成人急性淋巴细胞白血病p15和p73基因启动子异常甲基化及临床意义

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者p15和p73基因启动子Cp G岛的甲基化状况及其临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)的方法检测43例ALL患者骨髓p15和p73基因启动子甲基化频率,同时以40例缺铁性贫血患者作为对照。卡方检验分析其甲基化程度与ALL临床参数之间的关系。结果:ALL中p15和p73基因甲基化频率分别为41.9%(18/43)和25.6%(11/43),两基因同时甲基化频率为18.6%(8/43)。p15和p73基因同时甲基化的B-ALL患者比未甲基化者有较高的初诊外周血白细胞总数(χ2=6.431,P=0.011)。单一p15或p73基因甲基化与完全缓解(CR)率无相关性(均P>0.05),但两基因同时甲基化的患者CR率明显低于未甲基化者(25.0%vs 86.4%,χ2=10.52,P=0.001)。p15和p73基因甲基化在不同年龄、不同细胞谱系、标危和高危组间其差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:p15和p73基因甲基化是成人ALL的常见事件,p15和p73甲基化与初诊白细胞总数、治疗反应等临床预后指标相关,基因异常甲基化可作为ALL预后的分子标志物。

HBV感染者pre-s1、HBV-DNA检测及其临床意义

[目的]探讨检测HBV感染者血清前S1蛋白、HBV-DNA临床应用价值。[方法]采用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测HBV-DNA,前S1蛋白及HBV-M采用ELISA法。[结果]336例HBsAg阳性血清中,检出HBV-DNA171例(50.9%),Pre-S1阳性166例(49.4%)。在HBeAg抗原阳性血清中检出率最高,99例中HBV-DNA阳性97例(97.9%),Pre-S1阳性为93例(93.9%),在237例e抗原阴性中,HBV-DNA阳性74例(占31.2%),前S1蛋白阳性73例(占30.8%)。[结论]传统的依靠e抗原来辨认是否具有传染性是不够的,前S1蛋白及HBV-DNA是比e抗原更敏感的HBV标志物,二者检测对了解乙肝感染者的病情、监测病毒感染状况。

头孢类曲松钠对部分生化检验结果的干扰

目的:研究头孢类曲松钠对部分生化项目的体外分析干扰。方法:将头孢类曲松钠用生理盐水稀释成不同浓度分别加入到正常混合血清中,以正常混合血清为对照组,在自动生化分析仪上分别测定各组的ALT、AST、CK、LDH、P、AM值,将结果进行统计学处理。结果:头孢类曲松钠对对CK、LDH、P的测定有正向干扰,对ALT、AST、AM测定有负相干扰。结论:头孢类曲松钠干扰ALT、AST、CK、LDH、P、AM的测定,希望引起大家对药物干扰化学测定的重视。

急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血小板膜糖蛋白表达的影响

目的 评价急性高容量血液稀释(AHH)对全髋关节置换术患者血小板激活程度和血小板凝血功能的影响。方法 ASAⅠ～Ⅱ级骨科择期全髋关节置换术患者20例,随机分为羟乙基淀粉(HES)组和乳酸钠林格溶液(LR)组,每组10例。于静脉麻醉诱导后以25ml/kg的剂量和30ml·kg^(-1)·h^(-1)的速率分别输入HES和LR。采用流式细胞术定量测定诱导前(T_1)、AHH前(T_2)、输注开始后15min(T_3)、30min(T_4)和45min(T_5)血小板膜糖蛋白(CD62P和CD63)的表达量。结果 HES组T_3、T_4和T_5的CD62P表达水平较T_1有显著性增高(P<0.05或0.01),较T_2有非常显著性增高(P<0.01);两组T_2的CD62P表达水平较T_1显著性降低(P<0.05)。两组各时点的CD63表达水平均无明显变化。结论 HES术前、术中行AHH能明显增强血小板表面CD62P的表达,促进血小板活化。

支气管肺泡灌洗液培养在肺部感染监测中的应用研究

目的:探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)培养在肺部感染中的应用价值。方法:对152例肺部感染患者BALF培养结果进行病原菌种类及药敏分析。结果:培养阳性标本78例,阳性率51.3%,共分离出病原菌94株,其中革兰阳性球菌占11.7%,以金黄色葡萄球菌为主;革兰阴性杆菌占64.9%,以鲍曼不动杆菌为主,其次为铜绿假单胞菌;真菌占23.4%,以白色念珠菌为主。阳性球菌对万古霉素、替考拉丁最敏感;阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南耐药率低;念珠菌对两性霉素B的敏感率高。结论:肺部感染患者行支气管肺泡灌洗液培养,对明确病原、指导抗生素的合理应用有重要临床意义。

抑癌基因p15反义RNA高表达是急性髓系白血病细胞中的频发事件

目的探讨急性髓系白血病（acutemyeloidleukemia，AML）患者中抑癌基因p15反义RNA（p15AS）的表达及其临床意义。方法应用单链特异引物逆转录的实时定量PCR方法验证AML细胞系存在p15AS，分析43例AML患者和21例良性血液病患者（对照组）骨髓p15AS和p15mRNA的表达水平，并分析p15AS的表达量与AML临床特征的关系。应用流式细胞术检测AML患者和对照组骨髓中p15蛋白的表达。结果急性髓系白血病细胞系中存在p15AS高表达。与对照组相比，AML患者p15AS表达增加而p15mRNA表达下调（t=41．45，P=0．000；t=-24．76，P=0．000）。AML组骨髓细胞中p15蛋白的表达[13．2％（10．2％～18．50％）]较对照组E84．5％（80．25％～86．8％）]显著减少，差异有统计学意义（Z=-6．22，P=0．000）。P15AS表达水平与AML患者的性别、年龄、FAB分型、初诊白细胞计数、血小板数量、骨髓增生程度和细胞遗传学预后分组无相关性（均P〉0．05）。结论p15AS高表达可能是AML的常见事件，并可能在抑癌基因p15表观遗传沉默中具有重要作用。

膀胱移行细胞癌尿沉淀细胞INK4a和ARF基因启动子异常甲基化及临床意义

目的:探讨膀胱癌患者尿沉淀细胞中INK4a/ARF基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测35例膀胱癌患者尿沉淀细胞INK4a/ARF基因启动子甲基化异常频率,同时以30例非肿瘤性泌尿系疾病患者作为对照。卡方检验(χ2)分析其甲基化程度与膀胱癌临床病理参数之间的关系。结果:膀胱癌尿沉淀细胞INK4a/ARF基因甲基化阳性率分别为25.7%(9/35)和42.9%(15/35),两个基因联合时甲基化阳性率为48.6%(17/35)。浸润性(≥pT2)和表浅性(≤pT1)膀胱癌尿沉淀细胞INK4A/ARF基因甲基化阳性率之间的差异有统计学意义(P<0.01)。INK4a/ARF基因甲基化在不同病理分级、膀胱癌初发与复发和不同性别间其差异无统计学意义(P>0.05)。INK4a与ARF基因启动子甲基化呈正相关关系(r=0.415,P<0.05)。结论:INK4a/ARF基因甲基化不仅是膀胱癌发生的早期事件,而且与膀胱癌的浸润性发展相关。尿沉淀细胞INK4a/ARF基因启动子异常甲基化状态可作为非侵入性诊断膀胱癌并且判断其预后的分子标志物。

应用Logistic回归和ROC曲线评价肿瘤标志物CEA、CA15.3和CYFRA21-1对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的:应用Logistic回归和ROC曲线探讨CEA、CA15.3和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)对良恶性胸腔积液的诊断价值。方法:对明确诊断的胸腔积液患者93例(良性51例,恶性42例)同时采血和抽取胸液,采用化学发光法测定CEA、CA15.3和CYFRA21-1的浓度,计算特异性90%时的曲线下面积(AUC)、敏感性和阴性预测值。结果:良恶性胸水患者胸液CEA、CA15.3和CYFRA21-1的浓度两者之间差别有统计学意义(P<0.01)。胸液/血清比值的诊断效率并不优于胸液中单个肿瘤标志物浓度测定。单项检测中,CEA敏感性最高(59.3%),CYFRA21-1的曲线下面积最大(0.91)。CEA、CYFRA21-1和CA15.3联合检测时,敏感性增高到85.1%,阴性预测值增加到84.0%,AUC增加到0.91。结论:基于Logistic回归的ROC曲线分析简单有效,适用于多指标联合诊断试验的分析评价。在良恶性胸腔积液的鉴别诊断中,CEA、CYFRA21-1和CA15.3的组合有较好的诊断价值。

循环酶法测定血浆同型半胱氨酸的方法学评价

目的:循环酶法测定血浆同型半胱氨酸的方法学评价。方法:用循环酶法测定同型半胱氨酸,依NCCLS EP9-A2文件要求作精密度、线性关系、回收试验、干扰试验以及与高效液相色谱法比较等系列试验。结果:该法在2.1μmol/L～52.6μmol/L范围内线性良好,相关方程为y=0.997x+0.8262;批内平均变异系数为2.46%、批间平均变异系数为4.26%;平均回收率为98.7%;TG(8.0 mmol/L)、氨基甲酰血红蛋白(3 g/L)、抗坏血酸(1.2 mmol/L)对该法无干扰;与高效液相色谱法比较,回归方程为y=0.9849x+0.1437,r=0.9806,两法具有高度相关性(P<0.01)。结论:该法干扰因素少、重复性好、线性范围较宽并与HPLC法有很好的相关性,操作简单,完全符合实验室常规检测的需要。

直接化学发光法检测抗环瓜氨酸肽抗体的应用评估

目的:评估直接化学发光免疫分析法(CLIA)检测血清抗环瓜氨酸肽(抗CCP)抗体的临床应用。方法:用直接CLIA、酶联免疫吸附试验(ELISA)同时检测RA患者56例、非RA其他疾病患者69例和正常对照35例血清中的抗CCP抗体。结果:直接CLIA法检测抗CCP抗体的批内变异系数为2.5%～3.8%、批间变异系数为2.8%～5.2%,明显低于ELISA法(5.6%～6.9%,6.7%～8.2%)。直接CLIA法检测抗CCP抗体的平均回收率为99.5%。对RA诊断的敏感性为73.2%,特异性为96.2%,与ELISA法检测结果总体符合率达96.9%。结论:采用直接CLIA法检测抗CCP抗体具有较高的敏感性和特异性,可满足临床需要。

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的:了解铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因存在情况,为耐药性监测提供依据。方法:采用VITEK-32配套GNS-448及K-B法测定铜绿假单胞菌对抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析氨基糖苷类修饰酶基因类型。结果:20株多重耐药铜绿假单胞菌对亚胺培南、美洛培南全部耐药,哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟及头孢他啶的耐药率分别为90.0%、100%和85%,氨基糖苷类抗生素的耐药率为阿米卡星85.0%、庆大霉素100%,对其他抗菌药物的耐药率均在85.0%以上。20株铜绿假单胞菌中检出5株aac(6)′-Ⅰb、1株aac(6)′-Ⅱ、15株ant(3)′-Ⅰ、8株ant(2)′-Ⅰ,阳性率分别为25%、5%、75.0%、40%。其他基因型阴性。结论:本院重症监护病房临床分离的铜绿假单胞菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高。

男性沙眼衣原体和支原体等泌尿生殖系统感染不育患者精子DNA断裂情况检查及意义

目的:检测沙眼衣原体和支原体等泌尿生殖系统感染的男性不育患者精液标本中精子DNA断裂情况,并分析抗生素治疗对其影响。方法:使用精子染色质分散试验分别检测143位沙眼衣原体和支原体等泌尿生殖系统感染男性不育患者和50位有生育能力的健康对照者的精子DNA断裂情况,并对其经典的精液常规参数(精子浓度、形态学、活力和活率)进行分析,同时,将部分患者分为抗生素治疗组和非治疗组分析抗生素治疗对精液DNA断裂情况和精液常规参数的影响,并结合临床结果分析检测意义。结果:沙眼衣原体和支原体等泌尿生殖系统感染对精子DNA完整性的影响明显高于其对经典精液常规参数的影响。感染可导致男性生育能力的下降,抗生素治疗可提高妊娠成功率,并可降低感染诱导的精子DNA断裂水平。结论:与精液常规参数相比,精子DNA断裂水平检测可更好地评估男性沙眼衣原体和支原体等泌尿生殖系统感染不育患者的生育能力。同时,DNA完整性可作为一个有用的参数监控治疗的有效性。