乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进

目的 建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型。方法 通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60 min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞。结果 形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达 95%以上。结论 该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础。

新型假型逆转录病毒载体的构建

目的 将疱疹性口炎病毒壳G糖蛋白(VSV-G)用于构建新型假型逆转录病毒载体(VSV-G/MuLV)。方法 利用三质粒系统一过性转染293T/17细胞,通过磷酸钙共沉淀法产生VSV-G/MuLV;一过性转染后的病毒上清转导包装细胞系293/GPC以产生VSV-G/MuLV生产细胞系。G418筛选未成功转导的细胞,经筛选后的293/GPG细胞生产VSV-G/MuLV;用病毒上清转染NIH3T3细胞,并采用G418克隆筛选法测定病毒滴度。结果 感染后的NIH3T3细胞在G418的筛选培养下,有大量克隆形成。经计数和计算,VSV-G/MuLV病毒上清滴度为6×106。结论 成功构建了VSV-G/MuLV;该型病毒转染效率高,可直接转导大多数细胞,在有效监控条件下,VSV-G/MuLV作为载体可用于基因治疗。