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肠道粘膜免疫研究进展 被引量:31
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作者 吴翰桂 朱诚 丁仁瑞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期235-238,共4页
肠道粘膜免疫是机体防御感染的第一防线 ,而肠道炎症与口服耐受机制的研究更具有理论与临床的实际意义。对此领域的研究已成为免疫学中的一个热点。据此 ,本文对小肠上皮内淋巴细胞的来源和功能 ,肠道慢性炎症的发生 。
关键词 小肠IEL 肠道粘膜免疫 口服耐受机制
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表达载体pRSET C重组rhTNF-β的表达及其纯化 被引量:2
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作者 邱莲女 马志章 +3 位作者 周晴 李芳芳 陈常庆 丁仁瑞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期167-169,共3页
将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在... 将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在。菌体裂解上清经0.45μm滤膜过滤后,用固定化金属配体亲和柱层析,纯度可达95%左右;经肠激酶酶切后,具有TNFβ的细胞毒活性,此活性为9.8×109U/g。 展开更多
关键词 表达载体 pRSET C rhTNF-β 表达 纯化
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人TNFβ缺失体融合表达及其产物一步纯化法研究 被引量:2
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作者 徐建芬 周晴 +3 位作者 马志章 余建法 华明 丁仁瑞 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第1期1-5,共5页
本文将hTNFβN端缺失 2 3aa的缺失体基因克隆于 pET 2 8 C(+ ) 表达载体 ,构建成T7lac启动子控制下His6 TNFβ融合表达质粒 ,转化到E coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,His6 TNFβ表达量约占总菌体蛋白的 2 5 % ,Mr2 0 5 0 0。表达产... 本文将hTNFβN端缺失 2 3aa的缺失体基因克隆于 pET 2 8 C(+ ) 表达载体 ,构建成T7lac启动子控制下His6 TNFβ融合表达质粒 ,转化到E coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,His6 TNFβ表达量约占总菌体蛋白的 2 5 % ,Mr2 0 5 0 0。表达产物大部分以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤 ,70mol/L脲变性溶解 ,用Ni2 + 亲和层析一步快速纯化 ,所得His6 TNFβ的纯度达 90 %以上 ,回收率在 90 %左右。纯化产物稀释复性后 ,其细胞毒活性为 (0 5~ 1 0 )× 10 6U/mg蛋白左右。这些研究结果将为制备重组人TNFβ缺失体以及进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 肿瘤环死因子 一步 经法 缺失体 TNFΒ
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IFNγ-LTα与LTα诱导L929细胞凋亡信号转导的初步研究 被引量:1
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作者 梁赤周 丁鸣 +2 位作者 余建法 杨帆 马志章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期435-438,共4页
目的 研究融合蛋白IFNγ LTα诱导L92 9细胞凋亡的信号转导机制 ,并与LTα相比较。方法 用结晶紫染色法观察细胞毒效应 ;用检测试剂盒检测caspase 8和 3活性的变化 ;观察 3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ LTα和LTα诱导的细胞毒效应... 目的 研究融合蛋白IFNγ LTα诱导L92 9细胞凋亡的信号转导机制 ,并与LTα相比较。方法 用结晶紫染色法观察细胞毒效应 ;用检测试剂盒检测caspase 8和 3活性的变化 ;观察 3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ LTα和LTα诱导的细胞毒效应的影响。结果 IFNγ LTα能诱导L92 9细胞凋亡及胞内caspase 8和 3的活性变化 ,但两种caspase产生的时间和幅度有所不同。PKC的抑制剂可促进IFNγ LTα和LTα对L92 9细胞的杀伤 ;而PLA2及Ca2 +通道的抑制剂对杀伤则有明显的阻断作用 ,但对LTα的阻断强于对IFNγ LTα的阻断。结论 IFNγ LTα融合蛋白的抗肿瘤活性强于LTα ,其信号转导特征有别于LTα。信号分子caspase与PKC、PLA2、Ca2 展开更多
关键词 IFNγ-LTα LTα L929细胞 细胞凋亡 信号转导 信号转导分子抑制剂 结晶紫染色法
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人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达 被引量:1
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作者 周晴 张惟杰 +2 位作者 马志章 应红宇 丁仁瑞 《浙江大学学报(自然科学版)》 CSCD 1999年第3期271-276,共6页
利用体外重组技术,将人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白(hIFNγ135-X13-hTNFβ148,hγTNFβ)的基因5′端hIFNγ135-X13编码序列取出,添上终止密码子,克隆到pBV220表达载体PRPL串... 利用体外重组技术,将人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白(hIFNγ135-X13-hTNFβ148,hγTNFβ)的基因5′端hIFNγ135-X13编码序列取出,添上终止密码子,克隆到pBV220表达载体PRPL串联起动子的下游,构建成人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)表达质粒.在质粒构建过程中,原载体上紧接SD序列后的EcoR1位点被新引入的Xba1位点所取代,重组后的质粒,SD序列与ATG起始密码子之间的核苷酸数达到10个.经转化E.coliDH5α,温敏诱导表达,细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体(18kD),表达量约占菌体总蛋白的42%,表达产物主要以包涵体形式存在.经初步纯化复性后,表达产物的干扰素(IFN)抗病毒比活性达到1.18×106U/mg蛋白. 展开更多
关键词 融合蛋白 γ干扰素突变体 β肿瘤坏死因子
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人His6-TNF-β融合表达质粒的构建及其产物一步纯化法研究
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作者 徐建芬 周晴 +4 位作者 马志章 华明 丁仁瑞 余建法 沈丙辉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第4期314-314,共1页
人β-肿瘤坏死因子(tumor mecrosis factor beta,TNF-β)又称淋巴毒素(lymphotoxin,LT)、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.... 人β-肿瘤坏死因子(tumor mecrosis factor beta,TNF-β)又称淋巴毒素(lymphotoxin,LT)、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.成熟的人TNF-β由171个aa组成,其N端为非功能区,研究发现若N端缺失25个aa,仍可保持其细胞毒活性;若缺失24个aa,则该缺失体的细胞毒作用可提高2~6倍,而对小鼠致死率却降低5倍.TNF-βC端结构的完整性对保持细胞毒活性是必需的,因此可通过构建N端的不同缺失体来重组高抗癌效应和低毒副作用的生物制剂.本文选用融台表达载体来组建人N端缺失体的表达质粒,并且借T(?)-lac启动子、His6-tag等元件,以期获得高效表达和利用Ni<sup>2+</sup>螯合树脂柱来亲和纯化,为进一步研究TNF-β缺失体的生物学活性和TNF-β的开发利用打下基础. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 His6-TNF-β 质粒 纯化
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