转染CXCR4的MSCs对放射性肺损伤组织中细胞因子的影响

目的观察慢病毒转染CXCR4的间充质干细胞(MSCs)对放射性肺损伤小鼠肺组织内细胞因子的影响。方法将C57小鼠分为正常组、照射组、对照组和治疗组,除正常组外,其他各组均经直线加速器进行X射线(13 Gy,3.68 Gy/min)一次性全肺照射。之后对照组经尾静脉注射仅经慢病毒转染EGFP的MSCs,治疗组经尾静脉注射经慢病毒转染CXCR4和EGFP的MSCs。在X线照射后7 d,分别留取各组的肺组织标本,荧光显微镜下观察肺内EGFP标记的MSCs分布情况,并行病理组织学HE染色,ELISA法检测各组肺组织内羟脯胺酸(HYP)、丙二醛(MDA)、10 kDa干扰素γ诱导蛋白(IP-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源生长因子(PDGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶(MMPs)-2表达水平。结果治疗组肺组织内EGFP标记的MSCs分布多于对照组。与照射组比较,对照组和治疗组肺组织损伤减轻,两组的肺组织中HYP、MDA、IP-10、TGF-β1、PDGF、TNF-α和MMP-2表达水平明显下降(P <0.01)。相对于对照组,除TNF-α外,治疗组上述指标水平下降的更明显(P <0.01)。结论转染CXCR4的MSCs在放射性肺损伤小鼠肺组织内数量增加,并具有更好地减轻放射性肺损伤效果,可有效抑制放射损伤引起的肺组织IP-10、TGF-β1、PDGF、TNF-α和MMP-2细胞因子的升高。

过表达CXCR4基因对人脐带间充质干细胞迁移作用的影响

【目的】通过transwell趋化实验,观察经慢病毒转染后过表达CXCR4的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)是否具有更好的迁移作用。【方法】通过组织贴壁法,分离和培养来源于人脐带华通胶组织中的MSCs。经慢病毒转染,将CXCR4目的基因转染至第3代HUMSCs,并进行免疫荧光、western blotting检测在HUMSCs中表达CXCR4基因的情况。通过transwell小室进行HUMSCs的趋化迁移试验检测,观察转染CXCR4基因后的HUMSCs迁移能力是否增强。【结果】自脐带分离培养的HUMSCs通过慢病毒转染后,可过表达CXCR4基因。Transwell试验发现,过表达CXCR4的HUMSCs较正常HUMSCs和未转染目的基因的HUMSCs,迁移的细胞数明显增加(P<0.05)。【结论】通过慢病毒转染过表达CXCR4的HUMSCs,其趋化、迁移能力明显增强。

间充质干细胞对放射性肺损伤小鼠肺组织中Wnt／β-catenin通路的影响

目的应用人脐带来源的间充质干细胞（MSCs）通过尾静脉输注到放射性肺损伤小鼠体内，观察MSCs对肺组织中Wnt基因／p连环蛋白（Wnt／β-catenin）信号通路的影响。方法将C57小鼠分为正常组、照射组和治疗组。照射组和治疗组小鼠均经直线加速器进行X射线（13Gy，3．68Gy／min）一次性全肺照射，之后治疗组通过尾静脉注射MSCs（5×10^5／只），正常组和照射组给予尾静脉注射生理盐水。在放射线照射后7d、30d、60d分别获取各组小鼠的肺组织标本，提取蛋白及tuRNA，并进行HE染色病理组织学检测，蛋白印迹法检测肺组织内Wnt／β-catenion信号通路中的pcatenin、磷酸化糖原合成酶激酶3p（p-GSK-3β）、糖原合成酶激酶3p（GSK-3β）和进展期T细胞淋巴瘤常见重排蛋白1（FRATl）蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应检测Wnt诱导的分泌型蛋白1（WISP-1）的tuRNA表达。结果与照射组相比，输注MSCs的治疗组小鼠放射性肺损伤程度明显减轻；照射组β-catenin、p-GSK-3β／GSK-3β、FRAT1蛋白和WISP-1的mRNA表达在各个时间点均明显高于正常组，差异有统计学意义（P〈0．01）；治疗组β-catenin蛋白表达在各个时间点较照射组下降，其中30d和60d下降明显，差异有统计学意义（P〈0．01），p-GSK-3β／GSK-3β蛋白表达在7d、30d和60d较照射组均明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01），FRATl蛋白表达在各个时间点均较照射组下降，其中7d和30d下降明显，差异有统计学意义（P〈0．01），WISP-1的mRNA表达在7d、30d和60d均较照射组明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论MSCs可抑制放射线照射后小鼠肺组织内Wnt／β-catenin信号通路的活化。