供体骨髓输注减轻同种肝移植排斥反应

目的:研究非清髓性骨髓移植在同种肝移植免疫反应中的作用及其意义。方法:动物实验为同种大鼠肝移植:Ⅰ组为W istar→W istar同基因对照组;Ⅱ组为SD→W istar急性排斥组;Ⅲ组为SD→W istar环孢素A(cy-c losporine A,CsA)肌肉注射处理组;Ⅳ组为SD→W istar术前1周大剂量供体骨髓细胞输注处理组。用术后一般状态、生存时间、病理学排斥分级、肝标本中IL-2、IFN-γ的表达以及胸腺内嵌合体的检测等手段,确定不同处理组移植后的排斥反应情况及机体的免疫状态。结果:Ⅰ组大鼠术后无排斥反应发生;Ⅱ组大鼠术后9-13 d内全部死亡,中位存活时间(10.7±0.5)d,排斥反应明显;Ⅲ组大鼠仅见轻度排斥;Ⅳ组自然存活亚组6只大鼠4只长期存活(>100 d),排斥分级明显低于Ⅱ组(P<0.05),与Ⅱ组相比,Ⅳ组IL-2、IFN-γ蛋白的表达均明显下调。在骨髓输注15 d后,用PCR法在雌性W istar大鼠受体胸腺内可检测到雄性SD大鼠供体特异性的Y染色体(Y-chromosom e-spec ific sequence,Sry)基因片段。结论:供体骨髓输注可形成供受体细胞的嵌合状态,可降低同种异体肝移植的排斥反应,延长受体生存时间。

大鼠同种异体肝移植急性排异反应的蛋白质组学研究

为更好的理解原位肝移植免疫排异反应的分子机理,分别建立了大鼠同种异体肝移植的动物模型作为急性排异组和大鼠同基因移植的动物模型作为非排异对照组.利用荧光差异显示双向凝胶电泳并整合内标法与正、反相荧光标记,对急性排异组和对照组大鼠肝移植后的肝组织蛋白质表达谱进行了定量蛋白质组学研究.结果表明,有27个蛋白点的表达水平在急性排异组有显著差异,其中13个蛋白点表达水平上调,与对照组相比比值变化超过1.5倍以上,而14个蛋白点表达水平下调,其相应比值变化超过至少1.5倍以上.19个差异表达蛋白经胶内酶切后,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱获得相应的肽指纹图谱并结合数据库搜索得到鉴定.这些差异蛋白的分子功能主要表现为氧化还原活性及离子结合活性.实验结果将有助于进一步了解器官移植排异反应的分子机理.

蛋白酶体抑制剂对T淋巴细胞增殖活化的影响

目的 :探讨蛋白酶体 (proteasome)抑制剂LAC(lactacystin)和 β -LAC(β-lactacystin)对外周血T淋巴细胞增殖、活化的影响。方法 :以植物血凝素 (phytohemagglutinin ,PHA)作为刺激剂 ,经流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖(BrdU掺入率 ) ,检测CD3+ CD2 5 + /CD3+ 及CD3+ CD6 9+ /CD3+ 细胞比例 ,同时用RT -PCR检测蛋白酶体 11S调节蛋白PA2 8及细胞因子IL - 2mRNA的表达。结果 :(1)对预先活化的T淋巴细胞 ,LAC和β -LAC降低T淋巴细胞BrdU掺入率 (P <0 0 5 ) ;(2 )LAC和 β -LAC不影响T淋巴细胞CD6 9的表达 (各时点 ,P >0 0 5 ) ,而显著抑制T细胞表面抗原CD2 5表达 (48h、72h ,P <0 0 5 ) ;(3)与对照组相比 ,LAC和β -LAC明显下调T淋巴细胞PA2 8、IL - 2mRNA的表达(48h、72h ,P <0 0 5 )。结论 :LAC和β -LAC能够显著抑制T淋巴细胞增殖 ,这一效应与其抑制T淋巴细胞表面早期活化抗原CD2 5表达 ,下调PA2 8、IL - 2mRNA的表达有关。

Bcl-2基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的观察人Bcl-2(hBcl-2)基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法将包含hBcl-2基因阅读框架(0·7kb)的核苷酸亚克隆至Psectag2A载体,脂质体转染balb/c小鼠胎肝细胞(BNL.CL2),经门静脉移植入balb/c小鼠(2×106细胞)。移植72h后左肝后叶常温下缺血45min后再灌注8h,比较测定凋亡细胞,血清ALT、AST、LDH,以及组织学的改变。结果转染hBcl-2基因的balb/c小鼠在肝脏缺血再灌注后ALT(P<0·05或0·01)、AST(P<0·05)、LDH(P<0·05)、凋亡细胞(P<0·05)均较对照组显著降低,组织学改变减轻。进行缺血再灌注的各组细胞损伤均以细胞凋亡为主(P<0·05或0·01)。结论hBcl-2基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,主要通过抑制缺血再灌注后的细胞凋亡。