HO-1参与葛根素对抗高糖诱导的大鼠血管舒张功能下降

目的:研究葛根素对抗急性高糖刺激引起的血管舒张功能的下降,并分析血红素加氧酶(HO-1)在其中的作用。方法:采用血管环灌流装置,观察大鼠胸主动脉环的舒张效应。结果:①与空白对照组(含11mmol/L葡萄糖)相比,经44mmol/L葡萄糖(高糖)孵育血管2h后,主动脉环对ACh引起的内皮依赖性血管舒张反应下降。②葛根素(10-10-10-8mol/L)与高糖联合孵育,可剂量依赖性地改善高糖诱导的血管ACh舒张反应的下降。③葛根素孵育血管后可引起血管HO-1活性增高;用ZnPPIX抑制HO-1的活性后,葛根素抗高糖损伤的作用被取消。结论:葛根素可以对抗高糖引起的血管舒张功能的下降,其机制可能是通过诱导HO-1而实现的。

二氮嗪对冷保存诱导的大鼠供心Smac/DIABLO蛋白表达的抑制作用

目的:探讨线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DE)对离体大鼠供心不同时程冷保存时促凋亡蛋白Smac/DIABLO表达的影响及机制。方法:SD大鼠随机分为3组,包括空白对照组、单纯冷保存组、DE组(Celsior保存液中含30μmol/L DE),后2组又按冷保存时程不同,分别分为3、6、9、12 h组。实验结束后采用原位末端标记染色法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,采用Western blotting法检测心肌组织中caspase-3蛋白及胞浆Smac/DIABLO蛋白表达。结果:(1)在Celsior保存液中加入DE后,心肌细胞凋亡指数及caspase-3蛋白表达显著低于相应单纯冷保存组。(2)DE可使Smac/DIABLO蛋白表达高峰由冷保存6 h延迟至9 h。(3)DE的上述作用可被mitoKATP通道特异性阻断剂5-羟基葵酸盐(5-HD)所取消。结论:DE具有对抗冷保存诱导心肌细胞凋亡的作用,这种保护作用可能与其激活mitoKATP通道和减少促凋亡蛋白Smac/DIABLO表达有关。

高糖通过环加氧酶2依赖性途径诱导GRP78表达改变

目的:观察高糖慢性处理对血管内皮细胞内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响及其作用机制。方法:培养的HUVECs细胞用含正常糖(5.5mmol/L)或高糖(30mmol/L)的培养基处理不同时间后,用MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blotting法测定蛋白表达情况。结果:与相应对照组相比,HUVECs细胞经高糖孵育24-48h后,GRP78蛋白表达量先增加后减少;而环加氧酶-2(COX-2)蛋白表达量逐渐增加。COX-2选择性抑制剂尼美舒利与高糖共孵育后,可明显抑制高糖引起的GRP78蛋白表达改变;同时尼美舒利可抑制高糖孵育48h后诱导的细胞凋亡。结论:高糖慢性处理可诱导HUVECs细胞GRP78表达先增加后减少,此过程依赖于COX-2蛋白的上调。

低温保存诱导大鼠心肌细胞Smac／DIABLO蛋白表达的动态变化

目的:观察大鼠供心不同时程低温保存后线粒体Smac/DIABLO蛋白表达的差异。方法:根据不同的低温保存时程,SD大鼠随机分5组(n=8)。采用Langendorff离体鼠心灌注法停搏大鼠心脏,检测心脏在4℃条件下Cel-sior保存液中分别保存0、3、6、9、12h后,心肌细胞线粒体内超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化。并采用Westorn blotting蛋白印迹分析法观察心肌细胞Smac/DIABLO蛋白表达情况,原位末端标记(TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡。结果:①随着低温保存时间的延长,心肌细胞线粒体内SOD活性随之降低,MDA含量随之升高,心肌细胞凋亡指数也逐渐增高。②随着低温保存时间的延长,Smac/DIABLO蛋白表达逐渐增多,至低温保存6h后最为显著,随后又逐渐减弱。结论:随着低温保存时间的延长,可能由于心肌细胞抗氧自由基的能力逐步减弱,致使诱导细胞凋亡的心肌线粒体Smac/DIABLO蛋白表达逐渐增强,心肌细胞凋亡逐渐增多。

测定离体大鼠心脏细胞存活力MTT方法的建立

目的:探索应用MTT法测定离体大鼠心室肌不同部位细胞活性的差异。方法:采用SD大鼠心肌不同时程缺血/再灌注模型,以MTT法分别检测心室肌不同部位的细胞活性。结果:与缺血对照组相比,随着缺血时间的延长,各组心肌细胞活性均有所下降。分别缺血15 min和60 min后,离体大鼠心室肌不同部位细胞活性无显著性差异;分别缺血30 min和45 min后离体大鼠心室肌不同部位细胞活性由大到小为:右心室>室间隔=左心室。结论:通过MTT法检测的心室肌细胞活性可得出,拟采用15-60 min缺血/再灌注模型,缺血在15 min至60min之内,则心室肌以右心室心肌细胞受损较轻,而左心室与室间隔心肌细胞受损较重。

姜黄素通过HO/GC途径对抗高糖诱导的血管收缩功能下降

目的:研究姜黄素是否可对抗高糖诱导的血管收缩功能下降,并探讨其作用机制。方法:采用血管环离体灌流装置,观察SD大鼠胸主动脉环的收缩反应;测定主动脉胆红素生成量反映血红素加氧酶-1(HO-1)的活性。结果:(1)与空白对照组(含11mmol/L葡萄糖)相比,经44mmol/L葡萄糖(高糖)孵育血管4h后,主动脉环对苯肾上腺素(PE)引起的血管收缩反应下降;(2)姜黄素(3×10-11-3×10-10mol/L)与高糖联合孵育,均能不同程度地抑制高糖诱导的血管PE收缩反应的下降;(3)姜黄素孵育后可引起血管HO活性增高;HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPP)可完全取消姜黄素的抗高糖损伤作用;(4)鸟苷酸环化酶(GC)抑制剂亚甲蓝可部分阻断姜黄素的保护作用。结论:姜黄素可能通过诱导HO-1活性增加和激活GC途径对抗高糖引起的血管收缩功能降低。

基于压力相平面推导的τ和K在评价离体缺血/再灌注大鼠心脏左心室舒张功能中的作用

目的:应用分析和比较基于压力相平面(PPP)推导的心室等容舒张期时间常数)(和室腔僵硬度常数(K)在离体大鼠心脏缺血/再灌注过程中的变化,探讨其在评价左心室舒张功能异常中的价值。方法:采用SD大鼠心肌不同时程缺血/再灌注模型,分别计算出LVEDP、-(dp/dt)max、和K。同时,检测冠脉流出液中的乳酸脱氢酶(LDH),并进行心肌电镜观察。结果:在再灌注过程中,在各缺血组均明显高于空白对照组(P<0.05),K在各缺血组均明显低于空白对照组(P<0.05);而且,随着缺血时间延长,更高,K更低(P<0.05)。除了缺血15min组,其余各组LDH含量在再灌注10min和20min时均高于空白对照组(P<0.05);缺血45min组和缺血60min组LDH含量在再灌注10min和20min时均高于缺血30min组(P<0.05)。随着缺血时间延长,心肌超微结构发生异常改变。结论:基于PPP推导的和K可以作为定量评价离体大鼠心脏缺血/再灌注过程中的左心室舒张功能的指标,还可以反映缺血/再灌注损伤的严重程度。

左心室舒张功能评价方法的研究

目前国内缺乏能够全面而简单地评价左心室舒张功能的方法。为了解决这个问题,我们根据一定的数学模型,建立了算法,从而提出一种新方法,通过采用MATLAB语言编写的程序来实现。这种方法主要是根据左心室内压P的变化,得到P-dP/dT环,并计算出左心室舒张末压(LVEDP)、最大左心室舒张速率(-(dP/dt)max)、等容舒张期时间常数(τ)和室腔僵硬度常数(Kd)这四个重要指标。从离体心脏缺血/再灌注实验得到的结果证明了这种方法的可行性和有效性。因此这种使用τ和Kd指标的方法对评价左心室舒张功能是敏感而有效的,可以应用于左心室舒张功能异常的早期检测。