臭氧在IVC实验动物环境中的应用研究

目的探讨独立通风系统(IVC)动物实验室内使用臭氧发生器消毒的可行性。方法使用臭氧检测管测定实验室内的和运行中的IVC内的臭氧浓度,观察大鼠的健康状况、生化指标、气管和肺的组织病理学状况。结果发现IVC笼盒的低、中、高3级过滤器,对臭氧有一定的屏障作用,可以减少80%。大鼠在无特殊保护的情况下,对臭氧的耐受能力较高,在面积为35 m3的IVC动物实验室内,对采用臭氧发生量3 g/h的设备开启35 min,没有检测到大鼠生理和病理的变化。结论臭氧发生器能够用于IVC动物实验室的环境消毒。

显微外科技术在小鼠器官移植中的应用与体会

探讨交流显微外科技术在小鼠心脏和肝脏移植中的应用。探讨掌握显微外科技术的要点,并根据文献和自身的经验讨论小鼠动静脉在显微镜下的缝合,以及采用双人"双袖套"法进行门静脉、肝下下腔静脉吻合,支架法重建胆管连接的经验和体会。为器官移植实验技术操作提供参考。

依托度酸诱导SMMC7721细胞凋亡的分子机理研究

目的:探讨选择性环氧合酶抑制剂依托度酸(etodolac)诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的分子机理。方法:采用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳法测定细胞凋亡情况;Westernblotting法检测不同浓度etodolac处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的变化;流式细胞术检测半胱氨酸酶-3(caspase-3)活性的变化;TransAMTMNF-κBp65/p50核转录因子活性检测试剂盒检测核因子-κB(NF-κB)活性变化。结果:流式细胞术显示etodolac(0.25、0.50、1.0、2.0mmol/L)作用SMMC7721细胞48h后,与对照组(0mmol/L)相比,出现明显凋亡峰(P<0.01vscontrol);高浓度etodolac处理后DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNALadder,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax表达增加;与对照组相比,低浓度组(0.25mmol/L)caspase-3活性未明显活化(P>0.05),NF-κB活性也未受明显抑制(P>0.05),随着etodolac浓度的增大(0.50、1.0、2.0mmol/L),caspase-3活性明显活化(P<0.05vscontrol);NF-κB活性明显受到抑制(P<0.05vscontrol)。经Pearson相关分析,caspase-3活性和NF-κB活性呈显著负相关(r=0.919,P<0.01)。结论:选择性COX-2抑制剂etodolac可能通过抑制NF-κB结合活性,调节Bcl-2、Bax蛋白表达,活化cas-pase-3,从而诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡。

实验动物手术室使用臭氧和紫外线灭菌的效果观察

目的观察以肝、心、肾等器官移植为主的医学实验动物手术室,使用臭氧和紫外线的物理学方法灭菌的效果。方法在实验室运转后,用物理的臭氧和紫外灭菌与化学的2%戊二醛灭菌方法进行比较,用平皿菌落记数和物品表面微生物检测,重复消毒灭菌和检测各3 d,观测消毒灭菌效果。结果臭氧的泄漏不多,易于隔离和应用。两种方法的平皿菌落记数和物品表面微生物检测均达标。结论臭氧和紫外线物理灭菌方法在完成消毒后无残留物质,可进入缝隙,在实验动物手术室等存放大量仪器物品的实验室,用物理方法替代化学方法值得提倡。

实验动物随机分组的计算机程序处理

目的建立精细的动物实验的分组方法,作为有关实验设计的标准操作程序(Standard Operation Procedure,SOP)。方法用计算机Excel程序对大量实验动物按体重排序进行随机分组。结果 500只大鼠用Excel计算机程序随机分组研究27周后,线性回归分析动物的组间平均体重无统计学差异,达到理想的分组结果。结论改以往不按照体重的单纯随机表分组法为按体重排序随机分组,可在概率上使科研设计更为精细。

移植物动脉硬化模型大鼠血管平滑肌细胞原代培养及鉴定

目的探讨大鼠腹主动脉移植后，血管平滑肌细胞（VSMC）的分离、培养方法。方法建立BN至Lewis腹主动脉移植的慢性排斥反应、动脉硬化模型，60d后用组织块贴壁方法分离、培养血管平滑肌细胞并进行传代。采用形态学和肌动蛋白免疫组化鉴定证实为VSMC。结果细胞呈典型的“峰．谷”样生长，历次传代鉴定均为高纯度VSMC，传代至6代左右仍能保持原有性状，细胞活力未见减低。结论组织块贴壁法培养大鼠腹主动脉移植后vsMc具有操作简单、细胞活力高、纯度高等优点，可作为研究器官移植慢性排斥反应、移植物动脉硬化新的体外实验模型。

必须关注防止医学领域内的唯心科学观

对医学科学领域内存在的和某些一度充斥的唯心科学观的社会表现进行分析,从过程管理和科学方法论的重要性入手,提出防范学术腐败和发展医学科学的方法和措施,从教育和民生的角度探讨医务工作者和社会学家必须关注的医学领域内的唯心科学观,并举例说明医学工作者的科学道德自律和社会责任感的重要性。

瞬时受体电位M4通道与心血管疾病的研究进展

瞬时受体电位M4(TRPM4)通道是Ca激活的单价选择性阳离子通道,在心血管病理生理学中也起着关键作用。TRPM4在心血管系统分布广泛,现有研究表明该通道与心脏结构及动作电位存在相关性。文章重点综述了现有研究中TRPM4通道生理调控机制以及该通道与心血管疾病关系的研究进展,以期有益于该通道在此方面的后续研究。

脾切除对门脉高压症大鼠CD4、CD8和脾功能的影响

目的:研究肝硬化门脉高压症(PHT)大鼠脾次全切除术后CD4、CD8与脾功能的变化。方法:皮下注射60%四氯化碳复制大鼠肝硬化模型。共分5组:正常大鼠组、肝硬化(PHT)组、正常大鼠脾切除组、PHT全脾切除组、PHT脾次全切除组,每组10只。手术后第4周检测各组血常规、肝功能、tuftsin、CD4、CD8等指标。结果:PHT高压症大鼠脾切除术后tuftsin水平[(171±21)ng/Lvs(433±44)ng/L,P<0.01]、CD4/CD8(2.01±0.22vs1.12±0.12,P<0.01)均显著低于PHT组;PHT大鼠脾次全切除组tuftsin[(434±42)ng/Lvs(171±21)ng/L,P<0.01]、CD4/CD8(1.97±0.18vs1.12±0.12,P<0.01)显著高于PHT大鼠脾切除组。肝功能两者无显著差异(P>0.05)。结论:PHT脾次全切组大鼠术后免疫和脾功能比PHT脾全切组大鼠明显改善,肝功能两者无显著变化。

高脂饮食加低剂量链脲霉素建立小鼠2型糖尿病模型

目的高脂饮食加低剂量链脲霉素(Streptozotocin,STZ)建立小鼠2型糖尿病模型。方法5周的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常饲料组、正常饲料加STZ组、高脂饲料组和高脂饲料加STZ组。相应饲料喂养5周后,按照100 mg/Kg的剂量腹腔注射STZ,然后继续喂养4周。在第5周和第9周末测定小鼠的体重、收缩压、血糖、血胰岛素、血甘油三脂和胆固醇水平。结果STZ注射前各组小鼠的体重、血压、血糖、血胰岛素、血脂和血甘油三脂无明显差异(P>0.05)。STZ注射后4周时,高脂饲料加STZ组小鼠的体重、血糖、血胰岛素、血压和血脂水平明显升高(P<0.05);而其他三组的这些指标无明显改变或仅部分升高。结论高脂饮食加低剂量链脲霉素可建立小鼠2型糖尿病模型,该模型具有人2型糖尿病的主要表型特征和相似的发病过程。

常温机械灌注修复长时间冷保存供肝的大动物实验研究

目的探索常温机械灌注(NMP)在挽救大动物边缘供肝中的价值。方法 6只雄性、10~12月龄巴马小型猪分为静态冷保存(SCS)6 h组和SCS 24 h组,每组3只,分别于供肝获取后SCS 6 h、24 h后进行2 h NMP复苏。基于荷兰Organ Assist公司Liver Assist系统和供体猪自身血液,整合四通道生理仪器及自制灌注管路搭建NMP平台。在NMP过程中分别于灌注0、15、60、90、120 min 5个时间点收集灌注液用于肝功能(ALT、AST)检测及血气分析(p H、氧分压)。灌注结束取肝左叶相同位置少许组织,以10%甲醛固定,用于后续HE染色。结果 NMP开始时,SCS 24 h组ALT、AST水平略高于SCS 6 h组,之后AST、ALT水平均缓慢上升。NMP开始时SCS 24 h组p H值中位数为7.28,氧分压中位数为46 mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa,下同),均低于SCS 6 h组(7.36,52 mm Hg),经过2 h NMP后SCS 24 h组p H值和氧分压逐渐接近甚至优于SCS 6 h组。HE染色发现,灌注前SCS 24 h组肝脏充血严重,炎性细胞浸润明显;NMP 2 h后,肝脏充血明显改善、炎性细胞减少,与SCS 6 h组无明显差异。结论基于Liver Assist系统和供体猪自身血液成功搭建的NMP平台,可有效改善长时间冷保存的边缘供肝质量,提示NMP在修复边缘供肝、扩展供肝来源方面具有重要临床及基础研究价值。

昆仙胶囊治疗老年类风湿关节炎的疗效观察及对骨代谢的影响

目的观察昆仙胶囊治疗老年类风湿关节炎(RA)的疗效及对骨代谢的影响。方法选取60例老年RA患者作为RA组,随机分为甲氨蝶呤(MTX)组、昆仙胶囊组和联合治疗组,每组20例。另选取同期20例本院体检健康者作为健康对照组。MTX组在常规用药基础上加用MTX片剂治疗,昆仙胶囊组在常规治疗基础上加用昆仙胶囊治疗,联合治疗组在常规治疗基础上联合应用MTX片与昆仙胶囊治疗。比较RA组、对照组以及MTX组、昆仙胶囊组、联合治疗组治疗前后的骨代谢指标[血清骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)];比较MTX组、昆仙胶囊组、联合治疗组治疗前后类风湿关节炎病情活动度评分表(DAS)28评分。结果 RA组患者的OPG(499.69±36.61)ng/L低于健康对照组的(1003.65±82.66)ng/L, RANKL(59.53±8.79)pmol/L高于健康对照组的(23.58±11.83)pmol/L,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗12周后,联合治疗组DAS28评分(2.96±0.17)分显著低于MTX组的(3.83±0.18)分和昆仙胶囊组的(4.21±0.10)分,且MTX组DAS28评分低于昆仙胶囊组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗24周后,联合治疗组DAS28评分(2.85±0.19)分显著低于MTX组的(3.28±0.36)分和昆仙胶囊组的(3.31±0.20)分,差异具有统计学意义(P<0.05);但MTX组和昆仙胶囊组DAS28评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗12、24周后三组患者RANKL水平均较治疗前降低, OPG水平均较治疗前升高,且联合治疗组的RANKL水平低于MTX组和昆仙胶囊组, OPG水平高于MTX组和昆仙胶囊组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。MTX组与昆仙胶囊组治疗12、24周后OPG、RANKL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RA患者外周血OPG与DAS28评分呈负相关(r=-0.431, P<0.05),RANKL与DAS28评分呈正相关(r=0.503, P<0.05)。结论昆仙胶囊治疗老年PA可以通过调节NFκB受体激活剂(RANK)/RNAKL/OPG系统抑制炎症反应实现骨保护作用,昆仙胶囊和MTX联合应用较单药治疗效果更佳。

一种新的大鼠灌胃方法——侧抓灌胃法

目的建立一种新的大鼠抓握和灌胃方法。方法建立新的大鼠侧抓灌胃方法,达到了操作更简便易行的目的。150只大鼠,分为6组,做中间生物标记物(intermediate biomarkers)研究,每只大鼠每天灌胃1次,持续6个月。结果所有动物存活良好,顺利完成实验。讨论新的大鼠侧抓方法改变了大鼠本能性自卫防御的条件反射,在灌胃时能够更好地固定大鼠,更适合对大批量的大鼠进行无损伤、长期安全有效的灌胃。

纳秒脉冲电场治疗引起的肿瘤微环境变化有助于肿瘤消融

为了观察研究ns脉冲电场(ns PEFs)导致肿瘤微环境变化对肿瘤消融效果的影响,设计进行了细胞实验和动物实验。细胞实验是利用ns脉冲电场电击人肝癌细胞HCCLM3细胞,通过流式细胞仪和CCK-8法分别检测电击后肿瘤细胞的凋亡坏死和增殖抑制情况。动物实验是通过苏木精-伊红(HE)染色法观察实验组肿瘤内的炎性细胞浸润情况和肝脏血管管腔电击后的凝血栓塞情况。实验结果表明:当脉冲数n较小(n=6、12)时,细胞凋亡坏死较少;当脉冲数n加大(n=18、30)时,细胞凋亡坏死明显增加且24 h时间后的增殖率明显降低;电击处理大鼠肝脏后发现电场作用范围内的血管出现广泛凝血栓塞;实验组裸鼠肿瘤体积逐渐缩小成疤痕状,肿瘤内出现大片坏死伴弥漫炎性细胞浸润。可得结论:ns脉冲电场对皮下肿瘤消融过程中主要引起3个方面的微环境变化从而有助于对局部肿瘤的控制,包括电场本身引起的部分肿瘤细胞即时坏死凋亡、肿瘤供血血管栓塞导致的继发性肿瘤缺血坏死、富集的炎性细胞引起的肿瘤自我消亡。

液体活检在器官移植领域的应用进展

器官移植是目前治疗终末期器官功能衰竭的最有效手段,但术后仍面临并发移植物功能障碍、排斥反应和肿瘤复发等风险。移植受者的合理选择、术后并发症的实时预警、精确的早期干预以及个体化治疗是获得良好移植预后的重要保障。液体活检是精准医疗时代极具发展前景的无创检测手段之一,人类体液中几乎所有分子都能被其“捕获”并进行多组学检测与生物信息学分析,进而用于指导临床诊疗。由于器官移植供、受者和移植物各自具有独特的分子特征,液体活检在器官移植领域中的应用前景广阔。

肝移植病人免疫耐受检测方法研究进展

在肝移植病人中，运用客观且简便的方法评估病人免疫耐受程度非常重要。本文对这一方面的研究做一综述：研究受体与移植物间的细胞因子网络预测早期同种异体反应的强度；检测调节性T细胞、DC前体细胞和T细胞同种异体反应预测病人长期的操作性耐受状况。

高压超短脉冲电场消融:一种微创治疗的新范式

微创外科代表了外科学发展的新趋势,其中,将能量传递到病灶、控制局部温度来完成治疗的“热消融”疗法,已经被推荐为多种直径<5 cm的实体瘤的根治性疗法之一。对于位置靠近血管等重要结构、临床上不适合手术治疗的肿瘤,也难以施行“热消融”治疗。基于“高压超短脉冲电场”的细胞生物学效应开发的新一代微创治疗技术,能够在根除癌灶的同时避免损伤病灶周围功能性管道结构,弥补了“热消融”疗法的不足。如果展开多学科研究继续发展这项技术,这种“非热消融”疗法将成为微创消融技术的新范式。而“高压超短脉冲电场”致死细胞的生物物理学原理是这种多学科合作研究的基础。本文先回顾了“诱导跨膜电位”假说的发展历史。然后从热力学的原理出发,介绍我们最近提出的这类疗法的生物物理学机制“等效力场”假说:细胞外电场可以被等效地看成作用于细胞膜上带电粒子的力场。电场力是远距离作用力,在脉冲作用过程中对电场内带电粒子加速。这些粒子在没有受到源于分子间相互作用的阻力之前,超短高强度的电场就能够让它们获得导致细胞膜结构变化的平动速度,脉冲电场的作用范围与这种平动速度升高呈正相关。平动动能(与平动速度的平方呈正相关)也属于“热”的一部分,但它不是消融疗效的控制因素。从理论源头理解这种新消融方法,有助于这种微创消融新技术的范式转换。

环孢素对大鼠同种胚胎后肾移植的影响

目的探讨环孢素对胚胎后肾在同种异体成年大鼠体内生长发育及功能发挥的影响。方法将实验组60只行单侧肾脏切除的成年SD大鼠按照使用CsA与否以及移植不同时期(孕后第15、16、17天,E15、E16、E17)的胚胎后肾随机分为6组(E15CsASD、E16CsASD、E17CsASDE15SD、E16SD、E17SD),每组10只,对照组30只SD大鼠同法分组,每组5只,宿主肾脏不切除。Lewis大鼠E15后肾移植到行单侧肾脏切除的成年BN大鼠大网膜(E15CsABN和E15BN),按照使用环孢素与否分为2组,每组15只。术后首日起,使用环孢素组受体大鼠以环孢素8mg·kg-1·d-1皮下注射;不使用环孢素组以等量的生理盐水皮下注射。移植后2～4周开腹观察器官形成情况,并进行组织病理学和后肾功能检查。结果(1)移植后28d,E16SD、E17SD组出现不同程度的排斥反应。E16CsASD、E17CsASD组后肾发育良好、无排斥反应;停用CsA后,原先发育良好的E16CsASD、E17CsASD后肾出现排斥反应。(2)移植后28d,E15SD后肾发育良好,无排斥反应,到100d检查时,发生排斥反应;移植后2周,E15BN组后肾即被完全排斥,而E15CsABN组后肾发育完好。E15CsABN组停用CsA后,原先发育完好的后肾被排斥。(3)移植时宿主肾脏不切除而植入后肾,其后肾不发育。(4)E15CsASD组移植后肾湿重、体积均小于E15SD组(分别为t=-3.

小肝综合征（SFSS）的研究进展

小肝综合征（small-for-size syndrome，SFSS）是成人间活体肝脏移植（living donor liver transplantation，LDLT）最严重的并发症，也是成人间LDLT预后差的重要原因，其确切概念和发病机制尚未统一，存在广泛的争议。本文对其主要发病机制的研究进展作了概括，归纳了相关预防和治疗方案，包括：术前供者和移植物的选择、降低门静脉高灌注、双肝移植技术的应用、分子药物的应用及其他创新技术的使用等五个方面。同时，对其未来的研究方向提出了相关见解。

双袖套法大鼠减体积肝移植模型的改良

供肝来源的短缺困扰临床肝移植发展，小体积肝移植研究渐受重视。我们在大鼠原位肝移植方法的基础上对减体积移植技术进行改进。