人胚胎干细胞向肌腱细胞分化方法的专家共识

胚胎干细胞具有无限增殖能力，可能为组织工程提供肌腱细胞或肌腱祖细胞的来源。为规范人胚胎干细胞来源的肌腱细胞的分化方法，提高人肌腱细胞的纯度，保证分化方法的可重复性，使其更系统、规范和有效地应用于临床和生物安全性评价体系中，科技部国际合作专项有关专家制定了《人胚胎干细胞向肌腱细胞分化方法共识》。共识建议通过两步法将人胚胎干细胞诱导为肌腱细胞：首先利用不同材料表面将人胚胎干细胞诱导为成体间充质干细胞，然后采用高密度种植形成无支架组织工程肌腱，并利用静态或动态力学刺激在体内外环境下将成体间充质干细胞诱导成肌腱细胞。由此建立的体外组织工程肌腱可作为检测评价模型。对小分子化合物、医用材料和药物进行肌腱相关的毒理学系统分析和安全性评价。

新型甲型H7N9禽流感病毒HA与NA的进化分析

目的研究2013年甲型H7N9流感病毒血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)的基因进化特征,探讨该病毒的遗传变异和分子特性。方法收集GenBank中已登录的禽流感病毒基因相关参考序列,利用生物信息学软件DNAMAN和MEGA 4.0对HA和NA基因序列进行进化分析,并利用Phymol软件进行同源建模。结果 2013年甲型H7N9流感病毒HA与NA的氨基酸序列与国际/国内参考毒株的同源性为95.7%～99.8%。同源建模发现该毒株HA的氨基酸序列发生了Q226L突变,NA上也发生了R294K和69 5N del氨基酸突变。结论新型甲型H7N9流感病毒的HA和NA基因序列与我国江浙地区和部分东亚国家的H7N9禽流感病毒参考株具有高度的同源性,该毒株HA与NA蛋白氨基酸序列发生的变异,可能是病毒致病性改变的原因之一。

MTHFR C677T多态性与消化系统癌症及冠心病易感性的关系

目的:探讨浙江地区汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T位点多态性与癌症及冠心病易感性的关系。方法:选取确诊的消化系统癌症(包括胃癌、结肠癌、直肠癌及食管癌)患者、冠心病患者以及健康体检者各100例的全血标本,提取血基因组DNA,采用Real-time PCR和测序两种方法检测MTHFR位点的基因多态性。结果:癌症组的MTHFR基因野生型C/C、杂合基因型C/T及纯合变异型T/T的基因型频率分别为34%、46%和20%,冠心病组为32%、53%和15%,健康对照组为34%、54%和12%。与正常对照组相比,消化系统癌症或冠心病患者MTHFR C677T各基因型的分布均无显著性差异(P>0.05)。结论:在浙江地区人群中,未发现MTHFR基因C677T多态性与消化系统癌症或冠心病的易感性存在显著相关性。

西罗莫司全血浓度测定方法及临床应用

目的评价2种分析方法同时检测中国肾移植患者的全血中西罗莫司浓度的差异。方法用高效液相色谱质谱联用法（LC—MS／MS）和化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）分别测定中国肾移植患者全血西罗莫司浓度，评价2种分析方法的相关性。结果LC—MS／MS法专属性强、精密度、稳定性好，能满足临床检测要求。2种方法测得的数据相关系数为0．963（P〈0．05），2组数据间存在相关性（n=78）。当西罗莫司浓度在2～10ng·mL-1时，2种方法测定的平均偏差为2．8ng·mL-1。结论LC—MS／MS和CMIA测定西罗莫司全血浓度的分析方法存在相关性；同一份样本用CMIA测定的浓度均值比LC—MS／MS法测定的值高。

他克莫司致移植后糖尿病发病机制的研究和治疗进展

移植后糖尿病(PTDM)是实体器官移植术后最为常见的严重并发症之一,可导致移植术后移植物失功、感染、心血管疾病发生以及急性排斥反应发生,严重影响移植受者生存率与生存质量。随着器官移植的发展,PTDM越来越受到重视。他克莫司作为一种强效免疫抑制剂,目前广泛应用于移植受者,但较易引起PTDM,限制了其在临床的应用。本文就他克莫司致PTDM发病机制研究及治疗进展作一综述。

直接测序法和qPCR-HRM法检测NSCLC组织EGFR突变的比较研究

目的比较直接测序法和实时聚合酶链反应-高分辨率融解曲线技术(q PCR-HRM)检测非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的差异,探讨适用于临床检测EGFR基因突变的方法,为NSCLC患者的靶向治疗提供理论依据。方法共收集NSCLC患者组织标本52例,分别采用q PCR-HRM法和直接测序法进行EGFR基因突变检测,采用χ2检验对检测结果进行统计学比较。结果 52例NSCLC患者组织标本中,直接测序法检测的EGFR基因突变率为30.8%(16/52),q PCR-HRM法检测的EGFR基因突变率为32.7%(17/52),两种方法检测结果相比较,差异无统计学意义(χ2=0.04,P>0.05)。结论与直接测序法相比较,q PCR-HRM法是一种操作简便、费用低、速度快、灵敏度高的检测方法,对于临床筛选适合EGFR-TKI治疗的NSCLC患者亚群,预测EGFR-TKI疗效都具有重要意义,值得临床进一步推广应用。

干细胞移植在治疗神经退行性疾病方面的临床应用

社会老龄化关联的神经退行性疾病已成为不容忽视的医学和社会问题,药物治疗至今无法达到令人满意的治疗效果。干细胞移植替代疗法可单独或结合药物治疗,为神经退行性疾病的治疗提供了新的途径。本文就目前干细胞移植在神经退行性疾病的治疗中取得的研究进展进行总结,包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病和肌萎缩性侧索硬化症等,探讨干细胞移植在治疗神经退行性疾病方面的有效性、安全性和可行性,以及存在的困难和问题。同时也对干细胞移植治疗神经退行性疾病在未来发展中可能遇到的挑战进行了展望,希望能为其将来在临床上进一步应用提供一定的参考依据。

人胚胎干细胞向成纤维细胞分化方法的专家共识

人胚胎干细胞（ESC）是一类从囊胚期的人胚胎内细胞团中分离所得的，具有体外自我更新稳定性并维持正常核型和发育多能性，甚至参与整个个体发育的高度未分化干细胞［1］。利用人ESC或由其分化而成的人体细胞、组织或器官来测试各种生物医用材料、食品及药物对人体的毒理特性或药效，较运用动物或永生化细胞更能反映人体真实的状况。因此，人ESC及其分化的细胞有望发展成为一种崭新的生物安全性检测和药物筛选模型［2］。目前多数研究仍用永生化细胞系或原代培养细胞进行生物材料的安全性评价［3-4］，分别存在核型异常或批次差异大等缺点。人ESC来源的成纤维细胞（ ES-F ）具有来源稳定，核型正常以及容易标准化等优点［5-6］，有望成为生物安全性评价体系的新模型［7］。规范人ESC向成纤维细胞分化方法是保证生物安全性检测评价模型可靠性的关键。为此，科技部国际科技合作重点项目“创建基于人胚干细胞的预测健康安全新体系”的项目组专家经反复讨论，制定了“人胚胎干细胞向成纤维细胞分化方法的专家共识”（以下简称“共识”），旨在规范人ES-F的分化方法，提高人ES-F的纯度，保证分化方法的可重复性，使其更系统、规范和有效地应用于临床和生物安全性评价体系中。

不同大鼠心脏死亡器官捐献模型肝脏损伤比较研究

目的探讨不同大鼠心脏死亡器官捐献模型供肝损伤机制。方法将15只SD大鼠按随机数字表法分为氯化钾注射组、膈肌剪断组、心尖夹闭组,每组5只。氯化钾注射组通过背部浅表层静脉注射10%氯化钾溶液诱导心脏停跳;膈肌剪断组将膈肌剪断导致大鼠低血压和缺氧,诱导心脏停跳;心尖夹闭组开腹后用血管夹夹住左、右心室顶端,诱导心脏停跳。记录各组大鼠心脏停跳时间。3组大鼠心脏停跳后立即下腔静脉采血,检测血清ALT、AST、葡萄糖、乳酸脱氢酶(LDH)含量。取各组大鼠肝脏组织行HE染色,光镜下观察肝脏组织病理学变化。检测各组大鼠肝脏组织中过氧化氢、一氧化氮含量。实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏组织B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Capase-3)转录情况。蛋白质印迹法检测大鼠肝脏组织磷酸化Akt(p-Akt)、Bax和Bcl-2蛋白表达情况。各组大鼠建模后心脏停跳时间、血清肝功能指标、肝脏组织一氧化氮和过氧化氢含量、凋亡相关分子(Bax、Bcl-2、Capase-3)转录水平及相关蛋白表达量比较均采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果膈肌剪断组和心尖夹闭组建模后心脏停跳时间分别为(720±137)、(1 020±142)s,均长于氯化钾注射组[(111±10)s,P均<0.05];氯化钾注射组和膈肌剪断组血清ALT分别为(29±14)、(49±11)U/L,均低于心尖夹闭组[(71±13)U/L,P均<0.05];心尖夹闭组血清AST、葡萄糖和LDH分别为(293±61)、(26.7±6.6)和(2 534±907)U/L,均高于氯化钾注射组[(131±67)、(15.8±8.5)、(1 528±1 170)U/L,P均<0.05]。HE染色结果显示心尖夹闭组和膈肌剪断组较氯化钾注射组有严重的充血和红细胞渗入,而心尖夹闭组与膈肌剪断组差异不明显。氯化钾注射组和膈肌剪断组肝脏组织过氧化氢含量分别为(13.8±3.7)、(13.7±1.8)mmol/L,均低于心尖夹闭组[(19.1±4.1)mmol/L,P均<0.05];心尖夹闭组一氧化氮含量为(13.3±3.2)mmol/L,高于膈肌剪断组[(6.9±0.4)mmol/L,P<0.05]。氯化钾注射组Bax转录量低于膈肌剪断组,心尖夹闭组Bax表达量高于氯化钾注射组,氯化钾注射组P-Akt 473和P-Akt 308表达量显著高于心尖夹闭组(P均<0.05)。结论氯化钾注射组对肝脏损伤影响最小,可能与细胞凋亡减少、P-akt相关信号通路激活有关。