tPA和VEGF165基因共表达质粒对人血管细胞增殖的影响和纤溶作用

目的:观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因共表达质粒在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达,并研究表达产物对血管内皮细胞(VEC)和VSMC增殖的影响和纤溶作用。方法:用脂质体转染法将tPA和VEGF165的共表达质粒pBudCE4.1/tPA-VEGF165转染VSMC,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别从mRNA水平和蛋白质水平检测tPA和VEGF165的表达;纤溶蛋白板法检测转染基因的VSMC培养基中tPA的纤溶活性;取转染pBudCE4.1/tPA-VEGF165质粒的VSMC培养基培养VEC和VSMC,用四甲基偶氮唑盐(MTT法)和流式细胞技术检测转基因VSMC的细胞培养基对VEC和VSMC增殖的影响。结果:pBudCE4.1/tPA-VEGF165转染VSMC后,RT-PCR和ELISA检测发现,tPA和VEGF165在mRNA和蛋白质水平均有表达;转基因培养基有明显促进纤溶和促VEC增殖作用,而对VSMC增殖无作用。结论:tPA和VEGF165基因共表达质粒pBudCE4.1/tPA-VEGF165能在VSMC表达有生物学活性的tPA和VEGF165,为tPA和VEGF165基因转染防治移植心脏内血管狭窄奠定了基础。

tPA和VEGF165基因共表达质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的 构建携带人组织纤溶酶原激活物 (t PA)和血管内皮细胞生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因的真核表达质粒 p Bud CE4 .1/ t PA - VEGF16 5 ,并观察其在血管平滑肌细胞 (VSMC)中的表达。方法 从人心脏组织中克隆 t PA和 VEGF16 5基因。将 t PA和 VEGF16 5基因克隆至真核表达质粒 p Bud CE4 .1中 ,构建共表达质粒 p Bud-CE4 .1/ t PA - VEGF16 5。将 p Bud CE4 .1/ t PA- VEGF16 5转染 VSMC,用 RT- PCR法检测转染的 VSMC中 t PA和VEGF16 5 m RNA的表达 ,用 EL ISA法检测转染的 VSMC培养液中 t PA和 VEGF16 5蛋白质。结果 人 t PA和VEGF16 5基因的 RT- PCR产物分别为 1.9kb和 5 76 bp。经酶切鉴定证实 ,t PA和 VEGF16 5基因已克隆至真核表达质粒 p Bud CE4 .1中。以其转染 VSMC后 ,经 RT- PCR和 EL ISA检测发现 ,t PA和 VEGF16 5在 m RNA和蛋白质水平均有表达。结论 成功地构建了真核共表达质粒 p Bud CE4 .1/ t PA- VEGF16 5 ,并在 VSMC中表达 t PA和VEGF16 5。

携tPA和VEGF165基因共表达质粒生物学功能研究

目的 观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )基因在血管内皮细胞(VEC)中的表达产物对VEC增殖和纤溶的影响。方法 将含有tPA和VEGF16 5的共表达质粒pBudCE4 1/tPA VEGF16 5导入VEC中,RT PCR法和Westernblot法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测被转染VEC中的tPA和VEGF16 5表达;纤溶蛋白板法检测转基因VEC培养液的纤溶活性;用3 H胸腺嘧啶核苷掺入法( 3 H TdR)和流式细胞技术观察转基因VEC培养液对VEC和VSMC增殖的影响。结果 pBudCE4 1/tPA VEGF16 5转染VEC后,tPA和VEGF16 5分别在mRNA和蛋白质水平均有表达;转基因培养液有纤溶活性,并对VEC增殖有显著作用,而对VSMC增殖无作用。结论 pBudCE4 1/tPA VEGF16 5能在VEC表达出有生物学活性的tPA和VEGF16 5。