手性药物代谢研究中的对映体分析方法(英文)

生物体是一个复杂的手性系统,其手性特征促使了它们与手性化合物的立体选择性相互作用。手性药物的两个对映体在吸收、分布、代谢、排泄过程中存在着动力学差异,尤其是代谢行为。因此,在手性药物代谢的研究中,同时测定对映体是极为重要的。本文通过综述近年来发表的众多文献,详细论述了在药物代谢中应用广泛的手性分析方法,包括高效液相色谱、高效液相色谱-质谱联用、气相色谱和毛细管电泳等。

微电子细胞传感器在抗肿瘤药物分析中的应用研究

研究采用微机械加工技术制备了生物电阻抗检测用的细胞传感器芯片。传感器各通道为50μm的微电极,以交错的方式间隔50μm排列。配以相应的药物微进样系统与控制系统后,将人肺腺癌细胞系A549细胞接种培养于芯片电极表面,研究了人参皂苷Rh2对细胞的作用。阻抗测试结果显示:人参皂苷Rh2具有良好的抑制肿瘤细胞生长作用,表明细胞微电子芯片为抗肿瘤药物的分析与筛选提供了一个良好微传感器测试平台。

肠道菌群对菊花提取物的代谢作用

目的观察和比较人、大鼠、B eag le犬及家兔肠道菌群对菊花提取物(Chry santhem um m orif olium ex tracts,CM E)的代谢作用。方法采用人、大鼠、B eag le犬及家兔的新鲜粪便37℃厌氧培养,经醋酸乙酯提取后采用RP-HPLC及LC-M S方法对代谢成分进行分离和定性、定量分析。结果CM E容易被肠道菌群代谢,0.5 h后样本中能检测出较高浓度代谢物;经LC-M S检测,主要的代谢物为木犀草素和芹菜素;随着代谢时间的延长,两者均出现降解代谢的现象,24 h后几乎检测不到这两种代谢物;且人、大鼠和B eag le犬肠道菌群对CM E的代谢较快,而家兔肠道菌群对CM E的代谢过程比较平缓。结论在离体条件下,CM E可以被人、大鼠、B eag le犬及家兔的肠道菌群代谢,主要的代谢物为木犀草素和芹菜素。

扁桃酸在大鼠、小鼠和兔组织中的立体选择性代谢(英文)

目的研究扁桃酸(MA)在大鼠、小鼠和兔组织中的立体选择性代谢,探讨MA代谢酶存在的部位、辅酶依赖性等性质以及可能的种属差异。方法MA对映体与大鼠、小鼠和兔的肝脏、肺、肾脏S9和微粒体共孵育,HPLC检测代谢并用柱前衍生化方法进行手性分析。同时考察辅酶NADH和NADPH及醇脱氢酶竞争性底物乙醇和抑制剂4-甲基吡唑对S-MA代谢的影响。结果S-MA在大鼠肝和肾S9中被代谢为PGA,而R-MA无代谢。两对映体在小鼠和兔组织中均不被代谢。乙醇和4-甲基吡唑不影响酶的活性,该代谢顺利进行的重要辅酶是NADPH而非NADH。结论大鼠中参与MA立体选择性代谢的酶是存在于胞浆或线粒体中的具有NADPH依赖性的非微粒体酶,而不是醇脱氢酶。MA的立体选择性代谢存在种属差异性。

桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素的含量考察

目的建立桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的测定方法,并考察不同采摘时间、不同种植基地及药用部位的桑叶药材中总生物碱和DNJ含量。方法采用雷氏盐比色法测定总生物碱含量;应用HPLC-ELSD测定DNJ含量。流动相为乙腈-水(80:20);流速:1.0mL.min-1;柱温30℃;进样量:20μL。漂移管温度55℃;载气(N2)压力:0.15MPa。结果本实验所建立的方法准确、重复性好。不同采摘时间、采摘部位的桑叶中二者含量差异较大,不同种植基地的桑叶中二者含量变化相对较小。结论测定结果表明,桑叶中DNJ和总生物碱的含量与采摘时间、种植基地及药用部位等密切相关,其中采摘季节、部位影响较大。

桑叶中绿原酸和主要黄酮苷含量的RP-HPLC测定

目的:考察不同品种、不同采摘时间和不同种植基地桑叶中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含量差异。方法:采用反相高效液相色谱法,以 Zorbax SB C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,90%乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱[0 min,A-B(12:88);10 min,A-B(16:84);20 min,A-B(20:80);30 min,A-B(25:75)],流速1.0 mL·min^(-1),检测波长358 nm。结果:不同种植基地的桑叶中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含最有一定的差异;不同品种和采摘时间的桑叶中上述三成分含量差异较大。结论:桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷的含量与种植基地、采摘季节、品种等有关,其中尤以季节和品种影响较大。

花生壳总黄酮及木犀草素含量

目的：建立花生壳中总黄酮和木犀草素的含量测定方法，并探讨不同产地花生壳二者含量。方法：以木犀草素为对照，AICl3比色法测定总黄酮含量；RP—HPLC法测定木犀草素含量，以Zorbax SB C18柱为分析柱，甲醇-0．2％磷酸（51：49）为流动相，检测波长350nm。结果：总黄酮在1．04—10．4μg／ml范围内线性关系良好，r=0．9992，平均加样回收率100．3％（n=9）；木犀草素在2．233—71．46μg／ml范围内线性关系良好，r=0．9999，平均加样回收率为100．7％（n=9）。结论：本文所建立的方法操作简便快速，结果准确可靠。测定的11个不同产地样品的含量差异较大，作提取原料应注意检测。

杭白菊中主要黄酮苷的测定及影响因素考察

目的:测定杭白菊中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和芹菜素-7-O--βD-葡萄糖苷含量,并考察影响其含量的因素。方法:采用反相高效液相色谱法,以Zorbax SB C18为分离柱,乙腈-10 mmol.L-1磷酸盐缓冲液(pH 2)为流动相进行梯度洗脱,检测波长338 nm。结果:不同种植基地、不同采摘时间、不同炮制工艺及不同等级的杭白菊中木犀草素-7-O--βD-葡萄糖苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量有一定的变化;不同年度的杭白菊中2成分含量差别不大;不同产地及不同品种菊花2成分含量差异较大。结论:杭白菊2成分的含量与种植基地、炮制工艺等有一定的关系,产地、品种对其含量的影响更大。

杭白菊总黄酮对大鼠缺血/再灌损伤大脑的保护作用

目的观察杭白菊总黄酮(total flavones extracted from chrysanthemum morifolium,TFCM)对大鼠缺血/再灌损伤大脑的影响,并初步探讨其机制。方法采用大脑中动脉内栓线梗塞法造成大鼠局灶性脑缺血/再灌损伤模型,缺血90min,再灌注22h后,以盐酸2,3,5-三苯基四氮唑染色法测定脑梗死面积,比色法测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehycle,MDA)含量,采用“10分法”进行神经症状评分。用荧光分光光度计检测氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的生成;测定分离脑线粒体540nm处吸光度。结果TFCM(50,100,200mg·kg-1,ip)能明显改善脑缺血/再灌后大鼠神经症状,明显减小梗死面积与全脑面积之比,提高缺血脑组织SOD活性,降低MDA含量,并减少脑组织ROS的生成。TFCM减轻Ca2+诱导的脑线粒体肿胀,此作用可被苍术苷所拮抗。结论TFCM对大鼠缺血/再灌损伤大脑具有显著的保护作用,其作用机制可能与TFCM抗氧化作用进而抑制线粒体肿胀有关。

杭白菊HPLC指纹图谱的评价

目的建立杭白菊药材的高效液相指纹图谱(HPLC-FP),为杭白菊的鉴别及品质控制提供依据。方法采用RP-HPLC 对不同种植基地、不同时间采摘、不同等级及不同贮存时间的杭白菊与国内其他品种菊花的主要有效成分黄酮类成分进行指纹图谱研究。结果HPLC指纹图谱中杭白菊主要黄酮类成分均得到很好分离,根据聚类分析和相似度分析处理结果,23个不同种植基地、不同采摘时间及不同贮存时间的杭小白菊被正确地区分出来,相似度均在0.95-1.00之间,而其他菊花的相似度均小于或等于0.90。结论HPLC-FP可以作为杭白菊质量评价和药材鉴别的依据。

高效液相色谱法测定口服银杏制剂后兔血中槲皮素和山萘酚浓度

目的:建立分离、测定兔血浆中槲皮素和山萘酚浓度的高效液相色谱方法。方法:用外标法,血样用盐酸水解,乙醚提取, 提取液30℃水浴氮气吹干,残留物用流动相溶解进样。采用YWGC18柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.01mol·L-1磷酸盐缓冲 液(pH2) 四氢呋喃 甲醇 异丙醇(60∶15∶10∶15)为流动相,流速0.5mL·min-1,紫外检测波长380nm。结果:槲皮素和山萘酚在 16.66～156.8μg·L-1范围内线性关系良好,r分别为0.9912和0.9941,槲皮素和山萘酚的回收率分别为101.8%和103.2%,日内 及日间精密度小于8.4%和10.7%。测得血浆中槲皮素和山萘酚的定量限和检测限分别为16.7,4.2μg·L-1。结论:本法简便,准 确,可用于兔血样中槲皮素和山萘酚浓度测定。

LC-MS/MS法快速测定全血中25种精神药物的研究

目的建立人全血中25种精神药物快速测定的LC-MS/MS方法,并应用于分析杭州地区药物影响下驾驶(driving under the inference of drugs,DUID)情况。方法以乙腈沉淀蛋白,离心后取上清液,氮气流下吹干,残渣以初始流动相复溶,离心后取上清分析;采用C18色谱柱(50mm×3.0mm,2.6μm)分离,流动相:0.1%甲酸水(A相),乙腈:甲醇=1:1(B相),梯度洗脱;质谱检测,采用串联质谱电喷雾离子源,正电离扫描,多反应监测(MRM)。结果 25种精神药物在0.05~20ng/m L范围内线性良好,R=0.994 4~0.999 6;定量下限为0.05ng/m L;提取回收率为83.0%~99.7%;方法回收率为80.2%~97.4%;日内精密度(RSD)为1.6%~14%;日间精密度(RSD)为3.1%~14%。以该法测定杭州市公安司法鉴定中心留存的全血样品3140例,25种精神药物至少一种的检出率为3.7%。结论本方法灵敏、快捷、准确,适用于全血中25种精神药物快速检测。

HPLC法测定经酸水解的菊花中三种活性黄酮苷元的含量(英文)

本文建立了一种测定菊花主要生物活性黄酮的方法。将粉碎后的菊花经盐酸甲醇混合溶液水解、提取,用 HPLC法测定其木犀草素、芹菜素、香叶木素活性成分的含量。采用正交设计法优化提取水解条件,其最佳条件为: 粉末状菊花在盐酸浓度为2.4 M,甲醇浓度为80% (v/v) 的混合溶液中, 于80 oC水浴回流 2 h。提取液采用高效液相色谱法分析,以SB-C18为分离柱,检测波长为344 nm。木犀草素、芹菜素、香叶木素的标准曲线范围分别为2.233-71.46μg/mL,1.668-53.38μg/mL,1.410-45.11μg/mL 回收率分别为100.3%,103.9%, 100.4%日内精密度分别为0.68%,0.21%, 0.38% 日间精密度分别为2.6%,1.7%,2.0%。采用上述方法测定了杭白菊等8种主流菊花中上述3种活性苷元的含量。

叶黄素制品在大鼠体内药代动力学和生物利用度

目的:研究叶黄素微胶囊和叶黄素油悬浮液两种叶黄素制品在大鼠体内的药代动力学和相对生物利用度。方法:建立大鼠血浆中叶黄素的LC-MS/MS测定方法。考察大鼠分别灌胃给予100 mg/kg叶黄素微胶囊或叶黄素油悬浮液后血药浓度变化,应用DAS 2.0软件计算药动学参数,根据叶黄素微胶囊和叶黄素油悬浮液药-时曲线下面积AUC(0-t)计算相对生物利用度。结果:叶黄素浓度5 ng/ml^200 ng/ml的浓度范围内线性关系良好(r=0.997);定量下限为为5 ng/ml;10 ng/ml、50 ng/ml和160 ng/ml三个浓度剂量组的方法回收率分别为69.7%、94.9%和98.1%;提取回收率分别为75.3%、70.9%和73.4%。大鼠单剂量给予叶黄素微胶囊和叶黄素油悬浮液的主要药动学参数Cmax分别为(65.8±38.9)mg/L和(48.3±17.3)mg/L,Tmax分别为(4.7±3.0)h和(3.7±0.8)h,AUC(0-32)分别为(566.6±203.6)mg/L·h和(385.2±107.3)mg/L·h,叶黄素微胶囊的相对生物利用度为147.1%。结论:所建立LC-MS/MS方法简单、快速,可用于大鼠叶黄素血药浓度的测定和药动学研究。以叶黄素油悬浮液为参比制剂,叶黄素微胶囊在大鼠体内的生物利用度明显提高。

重组人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的克隆表达及应用

克隆、表达人和大鼠醇脱氢酶(ADH)、醛-酮还原酶(AKR)基因全长cDNA,研究扁桃酸(MA)代谢机制。设计引物,利用RT-PCR克隆人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶基因全长cDNA。测序正确的cDNA被克隆到表达载体pET-28a(+)上并在大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达。利用亲和色谱纯化相应的酶,通过检测其在340 nm吸收度值的变化进行酶活性测定。获得的醇脱氢酶与扁桃酸,醛-酮还原酶与苯乙酮酸(PGA)共孵育,采用HPLC分析其代谢和转化情况。通过测序,目的蛋白的cDNA序列完全正确,在宿主菌中获得良好的可溶性表达,经Ni2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,具有较好的催化活性。人ADH2对扁桃酸的代谢具有立体选择性,优先代谢S-MA,对S-MA的代谢能力较强。大鼠ADH1对扁桃酸无代谢活性,人和大鼠AKR对苯乙酮酸均无代谢。成功构建人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的表达质粒,获得高活性的蛋白。这些重组酶模型可以用于由醇脱氢酶和醛-酮还原酶介导的药物代谢研究。

HF-LPME-GC测定PVC输液管路中6种邻苯二甲酸酯的迁移

目的：将中空纤维膜液相微萃取（HF-LPME）与气相色谱技术相结合,建立PVC输液管路中6种邻苯二甲酸酯迁移量的测定方法。方法：通过优化影响萃取富集效率的实验条件,选择长度为1.5 cm的聚丙烯中空纤维膜,以含有苯甲酸苄酯（内标）的甲苯为萃取溶剂,在500 r·min-1搅拌下,萃取30 min,取萃取液1.0μL直接进样,进行气相色谱分析。采用DB-5MS石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）,程序升温,进样口温度250℃;FID检测器温度300℃,载气为氮气。结果：该方法对6种邻苯二甲酸酯的富集倍数在151-1189倍之间。检测限（S/N=3）为0.2-7.5μg·L^-1,加标回收率为85.6%-98.5%,RSD为4.0%-11.0%。结论：本方法灵敏、简便,适用于PVC输液管路邻苯二甲酸酯迁移量的检测。