HCMV感染对多种机会性病毒感染的影响

目的探究肾移植前人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对移植后多种机会性病毒(HCMV、多瘤BK病毒(BK virus,BKV)、多瘤JC病毒(JC virus,JCV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV))机会性感染的影响。方法采用免疫组化方法检测肾移植病人移植前后外周血HCMV被膜抗原pp65,巢式PCR方法检测病人尿液标本中的BKV DNA、JCV DNA;ELISA方法检测病人血液标本中的HBV抗原、抗体和HCV丙肝抗体(Anti-HCV);根据移植前有无感染HCMV将病人分为HCMV感染组和非感染组。结果 HCMV感染组与非感染组移植后HCMV、JCV、BKV、HBV、HCV感染率分别为20%与2.8%(P=0.049)、50%与19.4%(P=0.017)、0%与8.3%(P=0.545)、0%与13.9%(P=0.144)、0%与3.0%(P=1.000)。结论肾移植前HCMV感染不仅可引起移植后HCMV再激活感染,还可转化激活JCV的复制和感染。

肾移植术后多瘤JC病毒感染

目的探究肾移植受者术后多瘤JC病毒(JCvirus,JCV)的感染情况及其感染的危险因素。方法采用巢式PCR方法检测32例肾移植病人术后尿液标本中的JCV-DNA,并以15例健康体检者为对照;免疫组化法检测肾移植病人外周血巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)被膜抗原pp65;以病人的年龄、性别、免疫抑制方案、CMV感染作为影响JCV感染的危险因素。结果 JCV在肾移植病人中的感染率为43.8%,健康体检者为0.0%。与非感染者相比,感染者的年龄更大,使用MMF+强的松+环孢素的三联免疫抑制剂的感染比例更高,差异具有统计学意义(t=2.106,P=0.044;χ2=5.723,P=0.017)。结论 JCV在肾移植者中的感染率高,年龄和使用强的松+MMF+环孢素三联免疫抑制方案是影响JCV感染的危险因素。

核苷（酸）类似物序贯干扰素治疗乙型肝炎病毒e抗原阳性慢性乙型肝炎患者的临床观察

目的观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者在核苷（酸）类似物抗病毒治疗基础上序贯聚乙二醇干扰素α-2α（PEGIFNα-2α）治疗48周血清HBsAg的变化。方法6例HBeAg阳性CHB患者中，3例采用核苷（酸）类似物序贯PEGIFNα-2α治疗48周，3例维持原核苷（酸）类似物治疗方案，每12周采用实时PCR定量检测HBVDNA，采用时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗-HBe及抗-HBc。结果核苷（酸）类似物序贯PEGIFNα-2α治疗48周后，3例序贯治疗患者血清HBsAg均消失，而维持原核苷（酸）类似物治疗患者血清HBsAg效价为100～320IU／mL。结论对核苷（酸）类似物治疗产生较好应答反应且伴有血清HBsAg效价明显下降的HBeAg阳性CHB患者，在核苷（酸）类似物抗病毒治疗基础上序贯PEGIFNα-2α治疗48周能有效促进血清HBsAg下降，并出现血清HBsAg消失的现象。

原位肝移植大鼠肠道微生态状况研究

目的探讨肝移植术后大鼠肠道微生态的变化。方法将雄性Brown-Norway（BN）大鼠40只随机分成肝移植组（BN-BN，n=16，共8对）、模拟移植组（n=8）、假手术组（n=8）和对照组（n=8），24h后处死，分析肠道菌群构成、回肠末端超微结构变化、血浆内毒素水平以及细菌易位至肝、脾、肾和肠系膜淋巴结的比例。结果肝移植术后24h存在明显的肠道菌群紊乱，表现为肠杆菌科细菌和肠球菌数量增加（P〈0．05），乳杆菌和双歧杆菌数量下降（P〈0、05），移植组与模拟移植组存在肠黏膜上皮细胞微绒毛的损伤；肝移植组血浆内毒素水平升高（P〈0．01），细菌易位至肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结的阳性率增加（P值均〈0、05）；与模拟移植组比较，肝移植组细菌易位至肝脏的阳性率增加（P〈0．05）。结论肝移植术后存在一定程度的肠道微生态紊乱和肠道屏障功能损伤，可能与肝移植手术过程中所经历的缺血再灌注过程有关。

抗病毒治疗过程中慢性乙型肝炎患者外周血辅助性T细胞因子的变化

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血辅助性T细胞因子水平在抗病毒治疗过程中的变化，进一步探讨其与CHB发病的关系。方法在33例CHB患者采用恩替卡韦抗病毒治疗过程的不同时期，采用ELISA法检测其外周血IL-2、IL-6、IL-10、IFNγ和TNF-α水平，并同时检测患者肝功能。治疗前后细胞因子水平比较采用单因素方差分析，细胞因子水平变化与ALT、HBVDNA水平间行相关性分析。结果IFNγ水平在治疗前及治疗12、24、48周分别为（5．98±2．77）、（5．95±3．37）、（2．93±2．15）、（9．29±4．65）pg／mL（F=3．845，P〈0．05），与ALT呈正相关（r=0．396，P〈0．05）；TNF—α及IL-10治疗前后呈逐渐下降趋势，各时期间差异有统计学意义（F=20．156，16．695；均P〈0．05），与ALT均呈正相关（r=0．354，0．316；均P〈0．05），与HBV DNA也均呈正相关（r=0．382，0．386；均P〈0．05）；IL2、IL-6治疗前后各时期间差异无统计学意义（F=0．010，0．932；均P〉0．05）。治疗前及治疗后各时期ALT、HBV DNA水平间差异有统计学意义（F=17．69，198．98；均P％0．05），均随抗病毒治疗时间的延长逐渐降低，且两者间呈正相关（r=0．581，P〈0．05）。结论IL-10、IFNγ、TNF-α等细胞因子可能参与CHB病理过程，并与肝炎的病情变化密切相关，抗病毒过程中检测其血浆浓度有助于了解机体免疫情况，评价抗病毒药物疗效。

细菌β-内酰胺酶检测的临床意义

自20世纪40年代β-内酰胺类抗生素——青霉素首次被发现并在临床应用以来，β-内酰胺类抗生素家族不断发展和壮大，是目前临床使用最广泛的抗菌药物。近年来细菌对β-内酰胺类抗生素耐药性也迅速增加，耐药机制主要包括：（1）青霉素结合蛋白（PBP）的改变；（2）细菌细胞外膜通透性改变，减少抗生素的进入或增加外流，降低抗生素在细菌体内的积聚；（3）产生β-内酰胺酶。其中又以β-内酰胺酶引起的耐药最为突出。

TCRβ链CDR3概况与感染性疾病的研究

外周血大部分T细胞膜表面抗原受体分子（TCR）由α/β多肽链构成，α/βBTCR特异性识别抗原多肽与MHC分子复合物。分析克隆性增生TCRBVCDR3的基因谱型特征，可以了解机体T细胞增殖与功能状况，从而有助于T细胞相关疾病的诊断和治疗，通过直接移植特异性T细胞来治疗相关疾病，也能发展以特异性TCR基因为基础的转基因技术来治疗相应疾病。此文主要就TCRβ链特点及其在感染性疾病的诊断与治疗上的应用作了阐述。

染料法实时荧光PCR检测慢性乙型重型肝炎患者外周血克隆特异性αβT淋巴细胞

以染料法（SYBR GreenⅠ）实时荧光PCR并结合基因熔解曲线峰形来监测慢性乙型重型肝炎（慢乙重肝）患者（健康献血者为对照）外周血T细胞受体β链基因（TCRBV）克隆特异性扩增情况，从而可能反映慢乙重肝患者对HBV感染的免疫应答状态。

染料法实时荧光聚合酶链反应检测人外周血αβT淋巴细胞克隆的条件优化及初步应用

目的 探讨实时荧光PCR检测人外周血αβT淋巴细胞克隆性扩增的反应条件及在监测慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者外周血克隆特异性T淋巴细胞上的初步应用.方法 染料法（SYBR Green Ⅰ）实时荧光PCR对6例健康献血者外周血单个核细胞（PBMC）来源的T淋巴细胞受体β链可变区（TCRBV）基因进行扩增,分别就退火温度、引物浓度、循环数等进行比较研究.优化后PCR检测12例慢乙肝患者PBMC来源的TCRBV的24个基因家族,作PCR产物的熔解曲线峰形图,并分析T淋巴细胞克隆性扩增情况.结果 染料法实时荧光PCR检测 TCRBV基因家族的最佳退火温度为60.6℃,引物终浓度为0.5 μmol/L,循环数为40个,且熔解曲线分析起始温度80℃优于75℃.PCR产物熔解曲线峰形图上发现,慢乙肝患者某些TCRBV基因家族表现为单峰,测序结果表明其为单克隆PCR产物.结论 本研究优化了染料法实时荧光PCR检测TCRBV基因家族方法,熔解曲线峰形图可用于检测人外周血T淋巴细胞的克隆性扩增,并可能用于检测慢乙肝患者外周血克隆特异性T淋巴细胞.