可降解甲壳素/壳聚糖支架联合GMSCs来源外泌体对大鼠坐骨神经损伤的修复作用研究

目的探究可降解甲壳素/壳聚糖支架联合牙龈间充质干细胞(GMSCs)来源外泌体对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法选择2020年1月至2021年12月金华市中心医院的4名健康志愿者,在拔除智齿的过程中收集1mg牙龈组织进行原代培养GMSCs,采用超速离心法提取GMSCs来源外泌体,透射电子显微镜(TEM)和Westernblot检测外泌体的囊泡直径和标志蛋白CD9和CD63的表达。24只SD大鼠建立坐骨神经损伤模型后,采用随机数字表法分为支架组、支架+外泌体组和自体移植组,每组8只。支架组在坐骨神经损伤部分加入单纯甲壳素/壳聚糖支架凝胶;支架+外泌体组在坐骨神经损伤部分加入可降解甲壳素/壳聚糖支架+外泌体凝胶复合物;自体移植组采用自体移植的坐骨神经组织治疗。采用坐骨神经功能指数(SFI)评估大鼠坐骨神经结扎术后1、4和8周的运动功能,采用TEM、甲苯胺蓝染色和大体标本组织分析轴突组织的恢复,评估坐骨神经支配的肌肉重量和肌纤维重塑。结果TEM检查显示外泌体呈圆形结构,囊泡直径峰值为102nm。Westernblot分析结果显示外泌体标记CD9和CD63呈阳性。支架+外泌体组术后4、8周的SFI均明显高于支架组(均P<0.05),而自体移植组SFI明显高于支架+外泌体组和支架组(均P<0.05)。支架+外泌体组有髓轴突密度、有髓轴突直径和髓鞘厚度均明显高于支架组(均P<0.05)。但是支架组和支架+外泌体组的有髓轴突密度、有髓轴突直径和髓鞘厚度均明显低于自体移植组(均P<0.05)。支架+外泌体组的腓肠肌湿重比和肌纤维横截面积均明显大于支架组(均P<0.05),自体移植组的腓肠肌湿重比和肌纤维横截面积均明显大于支架组和支架+外泌体组(均P<0.05)。结论可降解甲壳素/壳聚糖支架联合GMSCs来源外泌体可以对鼠坐骨神经的损伤有一定修复作用。

小干扰RNA修饰BMSCs分泌的外泌体对CCI动物模型修复的促进作用研究

目的探讨Piezo2沉默质粒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)来源外泌体修复慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)动物模型的相关作用。方法以成熟的大鼠为实验对象,提取大鼠的骨髓组织培养原代BMSC,超速离心法提取Piezo2基因siRNA沉默质粒转染的BMSC来源外泌体,用手术方案构建CCI动物模型,根据实验目的将入组的SD大鼠分成模型组、BMSC组和外泌体组,利用荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光染色法检测Piezo2、NeuN、IbA1和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的mRNA相对表达量。结果原代BMSC的CD29、CD90和CD105蛋白呈阳性,而CD45、CD34和CD11b呈阴性。而外泌体组动物(dorsal root ganglion,DRG)组织中脊髓背角小胶质细胞的激活明显弱于模型组和BMSC组。外泌体组Piezo2的mRNA相对表达量明显低于BMSC组和模型组(P<0.05),外泌体组NeuN、IbA1和GFAP的mRNA相对表达量明显高于BMSC组(P<0.05)。结论Piezo2沉默质粒转染BMSC来源外泌体可以促进CCI的修复,值得进一步推广。