浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

目的 :研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的作用及机理。方法 :采用MTT法测定IC50 值及生长曲线 ,流式细胞仪 (FCM )AnnexinⅤFITC/PI法检测细胞凋亡发生率 ,PI染色法检测细胞周期 ,同时用流式细胞汁FCM及Western blot检测Bcl 2蛋白表达。结果 :浙江蝮蛇毒能抑制Jurkat细胞生长 ,且呈剂量依赖关系 ,并能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡 ,4 8h时作用最强 ,此时Bcl 2蛋白表达下降 ,随后此作用减弱 ,低浓度作用下细胞逐渐恢复生长。结论 :浙江蝮蛇毒能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡 ,且呈剂量依赖关系 ,此作用与Bcl

斑马鱼移植瘤模型在抗肿瘤药物研发和临床治疗研究中的应用

人类肿瘤的动物异种移植模型是肿瘤研究的关键临床前工具.目前最常用的动物移植瘤模型是免疫缺陷小鼠模型.近十年来,由于斑马鱼(Danio rerio)与人类基因组同源性高达70%,个体小,可大规模快速繁殖,胚体透明易于观察,发育前一个月无适应性免疫,以及成本低等原因[1-2],这种动物模型逐渐发展成为另一种相对快速且具有较高成本效益的人类肿瘤体内研究模型.本综述中,我们讨论了使用斑马鱼模型的优势及其局限性,并与小鼠模型进行了对比;整理了目前斑马鱼移植瘤模型的构建及不同的类型;总结了该模型在抗肿瘤药物研发和临床治疗研究中的应用及其在精准医学中的应用前景.

小檗胺对多药耐药K562/Adr细胞作用的研究

目的研究小檗胺诱导人白血病K5 6 2 /Adr细胞凋亡及逆转多药耐药的作用及机理。方法采用MTT法测IC50 值 ,流式细胞仪AnnexinVFITC PI法检测细胞凋亡发生率 ,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期 ,同时以FCM检测Caspase 3、P GP蛋白表达及细胞内药物积聚能力 ,RT PCR法检测mdr 1基因表达。结果小檗胺能抑制人白血病K5 6 2 /Adr细胞生长且呈剂量依赖关系 ,并能诱导细胞凋亡 ,使Caspase 3蛋白表达及细胞药物外排能力增加 ,同时降低mdr 1基因mRNA和蛋白表达水平。结论小檗胺能激活Cas pase 3以诱导人白血病K5 6 2 /Adr细胞凋亡 ,同时能通过降低mdr

慢性粒细胞性白血病患者骨髓源bcr/abl融合基因阳性Flk1^+CD31^-CD34^-干细胞体外抗STI571机制的初步研究

为进一步了解STI571对慢性粒细胞性白血病(CML)患者体内bcr/abl融合基因阳性的原始及定向白血病干/祖细胞分化及增殖的影响,更深入阐明部分CML患者在经历一段血液学甚至是细胞遗传学水平上的完全缓解后复发及对STI571的耐药机制,利用从CML患者骨髓分离到的具有血管母细胞特性、bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1+CD31-CD34-细胞,体外检测了STI571对其在造血集落培养基中的分化及处于分化阶段时的增殖抑制作用。结果显示:浓度为5μmol/LSTI571,维持作用96小时(病人体内维持96小时的STI571浓度只可能达到1-2μmol/L),即可有效抑制定向造血祖细胞的增殖。没有充分的证据显示,相对原始的bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1+CD31-CD34-细胞的分化及增殖受到明显的抑制作用。结论:CML患者体内的原始白血病干/祖细胞对STI571具有一定的抗性,临床上所观察到的CML患者在运用STI571一段时间后出现正常的造血恢复现象,可能仅仅是因为STI571杀死或抑制了定向恶性白血病祖细胞的增殖,但随着时间的推移,在经历了短暂的血液学甚至是细胞遗传学水平上的缓解后,对STI571耐药的原始白血病干/祖细胞终究会再次导致CML的复发。

SELDI-TOF-MS技术检测心绞痛患者血浆蛋白指纹图谱的研究

目的:采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测心绞痛患者血浆蛋白质指纹图谱,从中筛选出特异的分子标志物。方法:应用SELDI-TOF-MS技术及金属离子螯合(IMAC-3)蛋白质芯片对20例心绞痛患者和29例正常对照者血浆样本进行检测,借助生物信息学工具(非线性的支持向量机,SVM)提出心绞痛的诊断模型,并运用留一交叉验证法来评估该模型的判别效能。结果:用SELDI-TOF-MS技术筛选出由3个有显著差异的蛋白质峰[质荷比(m/z)分别为2667.3、5914.0和6890.5]组合构建的诊断模型,可将20例心绞痛患者和29例正常人全部正确分组,诊断特异性和灵敏度均为100%。结论:SELDI-TOF-MS技术在心绞痛的诊断中具有较高灵敏度和特异性,发现的蛋白质峰可能在心绞痛的发病中起一定作用,血浆中分子标志物的发现有助于心绞痛的早期诊断。

RNAi相关技术及其在肿瘤基因治疗中的应用

RNA干扰 (RNAi)是由双链RNA(dsRNA)介导的、序列特异地引起转录后基因沉默的现象 ,是生物体内抵御转座子和病毒感染的重要保护机制之一。RNAi相关技术可作为一种简单有效的代替基因敲除的工具应用于功能基因组学和疾病的基因治疗研究。现综述RNAi机制、研究现状及RNAi相关技术在肿瘤基因治疗研究中的应用进展。

针对PLK1基因mRNA的SiRNA治疗结肠癌的细胞学研究

目的研究小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)处理结肠癌细胞株SW480,对该细胞存活生长的影响。方法化学合成了对应于PLK1(Polo-like kinase 1)基因表达mRNA碱基序列不同位点的3种特异SiRNA,分别用脂质体将其以及等比例混合物转染SW480细胞,MTT法检测不同的SiRNA对细胞存活的影响,并应用细胞染色和DNA电泳分析细胞凋亡。结果发现3种SiRNA及其混合物对SW480细胞的存活具有相应的抑制作用,随着浓度的增加SW480细胞存活百分率下降,而且混合物均比单一使用效果好,三种混合物在25nM处抑制了近20%的SW480细胞存活,同时观察到细胞形态和核酸变化的凋亡现象。结论化学合成的SiRNA降低了SW480细胞的存活,诱导了细胞凋亡,而且联合应用效果更好,提示新的抗肿瘤措施。

2型糖尿病合并冠心病患者载脂蛋白E基因多态性研究

目的 :研究载脂蛋白 E(Apo E)基因多态性与 2型糖尿病患者合并冠心病的关系。方法 :用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR- RFL P) ,研究了 12 5例 2型糖尿病 (DM)患者和 71例健康体检者 Apo E基因型 ,分析了 Apo E基因多态性与 2型糖尿病及其合并冠心病的关系。结果 :(1)糖尿病组 (DM)、糖尿病合并冠心病组 (DC)及对照组等位基因频率分别为 5 .5 %、89.7%、4.8% ,4.1%、85 .3%、10 .6 %和 5 .6 %、86 .6 %、7.8%。相互间 P均 >0 .0 5 ,说明 Apo E基因型与中国人的 2型糖尿病及合并冠心病的发生发展无相关性。 (2 )通过对不同 Apo E基因型的血胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白 (HDL )及低密度脂蛋白 (L DL )水平比较 ,发现携ε4等位基因的个体血 TC高于携其他 ApoE等位基因的个体 ,而携ε2等位基因的个体血 TG的水平高于携ε3、ε4等位基因的个体 (P<0 .0 5 )。 (3)Apo E基因多态性与高血压 (HT)无显著相关性。 (4 )携ε2、ε3、ε4等位基因的个体之间冠心病的发生率差异无显著性。结论 :Apo E等位基因多态性不是

基于多组学的肿瘤新抗原鉴定

近年来癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium,ICGC)等大规模肿瘤基因组计划的实施,以及伴随的基因组、转录组、蛋白质组和生物信息学等组学技术的快速发展,极大推动了肿瘤突变谱鉴定及其产生的肿瘤新抗原(neoantigen)的研究。本文就肿瘤新抗原的鉴定以及基于肿瘤新抗原的免疫治疗技术包括肿瘤治疗性疫苗和细胞治疗等技术的研发作一综述。

含LTR序列的psiTPTE22基因mRNA在肿瘤中的表达

目的:通过检测psiTPTE22基因编码的AK097082及BC031001的mRNA表达情况,确定其是否是基因芯片检测到的在结肠癌组织中高表达的基因,同时探讨该基因在癌症发生发展中的可能作用。方法:应用RT-PCR以及实时荧光定量-PCR法检测psiTPTE22编码的AK097082及BC031001的mRNA在肾、肝、胃、肺、结肠的癌组织和相应癌旁正常组织以及9个肿瘤细胞系和胎盘组织中的表达情况。结果:RT-PCR显示只有psiTPTE22编码的BC031001 mRNA在结肠组织中表达,但实时荧光定量PCR检测及F检验发现其在结肠癌与相应正常组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05),因此psiTPTE22并不是基因芯片检测到的在结肠癌中特异高表达的基因。实时荧光定量-PCR还发现BC031001 mRNA在肾、肝、胃和肺的正常组织中高表达,而在相应的癌组织中表达较低;该mRNA在多个肿瘤细胞系中不表达或表达量很低;在胎盘组织中表达较高。对各组癌组织与相应癌旁正常组织的表达量进行F检验发现,肾、肝、胃、肺的癌旁正常组织和相应癌组织中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:psiTPTE22基因编码的BC031001 mRNA表达水平与多种癌症呈负相关性,但其原因及其在肿瘤发生发展过程中的作用还有待进一步研究。

人内源性逆转录病毒研究概况

人类内源性逆转录病毒（HERV）是几百万年前整合到人类基因组中的逆转录病毒的残余物，约占了整个基因组的8％。大部分HERV元件在进化过程中由于突变、缺失等的积累,已没有编码能力。但仍有少数由于正性选择的压力，完整的开放阅读框被保留了下来。它们在一些特定的组织或分化发育的特定阶段表面，可能具有重要的生理意义。而在某些疾病情况下的高表达水平提示其可能与疾病的发生发展相关。由于最初插入位点的关系或后来的转座作用，HERV元件相互之间以及对基因组中的其他基因都可能有影响。对HERV目前还了解甚少，该文将对HERV的生物学功能以及对HERV-K、-W、-H3个家族的研究概况作一简要综述。

黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的 研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理。方法 MTT法测细胞毒活性 ,Hoechst 332 5 8荧光染色法观察凋亡小体形成 ,流式细胞仪AnnexinVFITC PI法检测细胞凋亡发生率 ,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期 ,同时流式细胞仪检测细胞Bcl 2 ,Fas和Caspase 3蛋白表达情况。结果 黄芩苷元能选择性抑制人白血病K5 6 2细胞生长且呈浓度依赖关系 ,并能诱导细胞凋亡 ,细胞增殖被阻滞于S期 ;同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高 ,而Bcl 2蛋白表达不变。结论 黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达 ,诱导人白血病K5 6 2细胞凋亡且呈时效量效关系 ,此作用与Fas蛋白表达上调有关 ,与Bcl

不同来源CIK细胞的体外扩增和杀伤活性的比较

目的:比较两种不同来源的CK细胞的体外扩增速度、杀伤活性和机制. 方法:脐血和正常人外周血各16例,经单个核细胞,以抗CD3mAb、重组人白细胞介素2和干扰素γ为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较二者的细胞动力学效应,MTT法比较二者对胃癌细胞株BGC823的杀伤活性,透射电镜下观察肿瘤细胞的变化.结果:脐血CIK细胞的扩增速度、杀伤活性均显著优于外周血CIK细胞,CMNCCIKvsMNCCIK,P<0. 05;脐血CIK细胞以诱导肿瘤细胞坏死为主,外周血CIK细胞以诱导肿瘤细胞凋亡为主,二者的差异有统计学意义. 结论:脐血CIK细胞体外扩增快,杀伤活性强,对肿瘤细胞的作用优于外周血CIK细胞,不同来源的CIK细胞杀伤肿瘤细胞的机制不同.

脑膜瘤和脑良性肿瘤及脑外伤患者脑脊液蛋白质谱差异表达模型的研究

目的 用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱 (SELDI TOF MS)和生物信息学分析技术寻找脑脊液中能鉴别脑膜瘤和其他脑良性肿瘤及脑外伤诊断的新标志物。方法 收集 14例脑膜瘤、9例其他脑良性肿瘤和 2 7例轻度脑外伤患者的脑脊液标本 ,用H4蛋白芯片和SELDI TOF MS检测蛋白质谱的表达。用BiomarkerPatternsTMSoftware分析软件进行数据处理 ,建立区分脑膜瘤和脑外伤患者脑脊液中蛋白质谱差异表达模型和区分脑膜瘤和其他脑良性肿瘤脑脊液中蛋白质谱差异表达模型 ;并用 2个模型对各 2例脑膜瘤、其他脑良性肿瘤和脑外伤患者进行盲法交叉验证。结果 用 5个质荷比峰建立的区分脑膜瘤和脑外伤脑脊液蛋白质谱差异表达模型的准确率为 98%(4 9/ 5 0 ) ,敏感性为 10 0 % (14 / 14 ) ,特异性为 96 3% (2 6 / 2 7) ,阳性预测率为 93 3% (14 / 15 ) ,阴性预测率为 10 0 % (2 7/ 2 7)。用 4个质荷比峰建立的区分脑膜瘤和其他脑良性肿瘤脑脊液蛋白质谱差异表达模型的准确率为 96 % (4 8/ 5 0 ) ,敏感性为 10 0 % (14 / 14 ) ,特异性为 94 4 % (34/ 36 ) ,阳性预测率为92 3% (14 / 16 ) ,阴性预测率为 10 0 % (34/ 34)。盲法交叉验证 ,第一个模型能将脑肿瘤、其他脑良性肿瘤和脑外伤全部正判 ,第二个模型将

特异小干扰RNA敲除PLK1基因的表达

为了研究特异小干扰RNA(siRNA)作用于大肠癌细胞株SW 480中PLK1(Polo-like k inase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于PLK1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW 480细胞,实时定量PCR检测PLK1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,W estern-b lot观察PLK1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变。发现10种siRNA均可敲除PLK1基因表达的20%以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80%以上,这3种siRNA及其混合物对PLK1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好(超过95%),PLK1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍。72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与PLK1基因的mRNA水平变化相一致。结果表明化学合成的特异siRNA对SW 480细胞中PLK1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW 480细胞的分裂生长。

儿童双侧肾母细胞瘤差异性表达蛋白的筛选

目的采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选双侧肾母细胞瘤(BWT)的差异性表达蛋白。方法选取BWT患儿血清标本10例(BWT组),另选单侧肾母细胞瘤(UWT)患儿血清标本(UWT组)及健康儿童血清标本(对照组)各20例,采用SELDI-TOF-MS技术检测并收集相关数据。结果应用生物信息学方法对所得数据进行分析,得到差异性峰10个(P<0.01)。对比各组差异性表达蛋白峰值数据,筛选出质子数/电荷数(m/z)为5 648 Da的差异性表达蛋白1个,其在BWT组、UWT组及对照组中表达强度分别为3 889.36±1 796.83、2 886.81±1 404.65、432.21±730.42,三组相比,P均<0.01。结论采用SELDI-TOF-MS技术成功筛选出一种BWT差异性表达蛋白,其有望成为BWT早期诊断及预后判断的新的标志物。

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法,探讨基于人工神经网络(ANN)的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠(HD)患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例(HD40例,巨结肠类缘病14例,健康儿童12例)和盲法测试组46例(HD24例,巨结肠类缘病11例,健康儿童11例)。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型,对46例未知血清进行检测,并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比(m/z)位于7211.6和2864.8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6.15±2.21和2.78±1.21,巨结肠类缘病组表达强度分别为12.82±7.56和4.86±0.91(Pa<0.01)。筛选出m/z位于6884.2和5639.2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4.09±1.78和15.57±8.87,健康对照组表达强度分别为8.31±3.07和30.31±6.18(P<0.01)。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89.13%(41/46例)、87.50%(21/24例)和90.91%(20/22例),明显高于X线影像学检查68.8%(77/112例)、82.8%(53/64例)和50.0%(24/48例)。结论在HD患儿的诊断中,利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。

人源弓形虫分离株的生物学鉴定及群体 DNA含量分析

通过对不同分离株弓形虫抗原的分析 ,探讨弓形虫虫株间的差异性。取弓形虫 CAg阳性血液标本进行小鼠接种 ,对分离株进行生物学特性鉴定 ;采用流式细胞仪 ( FCM)对分离株弓形虫速殖子进行群体 DNA含量分析。结果在 5份 CAg阳性血液样本中分离到 4株弓形虫 ,两者符合率达 80 % ;经生物学鉴定结果显示 ,4个分离株的形态大小、毒力及抗原性均与 RH株弓形虫相似。上述 5株弓形虫速殖子 DNA含量分析均呈明显规律性 ,即均有 2个分布峰 ,但各虫株间的 2个分布峰中所占速殖子数存在显著性差异 ( P<0 .0 1)。表明检测弓形虫 CAg可作为弓形虫早期、急性期感染的确诊指标 ;采用流式细胞术进行 DNA群体分析 。

滋阴清热方对阴虚内热证型系统性红斑狼疮患者外周血单—核细胞蛋白表达谱的影响

目的:观察滋阴清热方对SLE阴虚内热证患者外周血单一核细胞(PBMC)蛋白表达谱的影响。方法:用滋阴清热含药血清与阴虚内热型SLE患者的PBMC共孵育,用表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)检测检测孵育后PBMC蛋白表达谱。结果:滋阴清热含药血清和空白对照比较,3个蛋白峰表达有统计学差异;滋阴清热含药血清和大鼠空白血清比较,1个蛋白峰表达有统计学差异。结论:滋阴清热含药血清对阴虚内热证型系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞蛋白表达谱的具有影响,SELDI-TOF-MS是寻找SLE患者PBMC表达差异蛋白的有效方法,结果对SLE研究具有积极意义。

用流式细胞术评价一种新型人工肝材料的生物相容性

目的通过用流式细胞术(FCM)观察丙稀酰胺接枝改性聚丙烯膜(PP-g-AAm)的生物相容性,来评价FCM在检测医用生物材料的生物相容性中的作用。方法:用材料浸提液培养L929细胞24h后用FCM检测细胞增殖周期;用改性前、后的膜材料分别与新提取的PRP(富含血小板血浆)和PBMC(末梢血单个核细胞)孵育培养后,用FCM分别检测血小板和PBMC的激活标志物CD62P、CD63和CD69。结果:PP-g-AAm组的PI与阴性组及空白对照组比较差异无统计学意义(P=0.063,P=0.053),而与阳性对照组比较差异有统计学意义(P=0.002)。PP-g-AAm膜组CD62P、CD63及CD69的表达率明显少于对照组(P=0.042,P=0.004,P=0.013)。结论:PP-g-AAm无细胞毒性并具有良好的生物相容性,FCM在生物材料的生物相容性评价中有着广泛的应用价值。