状，细胞活力未见减低。结论组织块贴壁法培养大鼠腹主动脉移植后vsMc具有操作简单、细胞活力高、纯度高等优点，可作为研究器官移植慢性排斥反应、移植物动脉硬化新的体外实验模型。

活体肝移植术后小肝综合症的预防与治疗

活体肝移植术已被认为是器官短缺时代救治终末期肝病患者的最有效方法.但供肝体积是限制活体肝移植开展的主要问题之一,体积过小尤其当接受移植物受体重量比（GRWR,graft-to-recipient weight ratio）小于0.8％的情况下较易发生小肝综合症.小肝综合症发生的原因是多因素共同作用的结果,但其最主要的病因是门静脉高压或门静脉血流过度灌注,尤其当门静脉压力高于20 mmHg时,发生了门静脉微循环和肝窦内皮的损伤、淤胆的病理改变,并继发了中介因子的释放,最终导致移植物严重损害和失功.

必须关注防止医学领域内的唯心科学观

对医学科学领域内存在的和某些一度充斥的唯心科学观的社会表现进行分析,从过程管理和科学方法论的重要性入手,提出防范学术腐败和发展医学科学的方法和措施,从教育和民生的角度探讨医务工作者和社会学家必须关注的医学领域内的唯心科学观,并举例说明医学工作者的科学道德自律和社会责任感的重要性。

脾切除对门脉高压症大鼠CD4、CD8和脾功能的影响

目的:研究肝硬化门脉高压症(PHT)大鼠脾次全切除术后CD4、CD8与脾功能的变化。方法:皮下注射60%四氯化碳复制大鼠肝硬化模型。共分5组:正常大鼠组、肝硬化(PHT)组、正常大鼠脾切除组、PHT全脾切除组、PHT脾次全切除组,每组10只。手术后第4周检测各组血常规、肝功能、tuftsin、CD4、CD8等指标。结果:PHT高压症大鼠脾切除术后tuftsin水平[(171±21)ng/Lvs(433±44)ng/L,P<0.01]、CD4/CD8(2.01±0.22vs1.12±0.12,P<0.01)均显著低于PHT组;PHT大鼠脾次全切除组tuftsin[(434±42)ng/Lvs(171±21)ng/L,P<0.01]、CD4/CD8(1.97±0.18vs1.12±0.12,P<0.01)显著高于PHT大鼠脾切除组。肝功能两者无显著差异(P>0.05)。结论:PHT脾次全切组大鼠术后免疫和脾功能比PHT脾全切组大鼠明显改善,肝功能两者无显著变化。

降低内毒素对大鼠肝肺综合征肺损伤的作用

目的:探讨氧氟沙星降低内毒素对大鼠肝肺综合征的肺损伤保护作用。方法:结扎SD大鼠胆总管,建立肝肺综合征(HPS)动物模型。将大鼠分成3组(每组10只),假手术组:分离大鼠胆总管,腹腔注射生理盐水2ml;HPS模型组:结扎大鼠胆总管,腹腔注射生理盐水2ml;氧氟沙星组:结扎大鼠胆总管后腹腔注射左旋氧氟沙星(20mg/kg体重)。6周后检测血清内毒素,血、腹水、胆汁培养需氧或厌氧菌,血气分析,测定门静脉压力,肺干重/湿重比,肺灌洗液和肺组织匀浆中髓过氧物酶含量及丙二醛浓度,并评价肺组织病理变化。结果:与HPS模型组比,氧氟沙星组血浆内毒素浓度显著下降[(59±6.2vs268±35.6)ng/L,P<0.01],门静脉压力[(19.28±2.3vs17.80±2.18)cmH2O,P<0.01]、肺组织肺干重/湿重比(5.1±0.7vs4.9±0.7,P<0.01)、肺髓过氧物酶[(0.40±0.10vs0.24±0.03)U,P<0.01]和丙二醛[(0.32±0.05vs0.22±0.03)μmol/L,P<0.01]含量均有显著降低,肺组织炎症改变明显减轻。结论:降低内毒素可以减轻肝肺综合征的肺损伤。

高脂饮食加低剂量链脲霉素建立小鼠2型糖尿病模型

目的高脂饮食加低剂量链脲霉素(Streptozotocin,STZ)建立小鼠2型糖尿病模型。方法5周的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常饲料组、正常饲料加STZ组、高脂饲料组和高脂饲料加STZ组。相应饲料喂养5周后,按照100 mg/Kg的剂量腹腔注射STZ,然后继续喂养4周。在第5周和第9周末测定小鼠的体重、收缩压、血糖、血胰岛素、血甘油三脂和胆固醇水平。结果STZ注射前各组小鼠的体重、血压、血糖、血胰岛素、血脂和血甘油三脂无明显差异(P>0.05)。STZ注射后4周时,高脂饲料加STZ组小鼠的体重、血糖、血胰岛素、血压和血脂水平明显升高(P<0.05);而其他三组的这些指标无明显改变或仅部分升高。结论高脂饮食加低剂量链脲霉素可建立小鼠2型糖尿病模型,该模型具有人2型糖尿病的主要表型特征和相似的发病过程。

依托度酸诱导SMMC7721细胞凋亡的分子机理研究

目的:探讨选择性环氧合酶抑制剂依托度酸(etodolac)诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的分子机理。方法:采用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳法测定细胞凋亡情况;Westernblotting法检测不同浓度etodolac处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的变化;流式细胞术检测半胱氨酸酶-3(caspase-3)活性的变化;TransAMTMNF-κBp65/p50核转录因子活性检测试剂盒检测核因子-κB(NF-κB)活性变化。结果:流式细胞术显示etodolac(0.25、0.50、1.0、2.0mmol/L)作用SMMC7721细胞48h后,与对照组(0mmol/L)相比,出现明显凋亡峰(P<0.01vscontrol);高浓度etodolac处理后DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNALadder,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax表达增加;与对照组相比,低浓度组(0.25mmol/L)caspase-3活性未明显活化(P>0.05),NF-κB活性也未受明显抑制(P>0.05),随着etodolac浓度的增大(0.50、1.0、2.0mmol/L),caspase-3活性明显活化(P<0.05vscontrol);NF-κB活性明显受到抑制(P<0.05vscontrol)。经Pearson相关分析,caspase-3活性和NF-κB活性呈显著负相关(r=0.919,P<0.01)。结论:选择性COX-2抑制剂etodolac可能通过抑制NF-κB结合活性,调节Bcl-2、Bax蛋白表达,活化cas-pase-3,从而诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡。

尤斯灌流室系统应用的研究进展

尤斯灌流室(Ussing Chamber)由丹麦学者Ussing研究Na Cl主动转运时首次介绍于世,其简单实用性使其在生物医学界受到越来越多的关注。Ussing Chamber为研究离子、营养物质、药物在各种上皮组织的转运提供了一个生理系统,其主要是通过微电极来检测整个细胞膜的跨膜电位差、短路电流、跨膜电阻。随着科技的不断进步,Ussing Chamber的用途也越来越广泛。本文结合国内外学者对其研究进行了简单综述,简要介绍其基本结构、原理、应用及未来发展趋势。

昆仙胶囊治疗老年类风湿关节炎的疗效观察及对骨代谢的影响

目的观察昆仙胶囊治疗老年类风湿关节炎(RA)的疗效及对骨代谢的影响。方法选取60例老年RA患者作为RA组,随机分为甲氨蝶呤(MTX)组、昆仙胶囊组和联合治疗组,每组20例。另选取同期20例本院体检健康者作为健康对照组。MTX组在常规用药基础上加用MTX片剂治疗,昆仙胶囊组在常规治疗基础上加用昆仙胶囊治疗,联合治疗组在常规治疗基础上联合应用MTX片与昆仙胶囊治疗。比较RA组、对照组以及MTX组、昆仙胶囊组、联合治疗组治疗前后的骨代谢指标[血清骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)];比较MTX组、昆仙胶囊组、联合治疗组治疗前后类风湿关节炎病情活动度评分表(DAS)28评分。结果 RA组患者的OPG(499.69±36.61)ng/L低于健康对照组的(1003.65±82.66)ng/L, RANKL(59.53±8.79)pmol/L高于健康对照组的(23.58±11.83)pmol/L,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗12周后,联合治疗组DAS28评分(2.96±0.17)分显著低于MTX组的(3.83±0.18)分和昆仙胶囊组的(4.21±0.10)分,且MTX组DAS28评分低于昆仙胶囊组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗24周后,联合治疗组DAS28评分(2.85±0.19)分显著低于MTX组的(3.28±0.36)分和昆仙胶囊组的(3.31±0.20)分,差异具有统计学意义(P<0.05);但MTX组和昆仙胶囊组DAS28评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗12、24周后三组患者RANKL水平均较治疗前降低, OPG水平均较治疗前升高,且联合治疗组的RANKL水平低于MTX组和昆仙胶囊组, OPG水平高于MTX组和昆仙胶囊组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。MTX组与昆仙胶囊组治疗12、24周后OPG、RANKL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RA患者外周血OPG与DAS28评分呈负相关(r=-0.431, P<0.05),RANKL与DAS28评分呈正相关(r=0.503, P<0.05)。结论昆仙胶囊治疗老年PA可以通过调节NFκB受体激活剂(RANK)/RNAKL/OPG系统抑制炎症反应实现骨保护作用,昆仙胶囊和MTX联合应用较单药治疗效果更佳。

一种新的大鼠灌胃方法——侧抓灌胃法

目的建立一种新的大鼠抓握和灌胃方法。方法建立新的大鼠侧抓灌胃方法,达到了操作更简便易行的目的。150只大鼠,分为6组,做中间生物标记物(intermediate biomarkers)研究,每只大鼠每天灌胃1次,持续6个月。结果所有动物存活良好,顺利完成实验。讨论新的大鼠侧抓方法改变了大鼠本能性自卫防御的条件反射,在灌胃时能够更好地固定大鼠,更适合对大批量的大鼠进行无损伤、长期安全有效的灌胃。

防御素与脓毒症

脓毒症（sepsis,又名全身性感染）是机体感染后所致的全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）,是创（烧）伤、感染、休克及外科大手术后的常见并发症。重症脓毒症（severe sepsis）、脓毒性休克（septic shock）和多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,

纳秒脉冲电场治疗引起的肿瘤微环境变化有助于肿瘤消融

为了观察研究ns脉冲电场(ns PEFs)导致肿瘤微环境变化对肿瘤消融效果的影响,设计进行了细胞实验和动物实验。细胞实验是利用ns脉冲电场电击人肝癌细胞HCCLM3细胞,通过流式细胞仪和CCK-8法分别检测电击后肿瘤细胞的凋亡坏死和增殖抑制情况。动物实验是通过苏木精-伊红(HE)染色法观察实验组肿瘤内的炎性细胞浸润情况和肝脏血管管腔电击后的凝血栓塞情况。实验结果表明:当脉冲数n较小(n=6、12)时,细胞凋亡坏死较少;当脉冲数n加大(n=18、30)时,细胞凋亡坏死明显增加且24 h时间后的增殖率明显降低;电击处理大鼠肝脏后发现电场作用范围内的血管出现广泛凝血栓塞;实验组裸鼠肿瘤体积逐渐缩小成疤痕状,肿瘤内出现大片坏死伴弥漫炎性细胞浸润。可得结论:ns脉冲电场对皮下肿瘤消融过程中主要引起3个方面的微环境变化从而有助于对局部肿瘤的控制,包括电场本身引起的部分肿瘤细胞即时坏死凋亡、肿瘤供血血管栓塞导致的继发性肿瘤缺血坏死、富集的炎性细胞引起的肿瘤自我消亡。

受体酪氨酸激酶c-kit及其配体SCF在正常肝及肝癌组织中的共表达

目的:观察受体酪氨酸激酶ckit及其配体干细胞因子(stemcellfactor,SCF)在人正常肝、肝硬化、癌旁肝及肝癌组织中的共表达。方法:用免疫组化/免疫荧光染色方法和组织芯片检测受体酪氨酸激酶ckit及其配体在166例肝癌和配对癌旁肝、16例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异及其共表达状况。结果:免疫组化检测ckit在肝癌、癌旁肝、硬化肝和正常肝组织中的阳性率分别为47.59%,95.78%,93.75%和100%,其中强阳性(≥++)率分别为27.71%,77.71%,87.53%和100%,ckit蛋白在肝癌组织中明显低表达;而SCF在肝癌、癌旁肝、硬化肝和正常肝组织中的阳性率分别为68.07%,100%,100%和100%,其中强阳性(≥++)率分别为35.54%,94.58%,93.75%和100%,SCF在肝癌组织中也呈现低表达;但SCF在各种组织中的表达均高于ckit。免疫荧光检测受体酪氨酸激酶ckit及其配体SCF在各种组织中均有不同程度的共表达,且均定位于肝癌细胞和肝细胞的细胞质中,其中在肝癌、癌旁肝、硬化肝和正常肝组织中的共表达率分别为51.20%,100%,100%和100%,而肝癌组织的强阳性共表达(≥++)率仅为25.30%,其他组织均高于95%。结论:与正常肝、硬化肝、癌旁肝组织相比,肝癌组织中ckit和SCF均呈低表达,但SCF在相应组织中的表达稍高于ckit;正常肝、硬化肝、癌旁肝组织中ckit/SCF共表达远高于肝癌组织。

长期灌流维持肾脏功能损伤的内在机理研究

采用低温机械灌流(hypothermic machinery continuous perfusion,MP)研究离体肾脏的功能.灌流维持120 h,本地家猫肾脏功能呈现出阶段性变化,灌流72 h后肾脏功能出现明显的转折.比较灌流后肾近曲小管上皮细胞超微结构和肾皮质ATP酶活性变化,发现灌流72 h离体肾脏功能最显著的变化为近曲小管上皮细胞结构破坏;改变灌流溶液渗透压能够延迟灌流肾脏功能转折,并对近曲小管上皮细胞超微结构损伤有明显的调节作用.

小鼠胰岛密度梯度离心方法的研究

目的探索最优的密度梯度离心方案,提高胰岛的纯度和得率,为胰岛移植相关研究奠定基础。方法采用雄性Balb/c小鼠作为供体分离胰岛,以0.5mg/ml胶原酶XI灌注和消化胰腺,通过不同的密度梯度离心策略分离纯化胰岛,进行双硫腙(DTZ)特异染色法染色,显微镜下观察胰岛的纯度和得率,并通过吖啶橙(AO)/碘化丙啶(PI)染色检查分离获得的胰岛活性,最终确定最佳的密度梯度离心方法。结果Balb/c小鼠在Ficoll-1 108(4ml)、1.096(2ml)、1.069(2ml)、HBSS(2ml),加速度1、减速度1、400r/min、4min中转1 800r/min、8min离心后胰岛得率为(125±39)IEQ、纯度为(79.6±10.5)%,经相同条件二次梯度后得率无明显降低但纯度明显提高,达(96.2±1.4)%。经AO/PI染色鉴定分离胰岛活性良好。结论本研究所采用的小鼠胰岛密度梯度离心方法很有效,能稳定地获得纯度较高且数量可观的胰岛。

液体活检在器官移植领域的应用进展

器官移植是目前治疗终末期器官功能衰竭的最有效手段,但术后仍面临并发移植物功能障碍、排斥反应和肿瘤复发等风险。移植受者的合理选择、术后并发症的实时预警、精确的早期干预以及个体化治疗是获得良好移植预后的重要保障。液体活检是精准医疗时代极具发展前景的无创检测手段之一,人类体液中几乎所有分子都能被其“捕获”并进行多组学检测与生物信息学分析,进而用于指导临床诊疗。由于器官移植供、受者和移植物各自具有独特的分子特征,液体活检在器官移植领域中的应用前景广阔。