临床生化检验中血脂测量不确定度的评定

目的通过对血脂两项甘油三酯(TG)和胆固醇(CHOL)测量不确定度(measurement uncertainty,MU)的评定,熟悉临床检验项目测量不确定度的来源及评定过程。方法遵照《测量不确定度表达指南》(GUM),根据血脂两项甘油三酯和胆固醇的检测原理,评估检测中测量不确定度的来源,确定各不确定度分量的大小,最终计算合成不确定度和扩展不确定度。结果甘油三酯和胆固醇的合成不确定度分别为6.00%、5.70%;取95%的置信区间K=2时,扩展不确定度对应为12.00%、11.40%。结论综观血脂评定的过程可以得出,测量不确定度能够更全面地反映检测的质量,测量不确定度有别于误差,其量值明显大于误差理论中的常规条件下的变异(RCV)和最适条件下的变异(OCV)值。熟悉检验项目测量的不确定度并积极开展其评定,最大限度地降低其量值的大小,有利于检验工作的持续改进。

2010—2014年杭州邵逸夫医院临床分离肺炎克雷伯菌的药敏分析

目的掌握近年来杭州邵逸夫医院临床分离的肺炎克雷伯菌的药敏情况,分析其对常用抗生素的耐药性变迁,为治疗及制定预防控制其感染的策略提供依据。方法采用梅里埃vitek2 compact全自动细菌鉴定药敏系统结合纸片扩散法进行抗菌药物的敏感试验,双纸片协同试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测,对2010—2014年间杭州邵逸夫医院从临床分离的2 269株肺炎克雷伯菌的耐药性、ESBLs的分离率、产ESBLs与非产ESBLs菌的药敏结果差异等方面进行统计分析。结果肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类的大多数药物耐药率呈逐年上升趋势;该菌对氨苄西林耐药率一直很高,对氨基糖苷类、喹诺酮类及复方新诺明等抗菌药物的耐药率5年来总体变化较小,对碳青霉烯类的耐药率上升明显,但后3年趋于稳定;同时几种β-内酰胺类抗菌药物与酶抑制剂合剂的耐药率增长明显。2010—2014年产ESBLs的肺炎克雷伯菌检出率较高,且产ESBLs菌株对大多数抗菌药物的耐药率显著高于非产ESBLs菌株(P<0.05)。结论肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的耐药性5年间呈普遍增长的趋势,产ESBLs菌株较非产ESBLs菌株其耐药性均有不同程度的增加。

核受体家族4A(NR4A)与免疫细胞及相关疾病关系的研究进展

核受体家族4A(NR4A)是核受体亚家族成员,其转录活性很大程度上由其表达水平决定。NR4A参与多种信号转导通路,如核因子κB(NF-κB)通路等,调控相关靶基因的表达,在T淋巴细胞、造血干细胞、单核细胞、巨噬细胞、调节性T细胞(Treg)等免疫细胞的分化、发育中发挥重要作用。它还参与机体自身免疫耐受及免疫自稳态的形成,可以通过调节免疫细胞极化作用控制机体炎症应答的强度。NR4A基因缺失可以导致严重的自身免疫反应。此外,NR4A受体在机体代谢、免疫功能、心血管疾病、神经系统功能、炎症性疾病、恶性肿瘤中扮演重要角色。

大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究

目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因，利用定位突变技术构建LTKA63突变体，T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b。构建LTKA63原核表达系统，通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较，所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．03％～99．61％和98．33％～99．22％。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15％左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21．9％和36．2％。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统，所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。

全血和血清标本CRP的检测

目的探讨用全血静脉血与血清静脉血检测C反应蛋白(CRP)结果的可比性以及相关性。方法选择医院住院及门诊患者150例,分别抽取EDTA-K2抗凝静脉血和分离胶促凝静脉血各1管,前一管用于检测全血中的CRP水平,后一管经3000 r/min离心5 min后,用于检测血清中的CRP水平,根据检测出的全血CRP值的水平,将所得数据分为低、中、高组。分别将各组的数据进行统计学分析。结果将所得的各组数据分别进行相关性检验,在低、中、高值组中,全血和血清标本检测CRP均具有显著的相关性及线性回归关系(P<0.01),其中r值分别为0.957,0.841,0.936。结论全血和血清标本中的CRP水平具有显著的相关性,且它们所得的回归方程符合线性回归关系;但用全血标本快速检测CRP更适合门急诊患者,便于临床的初步诊断。

标本来源对解脲脲原体检出率的影响及其耐药性分析

目的研究标本来源对解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)的检出率的影响,并分析Uu的耐药性。方法检测2005年9月-2006年9月临床1140位病人不同标本,并对1999年-2005年的解脲脲原体的药敏检测结果进行分析。结果女性拭子阳性率为64.3%,高于尿液标本阳性率43.0%,χ2=12.2,P【0.01;男性尿液阳性率为38.7%,高于男性拭子(23%),χ2=8.77,P【0.01;不同性别和标本来源的Uu耐药率差别无统计差异,P】0.05;Uu阳性对各种抗生素的耐药情况由高到低依次为环丙沙星、氧氟沙星、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、四环素、强力霉素、原始霉素、交沙霉素。喹诺酮类(氧氟沙星、环丙沙星)的耐药率从1999年开始呈逐年上升趋势,现耐药率】50%。结论不同标本的阳性率有差异;要重视支原体的药物敏感检测。

男性不育患者血液和精液中微量元素含量分析及相关性研究

目的:分析男性不育患者血液及精液中微量元素的含量,并探讨两者的相关性。方法:应用原子吸收光谱分析法对60例已育男性和60例不育男性的血液及精液中的微量元素进行测定,对比两组男性血液和精液中微量元素含量,并对不育患者血液及精液中微量元素进行相关性分析。结果:男性已育组血液和精液中锌含量明显高于男性不育组(P<0.05),而两组的铜、铁、锰、镍比较未见明显差异(P>0.05)。同时男性不育组中血液与精液中的锌含量存在直线相关关系(r=0.856,P=0.002)。结论:分析男性血液和精液中锌含量对评估男性生殖能力意义重大。

促血小板生成素和平均血小板体积在高血压合并冠心病中的应用价值

目的观察促血小板生成素(TPO)及平均血小板体积(MPV)在高血压患者中的变化,探讨其在高血压合并冠心病中的应用价值。方法检测31例无合并症的原发性高血压患者(EH组),75例高血压合并冠心病患者(合并CAH组)以及26例健康志愿者(对照组)TPO和MPV水平,并将合并冠心病者分为合并急性心肌梗死组(合并AMI组)、合并不稳定型心绞痛组(合并UAP组)和合并稳定型心绞痛组(合并SAP组)。结果合并CAH组TPO和MPV水平均显著高于EH组和对照组(P<0.001),EH组TPO和MPV水平与对照组无显著差异(P>0.05);其中,TPO和MPV水平在合并SAP组、合并UAP组及合并AMI组间有显著差异,且依次递增(P<0.01),合并AMI组TPO和MPV水平均显著高于合并SAP组和合并UAP组(P<0.00),合并UAP组TPO水平显著高于合并SAP组(P<0.01)。结论 TPO和MPV可作为评价高血压合并冠心病的严重程度的指标,TPO和MPV在预测高血压患者心肌梗死的发生中有重要价值。

多种肿瘤患者血浆循环DNA水平比较研究

目的：检测多种肿瘤患者以及正常对照的血浆循环DNA含量，探讨不同肿瘤患者循环DNA的水平差异。方法收集肺癌患者、结直肠癌患者、胃癌患者、肝癌患者以及正常对照各20份血浆标本，用微量基因组提取试剂盒抽提血浆循环DNA，采用荧光定量PCR方法对DNA进行定量。结果肿瘤组患者血浆循环DNA浓度为55．2（12．3～92．6）ng／mL，正常对照组为12．7（2．9～32．1）ng／mL，二者差异具有统计学意义（P＜0．001）；4组肿瘤患者血浆循环DNA水平差异无统计学意义（F＝0．671，P＝0．941）。结论肺癌、结直肠癌、胃癌以及肝癌4种肿瘤患者的体内血浆循环DNA水平明显高于正常人群，而4种肿瘤患者血浆循环DNA水平间无显著差异。

大肠杆菌重组LTKA63突变体和LTB黏膜免疫佐剂活性的研究

目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunit A,LTA)突变体 LTKA63及B亚单位(heat-labile entemtoxin subunit B,LTB)基因原核表达系统,确定rLTKA63和rLTB黏膜免疫佐剂活性。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA和LTB基因,采用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序。构建LTKA63和LTB原核表达载体,采用SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径,以GM1-ELISA检测rLTB结合牛GM1的能力。建立幽门螺杆菌SS1株小鼠感染模型,分别以幽门螺杆菌(Hp)重组尿素酶B亚单位(rUreB)和黏附素(rHpaA)为抗原,分别检测rLTKA63和rLTB对rUreB和rHpaA的免疫保护增强作用。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA和LTB基因条带。LTA基因定位突变后获得序列正确的LTKA63突变体。rLTKA63和rLTB表达量分别占细菌总蛋白的30％和20％左右。LTKA63作用后T_H1 和T_H2细胞较阴性对照组分别增加19．9％和42．3％,GM1-ELISA结果证实rLTB能与牛GM1结合。 33．3％(4／12)rUreB和41．7％(5／12)rHpaA免疫小鼠胃黏膜标本中分离出幽门螺杆菌,且rUreB和rHpaA特异性S-IgA检测结果均为阴性。rUreB或rHpaA加用rLTKA63或rLTB免疫后,小鼠胃黏膜标本中幽门螺杆菌分离阳性率下降为16．7％～25．0％(P>0．05),rUreB和rHpaA特异性S-Iga阳性率可达41．6％- 58．3％(P<0．01)。结论成功地构建了LTKA63和LTB原核表达系统,所表达的rLTKA63和rLTB均具有较强的黏膜免疫佐剂活性。

类风湿关节炎患者Foxp3^＋CD4^＋CD25^＋T细胞的流式细胞术检测及意义

类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫性疾病。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg），是近几年来确定的一类T细胞亚群。在维持机体免疫自稳及调控免疫应答方面起重要作用。RA的免疫学异常包括T细胞亚群失调和T细胞的异常活化。Treg在维持自身免疫耐受及阻止自身免疫反应的发生中起重要作用。目前的研究已初步认为，Foxp3特异性表达在CD4^＋CD25^＋Treg上。我们采用流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋Treg内的特异性标志Foxp3的表达，为进一步了解RA的发病机制及进行免疫治疗提供依据。

基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用

目的利用多重荧光PCR技术，建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法。方法以分枝杆菌16SrRNA作为检测靶基因，设计双启动寡核苷酸（DPO）引物和TaqMan探针，探针的5’端分别用FAM、ROX、HEX和JOE进行荧光标记，3’端标记淬灭荧光。通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增，评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度。采用建立的多重荧光PCR方法，采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本，结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较。采用，检验比较3种方法的阳性率。结果该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌，检测灵敏度均为1×10^cfu／ml。对68份痰液标本进行检测，结果显示31份检测结果阳性，阳性率45．6％，明显高于涂片染色镜检（阳性率14．7％），差异具有统计学意义（x2=15．4，P〈0．05），其中28例为结核分枝杆菌，1例为鸟分枝杆菌，2例为胞内分枝杆菌，与细菌培养鉴定方法一致。1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌。结论本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速，能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌，可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。

723例结核病住院患者结核分枝杆菌耐药性分析

目的 了解结核病住院患者结核分枝杆菌耐药情况.方法 收集2010年全年新收治结核病住院患者主要临床特征信息并进行统计分析,包括性别、年龄、糖尿病史、吸烟史及结核治疗史.回顾分析结核分枝杆菌临床分离株药敏试验结果.结果 2010年新分离分枝杆菌723株,其中结核复合群共671株,非结核分枝杆菌52株.671例结核病患者中,总耐药率43.82%、初治耐药率56.30%、复治耐药率32.07%;其中单耐药率、多耐药率和泛耐药率分别为13.41%、24.74%和5.66%.男女患者比例为2.2：1,患者年龄最小8岁,最大88岁.女性患者患耐药结核病风险低于男性,OR值为0.63（95%CI：0.42～0.94）,差异有统计意义（P〈0.05）.结核病治疗史和吸烟史是患者发生耐药结核的危险因素,OR值分别为1.62（95%CI：1.21～2.09）和2.72（95%CI：2.35～3.05）,差异有统计学意义（P均〈0.05）.非结核分枝杆菌株检出量及其检出率逐年上升,检出率由2006年的4.61%上升到2010年的7.19%.结论 应采取有效措施控制结核分枝杆菌感染及其耐药情况的进一步恶化.

重症监护病房耐碳青霉烯鲍氏不动杆菌耐药性及基因同源性分析

目的研究绍兴市中心医院ICU住院患者临床分离的耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌的耐药性和基因分型。方法收集2016年绍兴市中心医院ICU住院患者临床分离的耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌60株。微量稀释法进行常规药敏试验。采用多重PCR技术检测菌株携带的耐药基因,PFGE分型技术对鲍氏不动杆菌进行基因同源性分析。结果抗菌药物敏感性试验显示所有菌株具有多药耐药性,对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟耐药率>90%,对阿米卡星的敏感率较高为62.4%,其次为头孢哌酮/舒巴坦和左氧氟沙星;PCR检出60株鲍氏不动杆菌均为OXA-23型和OXA-51型。PFGE分型均为同一型别。结论绍兴市中心医院ICU分离的耐碳青霉烯鲍氏不动杆菌的耐药基因为OXA-23型和OXA-51型,为同一来源,考虑为医院感染所致,因此应采取有效措施来控制该耐药株的传播。