高效亲和色谱法检测细胞培养上清中的抗体融合蛋白质

目的建立高效亲和色谱检测抗体融合蛋白质的方法，用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。方法正压匀浆法装填rProtein A Sepharose，用不同pH值缓冲液分步洗脱。结果在25～1000μg／mL浓度范围内，重组人肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（TNFR—Fc）浓度和峰面积显著相关，r=0.9996；回收率范围为91％～99％，对表达TNFR—Fc的CHO工程细胞的不同培养阶段的3份上清分别进行3次重复测定，RSD在2％以内。结论该方法适用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。

石墨炉原子吸收光谱法测定泛昔洛韦中痕量钯

采用石墨炉原于吸收光谱法测定泛昔洛韦中痕量钯。用1%盐酸处理样品,氘灯背景校正。3种不同浓度的加样同收率分别为101．3%、105．3%、109．5%,RSD分别为4．3%、0．8%、1．5%。

表达rhTNFR-Fc的CHO细胞的氨基酸代谢特征及氨基酸流加培养工艺研究

为提高表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)的CHO工程细胞的培养密度和目的蛋白表达,研究了葡萄糖和谷氨酰胺流加-批式培养工艺的细胞氨基酸代谢特征及游离氨基酸和大豆蛋白水解物的补加策略。通过补加葡萄糖和谷氨酰胺浓缩液分别维持其浓度为10 mmol/L和2 mmol/L左右,在不同阶段定期补加特定的氨基酸浓缩液或大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗,检测细胞培养上清中rhTNFR-Fc的表达。谷氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、脯氨酸等4种非必需氨基酸快速消耗,是CHO工程细胞增殖和目的蛋白表达的限制性底物。以游离氨基酸、游离氨基酸合并大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗可分别使细胞生长密度提高50%、100%,目的蛋白表达增加60%、125%,培养时程延长44%、66%,同时葡萄糖比消耗率、乳酸比生成率降低,谷氨酰胺的利用效率提高。

链霉菌工业菌种HS007的基因组标记

通过小片段基因组文库的构建获得工业生产菌HS007的若干基因组片段,并以大肠杆菌—链霉菌穿梭质粒pHJL400为载体,构建了5个插入了特异性标记序列及抗性筛选标记的重组质粒pHJL02AFOH,pHJL07AFOH,pHJL08AFOH,pHJL10AFOH和pHJL12AFOH。利用这些质粒转化工业生产菌株HS007,获得具有特异性标记序列和相应抗性的标记菌株02-72,07-44,08-02,10-81和12-58,其中02-72和12-58的生产能力不受插入片段的影响。利用重组质粒pSP02AFOH上抗性标记两端两个FRT序列的分子内重组去除抗性标记,并以大肠杆菌—链霉菌穿梭质粒pGH112替换该质粒的载体部分,得到重组质粒pGH02FH。以pGH02FH转化标记菌株02-72,获得具有特异性标记序列而没有相应抗性的菌株02-72-36。发酵结果表明,标记片段的插入不影响菌株02-72-36的生产能力。本方法建立了链霉菌工业菌种基因组标记的技术平台。

针对药物盐酸度洛西汀的合成工艺改进探析

本文针对药物盐酸度洛西汀的合成工艺。