基于核酸适配体的光学纳米传感器在食源性致病菌检测中的应用

食源性疾病一直严重威胁着世界各国人民的健康,而病原菌是引起这类疾病的主要原因。快速、简单、灵敏地筛选食源性致病菌对保证食品安全具有重要意义。纳米材料因其光学特性、独特的结构和催化性能、良好的稳定性和优异的穿透性,已成为近年来光学传感研究的热门课题。作为传感器的信号转换装置和生物识别分子的负载基质,纳米材料具有比表面积大、表面自由能高、生物相容性好、表面官能团丰富等特点。适配体是通过体外筛选的短单链核酸,具有合成简单、稳定性好、亲和力高、选择性强、适用性广等优点,是生物应用中理想的分子受体。利用基于适配体的光学纳米传感器检测食源性致病菌,克服了传统检测方法的耗时费力、难以定量、不便现场检测等缺点,成为当前食源性致病菌快速检测的研究热点。因此,本文综述了食源性疾病的流行现状,基于适配体的光学纳米传感器检测食源性致病菌的最新进展,重点介绍了细菌捕获方法和传感技术,以及它们各自的优势和局限性,提出了该技术在实际应用中面临的挑战和前景,以便促进该领域的进一步发展。

金黄杆菌属连续5年耐药性监测与β-内酰胺酶的检测

目的了解医院金黄杆菌属的分离和耐药情况,并探索其产生耐药的机制。方法对医院5年间分离的金黄杆菌属进行鉴定和K-B法药敏试验;同时选择43株脑膜脓毒金黄杆菌、16株产吲哚金黄杆菌和10株黏金黄杆菌共69株,用琼脂稀释法检测14种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用三维试验和协同试验筛选超广谱β-内酰胺酶及碳青酶烯酶。结果2001年1月-2005年12月5年间共检出金黄杆菌属1128株,其中脑膜脓毒金黄杆菌占88.3%、产吲哚金黄杆菌占8.0%、黏金黄杆菌占2.9%,其他金黄杆菌占0.8%;金黄杆菌属除了喹诺酮类抗菌药物的MIC50和MIC90较低外,其余的抗菌药物均很高;脑膜脓毒金黄杆菌金属酶阳性率为60.5%,产吲哚金黄杆菌阳性率为68.8%,黏金黄杆菌阳性率为90.0%。结论金黄杆菌属对多种抗菌药物耐药,不同种类的金黄杆菌属对不同的抗菌药物耐药性有很大的差异,金黄杆菌属的耐药机制主要是产生了以金属酶为主的β-内酰胺酶。

道路交通伤后心脏肌钙蛋白I的动态变化及其与损伤严重度和急性生理学与既往健康状况Ⅱ评分的关系

目的 观察道路交通伤患者心脏肌钙蛋白I的动态变化并阐明其与损伤严重度 (injuryseverityscore ,ISS)评分和急性生理学与既往健康状况 (acutephysiologyandchronichealthevaluation ,APACHE)Ⅱ评分的关系。方法 将 10 8例道路交通伤患者根据有无合并胸部创伤分为 2组 :合并胸部创伤组 76例 ,无合并胸部创伤组 32例 ,均进行ISS和APACHEⅡ评分。定期采集 2组患者血样品 ,并用微粒子荧光免疫法检测样本cTnI浓度。结果 10 8例道路交通伤患者中cTnI升高 31例 ,发生率为 2 8.7% ,其中合并胸部创伤组 2 5例 ,占 80 .6 % ;无合并胸部创伤组 6例 ,占 19.4 %。动态监测 12例道路交通伤患者血清cTnI释放呈单峰陡降曲线 ,13例为单峰缓降型曲线 ,6例为双峰曲线。通过对道路交通伤分组观察提示 ,无论有无合并胸部创伤 ,在一定范围内 ,ISS值与cTnI峰值成一定相关性 (r =0 .6 76 ,P <0 .0 1) ,而在无胸部创伤的严重道路交通伤患者ISS值与cTnI峰值的相关性更高 (r =0 .734,P <0 .0 1)。单峰曲线的APACHEⅡ分值与双峰曲线的APACHEⅡ分值有明显的差异(P <0 .0 1)。结论 道路交通伤患者血清cTnI释放动力学特点 :其浓度—时间曲线大致有 3种特征 ,即单峰陡降型、单峰缓降型、双峰型 ;在一定范围内 ,ISS值与cTnI峰值正相?

ATB嗜血杆菌药敏试验和肉汤稀释法检测流感嗜血杆菌药物敏感性的比较

目的比较ATB嗜血杆菌药敏试验和肉汤稀释法检测流感嗜血杆菌药物敏感性的性能。方法收集临床分离的流感嗜血杆菌共96株,采用ATB嗜血杆菌药敏试验板条和肉汤稀释法药敏试验测定氨苄西林、氨苄西林-克拉维酸、复方磺胺甲口恶唑、氯霉素、头孢呋辛和头孢噻肟对96株流感嗜血杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果2种方法检测结果的符合率分别为:氨苄西林96.9%、头孢噻肟100.0%、氨苄西林-克拉维酸91.7%、复方磺胺甲口恶唑92.7%、氯霉素95.8%和头孢呋辛97.9%。结论ATB嗜血杆菌药敏试验和肉汤稀释法均可用于临床分离的嗜血杆菌药敏试验。

B7-H4在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:制备小鼠抗B7-H4单克隆抗体后研究B7-H4在胰腺癌中的表达情况及临床意义。方法:以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠;应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方法筛选分泌抗B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对所获得的单克隆抗体进行亚型鉴定,使用Western blot、免疫沉淀和免疫组化等方法对单克隆抗体特异性进行鉴定;应用免疫组织化学染色检测B7-H4分子在胰腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系。结果:获得1株亚型为IgM、轻链为κ型的单克隆抗体,经鉴定该单克隆抗体能与B7-H4发生反应。免疫组化显示:胰腺癌组织中B7-H4在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常胰腺组织(P<0.05)。B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的胰腺癌组织及有淋巴结转移患者的胰腺癌组织中表达显著增强。结论:成功获得了特异性抗B7-H4的单克隆抗体,B7-H4在胰腺癌组织中表达上调,并与患者肿瘤分级和淋巴结转移密切相关。

对亚胺培南耐药粘质沙雷菌中质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶的研究分析

目的研究粘质沙雷菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法临床分离到1株亚胺培南耐药的粘质沙雷菌[最小抑菌浓度(MIC)为64μg/ml]。将粘质沙雷菌和大肠杆菌进行接合试验,采用琼脂稀释法检测粘质沙雷菌和接合前后大肠杆菌对药物的MIC;提取粘质沙雷菌和接合后大肠杆菌的酶粗提液进行等电聚焦电泳和三维试验;特异性PCR扩增和DNA序列分析确认引起粘质沙雷菌对亚胺培南耐药的β-内酰胺酶的基因型。结果除碳青霉烯类抗生素外,粘质沙雷菌还对青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类等抗生素耐药,对喹诺酮类和氨基糖甙类抗生素敏感;接合试验可使大肠杆菌获得与粘质沙雷菌相似的耐药谱;等电聚焦电泳显示粘质沙雷菌中存在等电点(PI)分别为6.5和6.7的两种β-内酰胺酶,接合后的大肠杆菌存在PI为6.7的β-内酰胺酶;特异性PCR扩增和DNA序列分析证实PI为6.7的β-内酰胺酶为碳青霉烯酶KPC-2,其核苷酸及氨基酸序列已递交到GenBank,PI为6.5的酶有待进一步研究;在一维试验中,克拉维酸、乙二胺四乙酸(EDTA)和氯唑西林均不能抑制KPC-2酶对业胺培南的水解活性。结论首次在粘质沙雷菌中发现碳青霉烯酶KPC-2,该酶是引起粘质沙雷菌对亚胺培南耐药的主要原因。

gyrB基因和16S rRNA基因序列分析在沙门菌属细菌鉴别中的临床应用评价

最近研究发现，gyrB基因是16S rRNA基因以外适合细菌鉴别的又一理想靶基因。gyrB基因是编码DNA解旋酶B亚单位的基因，其显著优点是基因进化率较快，碱基替换频率较高，在相似细菌的检测和鉴别方面比16S rRNA基因更具优越性。本实验以10株沙门菌为受试对象，

多发伤患者心脏肌钙蛋白Ⅰ动态变化与创伤评分的关系

目的 观察多发伤患者心脏肌钙蛋白Ⅰ的动态变化并探讨其与损伤严重度评分(ISS)、急性生理学和长期健康评估 (APACHE)Ⅱ及胸部创伤定量的关系。 方法 将 10 8例多发伤患者 ,根据有无合并胸部创伤分为两组 :合并胸部创伤组 76例 ,无合并胸部创伤组 3 2例 ,均进行ISS、APACHEⅡ和胸部简明损伤定级 (AIS)。定期采集两组患者血样品 ,并用微粒子荧光免疫法检测样本心脏肌钙蛋白Ⅰ (cInⅠ )浓度。 结果 动态监测 10 8例多发伤患者中 ,12例血清cInⅠ浓度时间曲线呈单峰陡降型 ,13例为单峰缓降型 ,6例为双峰型。在一定范围内 ,不论有无合并胸部创伤 ,血清cInⅠ峰值与ISS值呈一定相关性 (r =0 .676,P <0 .0 1) ;对合并有胸部创伤患者分重度胸部创伤组 (AIS≥ 3 )与轻、中度胸部创伤组 (AIS <3 )进一步研究发现 ,两组cInⅠ峰值差异有显著性意义 (P <0 .0 5)。对多发伤患者以APACHEⅡ≥ 15为危重组、APACHEⅡ <15为普通组分组研究显示 ,两组患者血清cInⅠ升高率差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。进一步比较单峰型血清cInⅠ浓度时间曲线的APACHEⅡ分值与双峰型的APACHEⅡ分值 ,显示差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。 结论 多发伤患者血清cInⅠ浓度 -时间曲线大致有三种特征 ,即单峰陡降型、单峰缓降型。

多发伤早期心肌损害的高危因素分析(英文)

目的研究多发伤早期心肌损害的主要危险因素。方法病例均来源于2000年8月至2003年12月收治入院的多发伤患者231例,以心肌损害为因变量,与其相关的20项因素为自变量进行Logistic回归分析,以确定心肌损害的危险因素。结果急性生理学与既往健康状况(APACHEⅡ)≥10、损害严重度评分(ISS)≥25、合并胸伤、胸部简明损伤定级(AIS)≥3、休克指数≥2、低氧血症时间≥0.5h是多发伤早期心肌损害的危险因素,胸部创伤因素与全身损伤危险因素共同存在时,心肌损害的发病危险性(OR)将明显增加。结论对具有高危因素的患者应警惕早期心肌损害的发生,多发伤患者胸部和全身损伤因素共同作用增加早期心肌损害的危险性。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶基因的筛选与初步鉴定

采用染色质免疫共沉淀技术在全基因组水平筛选雄激素非依赖性前列腺癌细胞LNCaP-AI的雄激素受体结合位点,行高通量测序及生物信息学分析共得到2 876个peak(pvalue<1×10–5),peak平均长度为673 bp;将peak序列定位到Hg19基因组,共有1 865个靶基因,其中fold enrichment≥10的基因有425个。对peak相关基因进行GO分析发现,与细胞、细胞组分、细胞过程、结合、细胞器相关的基因位列前五位;对peak相关基因进行通路分析发现,与黏着斑、代谢通路、癌症中的转录错误调控、嘌呤代谢等信号通路相关的基因占大多数。筛选出7个候选AR靶基因,采用Real-time qPCR技术分析它们在LNCaP-AI细胞和雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP中对DTH刺激的反应性,发现DHT刺激可改变7个候选AR靶基因在LNCaP-AI细胞中的表达,为进一步研究雄激素依赖性前列腺癌向非依赖性前列腺癌发展的过程中雄激素受体及其调控的下游靶基因功能起着至关重要的作用。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞中差异甲基化基因的初步筛选

应用全基因组DNA甲基化芯片(Illumina Infinium HumanMethylation27 BeadChip)杂交技术以及转录组RNA测序技术,检测了雄激素依赖性前列腺癌(androgen-dependent prostate cancer,ADPC)细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)细胞株LNCaP-AI(androgen independent)中的差异甲基化基因。发现与LNCaP细胞株相比,LNCaP-AI细胞株有990个CpG位点表现为高甲基化,涉及855个基因;2 305个CpG位点表现为低甲基化,涉及1 970个基因。结合转录组mRNA表达结果,筛选出6个超甲基化基因:FAM111B、RAB36、PCDH7、COL6A2、IGF1R、GULP1;8个低甲基化基因:EPHA3、TM4SF1、IGFBP5、FAM105A、RASD1、ITPR2、CYP27B1、UBE2E3。这些差异甲基化基因涉及钙离子信号通路、Wnt信号通路等多个信号通路,参与了细胞的基因表达、信号传导、细胞通讯、细胞运动、细胞黏附以及血管生成等功能,为探讨这些差异甲基化基因在前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中发挥的作用奠定了基础。