转人端粒酶基因骨髓间充质干细胞的蛋白表达谱分析

通过外源表达人端粒酶基因,构建了具有长期传代能力的骨髓间充质干细胞系(hTERT-hMSC),并在传代过程中尚未发现有丧失接触性生长抑制和转型现象.本文主要目的是采用双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-MS蛋白质谱技术分析hTERT-hMSC细胞的蛋白差异表达图谱,研究表达外源端粒酶基因对骨髓间充质干细胞生物学特性影响的可能机制.通过分析原代第12代hMSC、第95代和275代hTERT-hMSC的蛋白凝胶图,获得原代第12代hMSC总共1543±145个蛋白点,第95代hTERT-hMSC1611±186个蛋白点、275代hTERT-hMSC1451±126个蛋白点.质谱分析鉴定100种蛋白质,其中有20种有显著差异表达.结果表明,膜联蛋白(ANX)和GSTP1表达的下调以及内质网钙结合蛋白1(RCN1)、伴侣素CCT、TUBA1B和ACTG1表达的上调可能提升了人骨髓间充质干细胞扩增的能力,而prohibitin蛋白和p53蛋白维持正常表达可能对hTERT-hMSC维持细胞接触性生长抑制起着重要作用.

脐带血造血干／祖细胞体外扩增制剂及其临床前安全性检测分析

造血干细胞移植(HSCT)可用来治疗多种恶性造血系统疾病.HSCT成功植入的先决条件之一是必须输入足够量的造血干/祖细胞(HS/PCs).细胞剂量过少会导致植入时间延长,移植失败的可能性增大.从脐带血中直接分离的造血干细胞因数量较少而不能满足临床移植的需要.利用骨髓间充质干细胞作为滋养层联合细胞因子组合(SCF+G-CSF+TPO)使脐血造血干/祖细胞体外扩增75.2±15.0倍,CD34+细胞扩增33.4±12.3倍.将扩增的细胞收集,重新悬浮于L-15培养液中制成造血干/祖细胞制剂,并在建立相应的检测技术基础上,进行了细胞制剂的无菌检测以及细胞制剂中细菌内毒素、牛血清残留量和干细胞因子残留量的检测.通过上述检测分析,为扩增的造血干/祖细胞制剂服务临床需要,辅助治疗恶性血液病和再生障碍性贫血以及遗传性贫血重建造血功能提供实验依据.

骨髓间充质干细胞支持脐血造血干／祖细胞体外扩增的研究

目的体外分离培养人新鲜脐血（UCB）造血干细胞（HSC），利用骨髓间充质干细胞作为滋养层联合细胞因子组合以扩增脐血造血干／祖细胞。方法采用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离UCBHSC，加入骨髓间充质干细胞和细胞因子，检测脐血造血干／祖细胞总有核细胞（NC）总数和CD34^＋细胞数。结果有核细胞总数扩增（75．2±15．0）倍，CD34^＋细胞数扩增（18．7±12．3）倍。结论体外HSC培养，加入骨髓间充质干细胞和细胞因子对造血干／祖细胞增殖有明显的作用。