乳腺癌转移的分子基础

转移是乳腺癌的主要恶性表型 ,是一个较为复杂、多基因参与及多步骤的过程 ,它严重影响肿瘤患者治疗的疗效和预后。肿瘤转移抑制基因的发现将为乳腺癌转移的诊断和干预治疗提供重要线索 ,但迄今发现的转移抑制基因为数甚少。现将转移抑制基因的研究进展作一综述。

从石蜡包埋组织中提取高质量的基因组DNA

从石蜡包埋组织中提取基因组DNA,并采用 PCR扩增技术(聚合酶链反应)进行基因检测,已应用于临床和科研,但从石蜡组织中提取DNA,一般需10μm左右厚的切片5-10张,经二甲苯脱蜡及苯酚/氯仿抽提DNA,该方法可以获得DNA,但整个过程较长、DNA易降解而且得率低,使一些课题研究受到一定的条件限制。本实验室在已有的经验和基础上经过摸索和改良,建立了一种相对比较简便有效的石蜡包埋组织DNA提取基因组方法, 经验证获得较为满意的结果。现报道如下。

小干扰RNA对人乳头状瘤病毒6bE7基因表达的沉默作用

目的研究靶向人乳头状瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚体小干扰RNA（siRNA-HPV-66E7）对靶基因表达的沉默作用。方法建立并筛选稳定表达HPV-6bE7基因的B16和293T转染细胞株，用脂质体转染法将体外合成的siRNA-HPV-6bE7转染上述细胞株，采用实时荧光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA表达情况。结果用不同浓度的siRNA-HPV-6bE7转染细胞48h，50nmol／L浓度对B16细胞中靶基因表达的抑制作用最强（抑制率87．05％），1nmol／L抑制作用较低（9．14％）；而在293T细胞，10nmol／L的siRNA对靶基因表达的抑制效应最大（78．87％），1nmol／L仍有一定抑制作用（46．92％）。50nmol／LsiRNA-HPV-6bE7转染B16细胞后，靶基因的mRNA表达在24h内开始受抑制（32．47％），48h作用最强（74．72％），96h作用很低（8．91％）；25nmol／L和10nmol／L的siRNA转染293T细胞后，均在24h内起效（26．66％、20．31％），抑制作用至少能维持72h（65．93％、35．23％）。结论siRNA-HPV-6bE7对B16和293T细胞外源性靶基因表达均有较强的特异性沉默作用，在不同细胞株达到最大抑制效应的siRNA浓度不同，但时效曲线的变化趋势基本一致，siRNA均在24h内起效，48—72h达到高峰，抑制作用至少能维持72h。本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据。