实验动物随机分组的计算机程序处理

目的建立精细的动物实验的分组方法,作为有关实验设计的标准操作程序(Standard Operation Procedure,SOP)。方法用计算机Excel程序对大量实验动物按体重排序进行随机分组。结果 500只大鼠用Excel计算机程序随机分组研究27周后,线性回归分析动物的组间平均体重无统计学差异,达到理想的分组结果。结论改以往不按照体重的单纯随机表分组法为按体重排序随机分组,可在概率上使科研设计更为精细。

CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例预测肝移植术后急性细胞性排斥反应发生的临床研究

目的:分析肝移植术后受者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞占单个核细胞比例变化情况及其与急性细胞性排斥反应(ACR)之间的关系。方法:回顾性分析2013年12月至2015年12月在浙江大学医学院附属第一医院接受心脏死亡器官捐献肝移植的80例成人受者临床资料,根据术后是否发生ACR,将受者分为ACR组(25例)和非ACR组(55例)。术前、术后各个时间点抽取参加研究者静脉血并分离外周血单个核细胞,加入异硫氰酸荧光素-单克隆鼠抗人CD19抗体、藻红蛋白-单克隆鼠抗人CD24抗体和别藻蓝蛋白-单克隆鼠抗人CD38抗体,流式细胞仪检测各组CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞百分比。采用t检验和单因素方差分析比较正态分布计量资料,采用χ^(2)检验比较计数资料,采用Kaplan-Meier法绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)。P<0.05为差异有统计学意义。结果:ACR组、非ACR组受者术前外周血平均CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例分别为(3.13±0.91)%、(3.49±0.83)%,差异无统计学意义(t=1.636,P>0.05)。ACR组术后发生ACR前外周血平均CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例为(1.87±0.70)%。非ACR组受者术后3个月、6个月和1年外周血平均CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例分别为(1.64±0.52)%、(1.63±0.56)%和(2.04±1.24)%,术后3、6个月平均值均低于术前和术后1年,差异均有统计学意义(P均<0.05)。ACR组受者发生ACR时外周血平均CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例为(0.8±0.5)%,低于发生ACR前的平均水平(t=5.752,P<0.05),且低于非ACR组术后3个月、6个月和1年的平均水平(P<0.05)。ACR组受者接受抗排斥反应治疗后,CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例也逐渐增加,ACR发生后7 d为(0.84±0.08)%,与ACR发生时相比差异无统计学意义(P>0.05);而发生30 d后达(1.65±0.18)%,与ACR发生时相比差异有统计学意义(P<0.05)。当截断值为1.015%时,CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例预测ACR发生的敏感度和特异度分别为0.786和0.702,ROC曲线下面积为0.775(95%CI:0.671~0.879,P<0.05)。结论:CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi) B细胞比例下降与肝移植术后ACR反应发生有关,并可作为预测ACR发生的细胞标志物。

不同时间下超低温保存肝癌组织细胞RNA完整性的差异分析

目的研究肝癌组织细胞样本于-80℃超低温保存条件下的质量控制,探讨肝癌组织细胞样本在超低温保存中的时效性。方法随机抽取超低温新鲜冻存(24 h内)、保存3个月、6个月和1年不同时长的肝癌和对应的癌旁组织细胞各12对,HE染色评估标本取材的准确性,采用Promega自动提取核酸仪提取肝脏细胞RNA,利用Agilent 2100生物分析仪进行RIN值及28S/18S比值分析。对新鲜冻存、保存3个月、6个月以及1年的组织细胞样本的RIN值和28S/18S比值进行组间非配对t检验。结果 HE染色镜下观察发现切片组织细胞中肿瘤细胞比例达到80﹪以上,为生物样本库的合格样本。生物分析仪检测结果显示超低温新鲜冻存、保存3个月、6个月和1年的癌和癌旁组织细胞的RIN均值均>7.0,平均28S/18S比值均>1.5,组间非配对t检验显示,保存1年的肝癌组织细胞相比于新鲜冻存(7.442±0.674 vs 8.617±0.769,P=0.001)、保存3个月(7.442±0.674 vs 8.275±0.617,P=0.005)和6个月(7.442±0.674 vs 8.175±0.970,P=0.043)的组织细胞RIN值显著下降,提示存在一定程度的RNA降解,而其余各组之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论在超低温条件下新鲜冻存、保存3个月、6个月的肝癌及癌旁组织细胞,其质量均可以获得有效保证,而保存1年的肝癌组织细胞的RNA虽然存在一定程度的降解,但能够满足后续临床科研的要求。