RNA干扰的研究方法

RNA干扰(RNA i)技术是把与内源mRNA编码区同源的小片段外源双链RNA(doublestranded RNA)导入细胞中,导致特定基因表达沉默的一种技术。本文简要描述了RNA i的起源、原理、在动物方面的应用领域;主要叙述了RNA i技术的机制以及siRNA试验步骤,包括siRNA的设计、合成、检测方法等;比较了各种方法的特点。

人纤维蛋白原α、β、γ基因的克隆和表达研究

纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)是凝血因子I,在体内经凝血酶(thrombin)作用下转变为纤维蛋白,发挥其凝血和止血功能。本研究通过反转录的方法,从杭州人肝脏中成功克隆到人纤维蛋白原α、β、γ基因,并将其定向插入原核表达载体中,人纤维蛋白原α、β、γ基因经成功诱导获得表达,进一步纯化获得人纤维蛋白原α、β、γ蛋白。序列经比对,与Genbank上公布的序列同源性达97%～99%,这项研究为我国汉族人群纤维蛋白原基因核苷酸多态性和单倍型研究发挥一定作用,并且对纤维蛋白封闭剂的开发,提供了重要的产业化实验依据和技术基础。

猪瘟合并猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)感染

2004年初以来,杭州地区的几个规模化猪场陆续发生仔猪腹泻、保育猪呼吸困难的疾病,剖检见肺部呈橡皮样,全身淋巴结水肿,部分猪脾脏边缘梗死等,发病率、死亡率较高。设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的特异性引物,进行RT-PCR或PCR检测;运用伪狂犬病(PR)鉴别试剂盒检测PR,运用免疫荧光法检测猪瘟(HC),并进行了细菌分离培养,通过全面检查认为,这几个猪场发生了猪瘟合并猪PRRSV、PCV2感染。

对杭州地区4种猪病的血清学调查分析

通过对于杭州地区规模化猪场PRRS、PCV2、PR、SF等4种疾病抗体的血清学检测,发现PRRS、PCV2、PR感染率依次降低,PR的野毒感染率31.2%,总抗体阳性率为68%,猪瘟的免疫保护率为74%;下半年与上半年相比,PRRS稍有升高,SF免疫合格率有所下降,PR免疫转阳率下降,感染率稍有升高,表明防疫形势不容乐观。PRRS已经有大部分场次(93%)发生,75%的场次存在PCV2感染,7%的场次感染PR,6.4%的场次猪瘟免疫抗体不合格。建议继续做好PR、SF的免疫预防,完善PRRS疫苗,加强PCV2疫苗的研制。

PCV2的PCR鉴定及其相关序列分析

设计合成了2条猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)PCR引物,对杭州地区发现的PCV2可疑病例进行PCR鉴定,并优化了PCR反应条件,进行了敏感性、特异性试验,对其扩增序列进行测序比较。结果显示,用所设计的2条引物成功扩增了PCV2基因片段,PCV2基因片段序列与参考序列相似性达到91.2%。说明所设计的引物用来检测临床病理中PCV2是准确可行的。对杭州地区的56份病料的检测结果:感染率为57%,表明杭州地区的感染已经比较严重。