氯化两面针碱在大鼠心脏中的积聚及其机制研究

氯化两面针碱(nitidine chloride, NC)为抗肿瘤候选化合物。本研究考察其在大鼠心脏的分布及其机制,为其潜在的心脏毒性提供依据。动物实验获得了浙江大学医学中心动物保护和使用委员会的批准(2015-380-01),符合中国动物福利标准。大鼠单次静脉注射5 mg·kg^(-1)NC后0.25、0.5和2 h,心脏中NC浓度分别为47.7、71.1和63.2μg·g^(-1),与相同时间点血浆中的浓度比分别为576、1352和1212。大鼠连续静脉注射5 mg·kg^(-1)NC 20天,末次给药后2 h,心脏中NC浓度为458.5μg·g^(-1),与血浆中的浓度比为7336。NC在MDCK-hOCT1、MDCK-hOCT3中的积聚分别为mock细胞的16.1、4.99倍,但在MDCK-hOCTN1、MDCK-hOCTN2、MDCK-hPMAT中的积聚与mock细胞未显示明显差异。此外, OCTs的抑制剂奎尼丁、左旋延胡索乙素、Decynium 22可显著降低NC在原代培养的乳大鼠心肌细胞和成纤维细胞中的积聚。MTT结果显示, NC在心肌细胞和成纤维细胞上的LC_(50)分别为10.9和10.4μmol·L^(-1)。此外,不同浓度的NC可显著增加原代心肌细胞和成纤维细胞中LDH酶渗漏。上述结果表明, NC在大鼠心脏积聚和蓄积,对原代心肌细胞和成纤维细胞具有一定的毒性; OCT1和OCT3可介导NC的心脏积聚。

稳定表达人OCTN1/OCTN2的细胞模型构建及应用

人肉碱/有机阳离子转运体1和2(human carnitine/organic cation transporters,hOCTN1/hOCTN2)参与多种内、外源物质转运。本研究拟构建稳定表达hOCTN1/2的细胞模型,用于药物与转运体相互作用的研究。将重组质粒pcDNA3.1(+)-hOCTN1/2转染MDCK细胞,经G418抗性筛选挑取单克隆细胞株,以麦角硫因(OCTN1经典底物)或米屈肼(OCTN2经典底物)进行细胞积聚研究,挑选功能最优的MDCK-hOCTN1/2细胞株为模型细胞。进一步考察经典底物的积聚动力学,并探究内源物、生物碱、黄酮及普利类药物对hOCTN1/2的抑制作用。结果显示,麦角硫因在MDCK-hOCTN1细胞上的积聚量为mock细胞的122倍,K_m和V_(max)为8.19±0.61μmol·L^(-1)和1 427±49 pmol·mg^(-1)(protein)·min^(-1);米屈肼在MDCK-hOCTN2细胞上的积聚量为阴性对照(mock细胞)的108倍,K_m和V_(max)为52.3±4.3μmol·L^(-1)和2 454±64 pmol·mg^(-1)(protein)·min^(-1)。多巴胺、谷氨酰胺、胡椒碱、黄连素、荷叶碱、赖诺普利和福辛普利对hOCTN1/2有显著的抑制作用。因此,本研究构建的MDCK-hOCTN1/2细胞模型可应用于药物与hOCTN1/hOCTN2相互作用研究。