HTK液冷保存大鼠后肾原基同种和异种移植研究

目的比较Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate (HTK)与Uinversity of Wisconsin Solution (UW)液冷保存大鼠后肾原基同系和异种裸小鼠移植的效果,探索器官保存液评价新模型.方法从受孕第16天(E16)近交系Lewis(RTl1)大鼠提取后肾原基,以0~4℃HTK或UW液保存24、48、72、96 h,植入Lewis鼠(Lewis→ Lewis)和BALB/c裸小鼠(Lewis→BALB/c)网膜.体外比较原基乳酸脱氢酶(LDH)释放率(%)和三磷酸腺苷(ATP)存量(%);在体观察发育后肾结构,比较后肾移植成活率和移植后肾菊粉清除率.实验所得数据以均值±标准差(Mean±SD)表示,率的比较采用x2检验,两独立样本比较采用t检验,其他参数作方差分析.结果 HTK冷保存24、48、72、96 h,原基LDH释放率分别为(6.5±1.1)%、(8.6±0.9)%、(11.3±1.3)%、(12.5±0.8)%,逐渐升高,各时段均较UW液组为低,差异无统计学意义(F=0.752,P> 0.05);ATP存量为(71.8±4.6)%、(53.7±4.8)%、(35.8±3.4)%、(11.1±1.7)%,逐渐降低,尤以96 h明显,在72 h较UW液组低(t=-2.725,P<0.05),其余时段相当(F =0.812,P>0.05).经HTK液保存3d,E16后肾原基体积和结构无明显变化,在同种(Lewis→Lewis)或异种(Lewis→BALB/c)网膜中都发育良好,病理和电镜检查正常;HTK液保存24、48、72、96 h的受体Lewis鼠和裸小鼠后肾移植成活率分别为100.0%、100.0%、73.3%、0%(2=1.553,P >0.05)和100.0%、100.0%、80.0%、0%(x2=0.653,P>0.05);保存72 h Lewis鼠移植后肾菊粉清除率(32.10 ±5.09)μl/(min·g),与UW液差异无统计学意义(t=-0.264,P>0.05).结论大鼠E16后肾原基以HTK液保存3d,可以在同种和异种受体网膜内生长发育,形成器官并发挥功能.后肾原基同系或异种裸小鼠移植可能是评价器官保存液的有效模型.

大鼠胸腺联合后肾原基环磷酰胺预处理移植研究

目的将大鼠胚胎胸腺联合后肾原基同种和异种移植至环磷酰胺(CP)预处理去胸腺受体鼠,探讨能否诱导供体特异性免疫耐受.方法从受孕第16天(E16)的Lewis大鼠胚胎中提取成对胸腺和后肾原基,分别植入以CP预处理(BN鼠80 mg/kg、C57BL/6鼠200 mg/kg,腹腔注射,q6d×4)的去胸腺实验(Ⅰ)组或对照(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)组受体腹腔,术后CP用量减半并联合环孢素[CsA,BN鼠8 mg/(kg·d)、C57BL/6鼠CsA12 mg/(kg·d)]皮下注射,每日一次×12 d,给药至第13天停药.移植后行胸腺、后肾移植物的形态学及功能检查,检测受体鼠血清白细胞介素(IL)-2和干扰素-γ(IFN-γ)含量、单向混合淋巴细胞反应(MLR)及皮肤移植试验.率的比较采用x2检验,两独立样本比较采用t检验,其他参数作方差分析.结果异种移植后14 d,C57BL/6鼠未见Lewis鼠胸腺和后肾原基生长.同种移植后21 d,部分实验(Ⅰ)组BN鼠胸腺及后肾发育尚好,显示一定的泌尿功能.实验(Ⅰ)组BN鼠Banff排斥反应分级最轻(x2=6.316,P<0.05),血清IL-2和IFN-γ含量分别为(388.92±55.98)ng/L(F=9.794,P<0.01)和(51.37±7.43)ng/L(F=4.120,P<0.05),与对照(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)组差异有统计学意义.对供体Lewis和无关Wistar鼠移植皮片平均存活时间分别为(8.7±0.8)d和(5.8±1.2)d,两者差异有统计学意义(t=4.867,P<0.01);与对照(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)组差异有统计学意义(F=17.421,P<0.01);对MLR脾细胞刺激指数(SI)分别为1.7±0.2和3.7±0.4,两者差异有统计学意义(t=-11.688,P<0.01);与对照(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)组差异有统计学意义(F=12.787,P<0.01);各(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)组对第三品系Wistar鼠皮片存活时间(F=0.756,P>0.05)和SI差异无统计学意义(F=0.920,P>0.05).移植后5~7周,移植后肾和胸腺排斥反应加重,逐渐形成结缔组织瘢痕.结论使用CP预处理方案,Lewis鼠E16胸腺和后肾原基,在异种C57BL/6鼠腹腔内未能生长发育;在同种BN鼠腹腔内可继续发育,形成器官,尽管未诱导出免疫耐受,但可产生供体特异性免疫低反应.