低分子肝素抗肝癌细胞增殖及机制研究

[目的]研究低分子肝素(LMWH)抗肝癌细胞SMMC-7721增殖作用及机制。[方法]MTT法测LMWH、UFH及联合化疗药物阿霉素(ADR)对SMMC-7721的生长抑制作用,流式细胞仪AnnexinVFITC-PI法检测细胞凋亡发生率,同时Westernblot检测细胞p53、bcl-2蛋白表达。[结果]LMWH、UFH能抑制细胞生长,呈剂量依赖关系,并与诱导细胞凋亡有关;化疗药物ADR联合肝素有协同抗增殖作用。LMWH、UFH促进细胞凋亡过程中,p53表达无明显改变,bcl-2表达略下调。[结论]肝素、低分子肝素可通过诱导细胞凋亡发挥抗肝癌作用;化疗药物ADR联合肝素有协同抗增殖作用。

慢性前列腺炎混合感染的研究

目的 :对慢性前列腺炎患者淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体感染进行单一病原体及多种病原体混合感染研究。方法 :采用聚合酶链反应 ( PCR)对慢性前列腺炎 2 89例的前列腺分泌物进行淋球菌 ( NG)、沙眼衣原体 ( CT)、解脲支原体 ( UU)检测。结果 :2 89例中 NG检出率为 1 0 .2 % ,UU检出率为 30 .6% ,CT检出率为 1 4.2 % ,NG+ UU检出率为 4.5 % ,NG+ UU+ CT检出率为 1 .5 % ,UU+ CT检出率为 8.5 % ,NG+ CT检出率为 2 .8%。结论 :对原因不明的慢性前列腺炎病人 ,有必要对其感染的病原体进行检测。

小鼠血吸虫感染后肝脏羟脯氨酸含量测定方法的实验研究

机体胶原蛋白的主要特征性成份之一为羟脯氨酸,它占胶原蛋白氨基酸总量的13%,因此测定肝脏组织的羟脯氨酸含量,是反映肝脏纤维化程度的直接指标。但传统的测定方法有待进一步完善,在此作者进行了部分改进。1 材料和方法1.1 实验材料用日本血吸虫大陆株尾蚴30±2条感染IC...

聚众和散在静脉吸毒者HIV、HBV、HCV感染的比较研究

目的 :为比较聚众和散在静脉吸毒人员人类免疫缺陷病毒 (HIV)、乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)感染和重叠感染的差异。方法 :用ELISA法对 79份浙江境内静脉吸毒者 (15份为聚众静脉吸毒者 ,6 4份为散在静脉吸毒者 )血清进行HIV、HBV、HCV血清标志物检测。结果 :15份聚众静脉吸毒者血清抗HIV10 0 % (15 15 )阳性 ,抗HCV93 3% (14 15 )阳性 ,86 7% (13 15 )HBV感染标志物阳性 ;6 4份散在静脉吸毒者血清抗HIV无 1例阳性 ,抗HCV2 1 9% (14 6 4)阳性 ,82 8% (5 4 6 4)HBV感染标志物阳性。聚吸组抗HIV、抗HCV阳性显著高于散吸组 (P <0 0 0 1) ,而HBV感染标志物阳性两组间无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;聚吸组HIV重叠HBV感染为 86 3%(13 15 ) ,HIV重叠HCV感染为 93 3% (14 15 ) ,HBV重叠HCV感染为 80 0 % (12 15 ) ,HIV、HBV、HCV三重感染为 6 6 7% (10 15 ) ,与散吸组存在显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论 :聚众静脉吸毒者比散在静脉吸毒者有更高的HIV、HCV感染 ;聚众静脉吸毒者比散在静脉吸毒者有更高的HIV、HBV。

原发性肝癌患者血清hcct-19特异性抗体的研究

目的探讨hcct-19抗原对HCC的特异性。方法采用重组cDNA表达文库血清学分析技术(SEREX)研究异体HCC和其他疾病患者血清hcct-19抗体的阳性率,并用χ2检验分析HCC患者血清中hcct-19抗体阳性表达与患者临床指标之间的关系。结果 hcct-19抗体的产生主要见于HCC患者,阳性反应率为27/46(58.70%)。正常健康人、慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者、胃癌患者、胰腺癌患者及大肠癌患者阳性反应率分别为0.00%(0/20)、0.00%(0/20)、0.05%(1/20)、8.33%(1/12)、0.00%(0/9)及0.00%(0/11)。HCC患者血清中hcct-19抗体的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、血清AFP水平、HBV感染及是否合并肝硬化无显著的相关性(P>0.05)。结论 hcct-19抗原对HCC有高度特异性,可考虑作为HCC血清学诊断的指标之一。

慢性肝炎患者肝组织胶原半定量测定方法的研究

目的:探讨慢性肝炎患者肝组织胶原半定量测定方法对肝纤维化量化诊断的临床价值。方法:对40例慢性肝炎和6例正常对照组的肝脏穿刺组织标本,常规组织切片,HE、Masson三色和苦味酸天狼红染色,苦味酸天狼红染色与洗脱液进行比色测定,并观察胶原定量与炎症活动度(G)、炎症半定量计分(SSG)和纤维化分期(S)、纤维化半定量计分(SSS)的相关性。结果:急性肝炎组、慢性肝炎轻度、中度、重度组的G、SSG的计分均值和S、SSS的计分均值呈上升趋势;肝组织切片胶原半定量检测结果,正常对照组为(42.15±1.87)μg/mg、急性肝炎组为(49.04±11.89)μg/mg、慢性肝炎轻度组为(56.24±9.16)μg/mg、慢性肝炎中度组为(87.09±21.81)μg/mg、慢性肝炎重度组为(121.69±10.03)μg/mg,从正常对照组到慢性肝炎重度组胶原半定量也呈上升趋势;且切片胶原含量与其他指标存在较好的相关性,与G、SSG、S、SSS的r分别是0.91、0.89、0.97、0.89,其P均<0.01。结论:肝脏组织切片胶原测定方法可客观反映肝脏纤维化的程度,而且是一个简单而且敏感的量化诊断指标。

HIV感染者高效抗逆转录病毒治疗失败后的耐药研究

目的 :研究抗 - HIV治疗失败患者体内 HIV RNA和 DNA的基因变异情况 ,探讨其耐药机理从而指导临床用药 ,并对现有耐药数据库进行补充。方法 :对德国鲁尔大学艾滋病中心 10例抗 HIV耐药患者血浆中抽提HIV RNA和 DNA,分别对其逆转录酶区 (RT)和蛋白酶区 (PI)进行 PCR扩增 ,产物回收后进行测序 ,得到的序列与国际标准株 HXB2 CG和 Standford大学耐药数据库比较 ,从而找出变异位点 ,并结合临床进行分析讨论。结果 :我们发现了一些能引起对某些药物产生相应耐药的有意义的突变位点 ,并与临床结果一致。我们还发现在一些患者中存在的突变 ,在 Standford大学耐药数据库中还未报道。结论 :HAART治疗失败者存在不同程度的逆转录酶区和蛋白酶区变异 ,逆转录酶区 V197I,蛋白酶区 K2 0 T,K2 0 I等变异可能与耐药有关。

霍乱弧菌和副溶血弧菌分离株的gyrB基因系统发育分析

依据gyrB基因部分编码序列构建系统发育树以分类和鉴别霍乱弧菌和副溶血弧菌,并探讨其种系发生关系。扩增并测序13株霍乱弧菌、8株副溶血弧菌、2株嗜水气单胞菌及1株类志贺邻单胞菌的gyrB基因(编码DNA促旋酶B亚单位)序列,并采用距离法与最大似然法构建系统发育树。两种方法所构建的树结构完全一致,霍乱弧菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌及类志贺邻单胞菌各自形成一个独立的簇。其中,霍乱肠毒素基因(ctxA)阳性的霍乱弧菌(8株O139群与2株O1群ElTor型)聚类成一分枝;3株副溶血弧菌临床株(1株2002年流行株,2株2004年分离株)与1日本菌株及2001年1株自环境分离的毒力株聚类。系统发育分析靶分子gyrB基因可以良好区分上述4种常见病原菌。产毒O139群霍乱弧菌与产毒O1群ElTor型霍乱弧菌关系密切。副溶血弧菌环境毒力株与本地区临床主要流行株在系统发育关系上较为接近,可能是潜在的致病菌。

晚期日本血吸虫病患者肝组织基质金属蛋白酶2和9的表达

目的 研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在晚期日本血吸虫病患者肝组织中的表达及意义。方法 26例晚期日本血吸虫病患者肝活检标本和5例正常人肝标本行常规病理检查,用MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原(G-Ⅳ)单克隆抗体进行免疫组织化学染色进行定量和定位研究。结果 MMP-2主要表达在肝细胞浆、肝细胞膜和肝窦,肌成纤维细胞和血管内皮细胞也有表达。MMP-9主要表达在肝星状细胞、肝窦和肌成纤维细胞,偶见肝细胞浆和胆管上皮细胞表达。晚期日本血吸虫病患者肝组织MMP-2、MMP-9和G-Ⅳ的表达明显高于正常人(P<0.05),随着汇管区炎症活动度和肝纤维化程度的升高,MMP-2的表达也明显增强(P<0.01),MMP-9的表达无明显改变(P>0.05),C-Ⅳ表达与MMP-2呈同步关系。结论 MMP-2与日本血吸虫病肝纤维化的发生、发展有关,MMP-9表达与日本血吸虫病肝纤维化的发生有关。

杭州市大中学生预防艾滋病健康教育干预效果评价

目的了解杭州市大中学生对艾滋病的认知、观念以及健康教育干预效果，为制定学校艾滋病健康教育策略提供依据。方法抽取杭州市高中学生1185名和大学生3200名，在健康教育干预前后进行无记名问卷调查，结果高中生和大学生对HIV／AIDS的基本知识测试得分分别为89．9分和96．5分，高中生对艾滋病相关知识的了解不及大学生。但高中生有关艾滋病的正确观念测试得分比大学生高，前者得分为85．4分，后者为79．5分，而且健康教育干预后，前者得分为92．1分，后者为85．2分，表明中学生容易接受正确的观念。从几项主要知识掌握情况以及重要观念的定性对比分析表明，高中生知晓率在78．9％～100．0％之间，中位数为94．5％；大学生在89．4％～100．0％之间，中位数为95．9％。几项重要观念的正确持有率，高中生在15．3％～100．0％之间，中位数为80．9％；大学生在44．8％～97．3％之间，中位数为67．9％。结论在高中阶段开展预防艾滋病健康教育，其重要性和成效性好于大学阶段，应高度重视高中学生的艾滋病健康教育。

IgA肾病患者外周血γδT细胞分泌TGF-β1的功能

目的研究IgA肾病患者外周血γδT细胞分泌TGF-β1的功能。方法用流式细胞仪分析外周血γδT细胞比率并检测血清IgA的水平,以抗TCRγδ单克隆抗体(mAb)固相法,体外选择性地扩增γδT细胞。在体外培养的条件下,以抗CD3抗体刺激48h后,用ELISA法测定培养体系中TGF-β1的水平。结果IgA肾病患者外周血γδT细胞的比例升高,并与血清IgA的水平呈正相关。用抗TCRγδmAb固相法能获得高纯度的γδT细胞。经抗CD3抗体刺激的IgA肾病患者的γδT分泌TGF-β1的量比正常对照组明显升高。结论IgA肾病患者的γδT细胞可通过大量分泌TGF-β1参与该病的发生、发展。

珍珠质自然涂层钛种植体表面对MC3T3E1成骨样细胞的作用

为了研究珍珠质自然涂层钛种植体表面的体外生物相容性,将珍珠质自然涂层的钛片与MC3T3E1成骨样细胞复合培养以观察细胞的生长、增殖和分化.分别以羟基磷灰石涂层钛片和没有涂层的纯钛片作为对照组,以MC3T3E1细胞单纯培养作为空白组,分别培养3天,5天和7天,通过倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞增殖活性,金氏比色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性以及蛋白质印迹(Western blotting)法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平.结果发现,细胞在珍珠质周围能形成良好附着,在其表面生长丰满.细胞培养第3天,第5天和第7天时,珍珠质表面的细胞增殖指数分别为(35.9±2.5)%、(69.7±3.3)%和(58.2±2.6)%,ALP活性分别为(6.123±2.917)U/g、(17.486±1.986)U/g和(23.987±1.372)U/g.第5天和7天时,实验组的细胞增殖指数、ALP活性和TGF-β1表达水平显著高于对照组和空白组(P<0.05).珍珠质自然涂层钛表面有利于MC3T3E1细胞的生长、增殖和分化,表明了珍珠质涂层能提高种植体表面的生物相容性,有可能会促进种植后的骨整合.

亚急性重型肝炎患者TNF-α和IL-1表达及IL-4对其的调控

目的：分析ＩＬ４对亚急性重型肝炎（亚重肝）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）ＴＮＦα和ＩＬ１的调控作用，评价ＩＬ４在亚重肝治疗中的潜在价值。方法：应用细胞生物学、免疫组化和ＲＴＰＣＲ等方法测定ＰＢＭＣｓＴＮＦα、ＩＬ１的表达。结果：亚重肝患者ＰＢＭＣｓＴＮＦα、ＩＬ１表达水平均较正常人显著增高，虽然ＩＬ４ｍＲＮＡ及蛋白质的表达与正常人比较无显著性差异，但ＩＬ４ｍＲＮＡ／ＴＮＦαｍＲＮＡ和ＩＬ４ｍＲＮＡ／ＩＬ１αｍＲＮＡ的比值明显降低，ＩＬ４以剂量依赖方式明显抑制ＬＰＳ诱导的亚重肝患者ＰＢＭＣｓＴＮＦα、ＩＬ１的表达；与正常人比较，ＩＬ４对亚重肝患者ＰＢＭＣｓ的作用效应降低。结论：ＩＬ４对亚重肝ＰＢＭＣｓＴＮＦα、ＩＬ１的表达均具有明显抑制作用。

转化生长因子β1及其Ⅱ型受体在原发性肝癌中的表达

目的：为了探讨ＴＧＦ－β１及其受体在肿瘤发病中的作用。方法：本文选取了３０例原发性肝癌患者的癌组织和癌旁组织，用免疫组化及核酸狭缝杂交，图像分析仪半定量的方法，从基因转录和蛋白质表达水平分析ＴＧＦ－β１及ＴＧＦ－β１受体的含量。结果：在肿瘤发生的情况下，癌细胞，癌旁组织细胞均表达ＴＧＦ－β１，后者分泌量明显高于前者，同时，癌旁有大量的ＴＧＦ－β１受体表达，而癌细胞大部分为阴性。结论：ＴＧＦ－β１受体的缺失，可能是肿瘤细胞逃避ＴＧＦ－β１抑制生长作用的方式。

氧化型低密度脂蛋白诱导LOX-1在基因和蛋白水平表达

目的 研究氧化型低密度脂蛋白(oxidizedLDL,ox LDL)是否能在基因和蛋白两个水平诱导内皮细胞表达凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin likeoxidizedLDLreceptor,LOX 1),以探讨LOX 1在动脉粥样硬化形成和发展中的作用.方法 将不同浓度ox LDL(20,40,60,80mg/L)与内皮细胞共孵育24h及浓度40mg/L的ox LDL作用内皮细胞不同时间(0、3、6、12、24h),反转录聚合酶链反应检测LOX 1mRNA水平表达,细胞酶联免疫法测定LOX 1蛋白水平表达.结果 加入Ox LDL20mg/L使LOX 1mRNA和蛋白表达量增加(P<0.01),40mg/L使其表达量达最高峰,随后逐渐下降.而同一浓度下从0h～24h的趋势是LOX 1mRNA和蛋白逐渐增加(P<0.01),在12h增加最明显.结论 氧化型低密度脂蛋白呈剂量依赖性和时间依赖性地上调LOX 1mRNA和蛋白表达,LOX 1可能在动脉粥样硬化形成和发展中起重要作用.

PCR-Flow定量检测外周血嵌合体方法的建立及临床应用

目的:建立能定量检测肾移植术后供体来源细胞(嵌合体)的PCR-Flow方法。 方法:利用细胞内聚合酶链反应(PCR)结合流式细胞仪、琼脂凝胶电泳、凝胶成像分析、荧光显微镜等技术,用两位人类白细胞DR抗原(HLA-DR)位点不同献血者外周血单核细胞,模拟供受体细胞混合(嵌合体),进行实验可行性和准确性研究,并对实验进行特异性分析。在此基础上对本院1999年1月至2001年12月进行肾移植联合供体骨髓细胞(donor bone marrow cell, DBMC)输注36例(DBMC组)及未进行骨髓输注的同一供体配对患者26例(配对对照组)移植术后嵌合体进行动态检测。 结果:模拟的嵌合体百分比与PCR-Flow检测嵌合体百分比呈直线关系,且方法的敏感性为0.05%,为特异性扩增。DBMC组术后4周和8周嵌合体与配对对照组相比明显增加,分别为(9.208.03)%与(1.292.05)% (P<0.01),和(7.73 7.35)%与(0.761.93)%(P<0.01)。但8周以后各个时间点两组之间无统计学差别。 结论:PCR-Flow检测嵌合体方法可靠、敏感性和特异性高,是检测外周血中微量嵌合体的新方法。

日本血吸虫病患者γ干扰素及其受体检测意义

目的 研究γ干扰素 (IFN γ)及I型γ干扰素受体 (IFN γR1)在慢性血吸虫病 (慢血 )及晚期血吸虫病 (晚血 )患者中表达水平 ,探讨IFN γ和IFN γR1表达的临床意义及其和肝纤维化的关系。 方法 用流式细胞术检测慢血及晚血患者外周血淋巴细胞IFN γR1的表达水平 ;用ELISA法检测慢血及晚血患者血清IFN γ水平 ;用放射免疫法检测血清中透明质酸 (HA)、Ⅳ胶原 (Ⅳ C)、层粘连蛋白 (LN)、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )等肝纤维化指标。采用对比分析 ,观察IFN γR1、IFN γ及肝纤维化指标在慢血及晚血患者中的表达水平及相关性。 结果 慢血患者IFN γR1和IFN γ与健康对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;晚血未切脾患者IFN γR1表达明显低于其他组 (P <0 .0 5 ) ,而IFN γ增高 (P <0 .0 1) ;晚血切脾患者此两项指标又恢复正常 ;IFN γR1和IFN γ与HA、Ⅳ C、LN、PCⅢ之间无相关性 (r分别为 0 .19、0 .2 0、0 .14、0 .2 1)。结论 IFN γR1和IFN γ之间存在相互对应关系 ,IFN

雷公藤多甙对IgA肾病患者外周血γδΤ细胞及其分泌TGF-β_1功能的影响

目的:观察雷公藤多甙对IgA肾病(IgAN)外周血γδΤ细胞及其表达TGF-β1功能的影响。方法:选择IgAN患者25例,运用流式细胞仪检测IgAN患者用药前后外周血γδΤ细胞比率并测定血清IgA水平;以抗TCRγδ单克隆抗体(mAb)固相法,体外选择性地扩增γδΤ细胞。在体外培养条件下,以抗CD3抗体刺激48小时后,用ELISA法测定体外培养体系中γδΤ细胞的TGF-β1表达。结果:雷公藤多甙能抑制IgAN患者外周血γδΤ细胞与血清IgA的升高,同时还能抑制γδΤ细胞的TGF-β1过度分泌。结论:降低IgAN外周血γδΤ细胞与血清IgA水平,同时抑制γδΤ分泌TGF-β1,是雷公藤多甙治疗IgAN的作用机理之一。

乙型肝炎基因重组疫苗与血源疫苗接种易感人群抗体应答比较

比较国产乙肝基因重组疫苗和血源疫苗免疫效果。用乙肝基因重组疫苗接种 47人 ,接种剂量 5 μg× 3 ,乙肝血源疫苗接种 74人 ,接种剂量 10 μg× 3 ;均按 0 ,1,2月程序接种 ;以SPRIA检测免疫对象HBV血清学标志物。结果 ,两组接种对象均未出现严重的副反应 ;完成 3针免疫接种后 6个月时 ,基因重组疫苗组抗 HBs阳转率 ( 44 7% )显著小于血源疫苗组阳转率 ( 98 7% ) ;基因重组疫苗组抗 HBsS/N值显著小于血源疫苗组。结果提示国产乙肝基因重组苗安全性是好的 ,但免疫效果较血源疫苗差。