包埋青蛤免疫活性肽脂质体的制备及性质表征

为进一步提高青蛤免疫活性肽(Cyclina sinensis immunoceactive peptides,SCSP)的免疫调节功能,寻求更好的多肽递送方法,采用脂质体技术包埋SCSP,优化其制备工艺,并探究其理化性质和生物活性。比较了乙醇注入法、薄膜水合法、逆相蒸发法对包埋SCSP脂质体(SCS P-LIP)的平均粒径和包封率的影响;以平均粒径、包封率为评价指标,蛋黄卵磷脂质量、胆固醇与蛋黄卵磷脂质量比、SCSP与蛋黄卵磷脂质量比为变量,优化SCS P-LIP的制备工艺;考察了SCS P-LIP在4℃和25℃条件下贮藏7 d的稳定性;探究了SCS P-LIP对RAW 264.7细胞的免疫调节和细胞摄取效果。研究结果表明,薄膜水合法较适合SCS P-LIP的制备,优化制备条件为蛋黄卵磷脂质量40 mg、胆固醇与蛋黄卵磷脂质量比1∶4、SCSP与蛋黄卵磷脂质量比1∶4、探头超声12 min,在此条件下,SCS P-LIP的平均粒径为(107.500±2.301)nm,多分散指数为0.175±0.023,Zeta电位为(-29.800±0.577)mV,包封率为69.95%±1.24%。SCS P-LIP体系澄清透明,无特殊气味;透射电镜结果显示,SCS P-LIP呈球状,分布均匀;红外光谱结果显示,SCSP被包裹在脂质体极性部位;贮藏稳定性结果表明,SCS P-LIP更适合于4℃条件下避光保存;细胞实验结果表明,SCS P-LIP具有促RAW 264.7细胞增殖分化作用,对巨噬细胞吞噬功能的提升比SCSP更强,且具有较好的细胞摄取效果。研究结果表明,SCS P-LIP的制备工艺简单、性质稳定,有望为进一步开发具有免疫调节活性的多肽类功能食品提供技术参考。

厚壳贻贝乙醇脱氢酶激活肽的纯化、鉴定及其与ADH的相互作用

【目的】开发厚壳贻贝(Mytilus coruscus)乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)激活肽,并探究其与ADH作用的分子机制。【方法】以体外ADH激活率为指标,通过凝胶柱层析色谱、反向液相色谱法(RP-LC)分离纯化分子质量小于1 ku的厚壳贻贝活性肽(Mytilus coruscus peptides,MCP),利用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)对高ADH激活性的肽组分进行鉴定,并通过分子对接技术探究其与ADH间的相互作用。【结果】MCP经色谱分离得到活性组分Y-I-I,鉴定并筛选出其中3条与ADH对接结合能较低的活性肽序列PPLYE、PPLYQ和APPLYQ,其中活性肽PPLYE体外ADH激活作用最佳,在PPLYE质量浓度为2.0 mg/mL时,ADH激活率达到77.35%,且呈剂量依赖性。分子对接结果显示,PPLYE可结合至ADH活性中心附近的疏水空腔内,通过疏水作用和氢键与受体蛋白ADH形成稳定复合物,其结合能最低,为-35.58 kJ/mol。【结论】PPLYE作为最佳的ADH激活肽,可通过疏水作用和氢键与ADH相互作用形成稳定的复合物来提高ADH活性,本研究为厚壳贻贝资源的开发利用及ADH激活肽的开发提供依据。

[鱼安][鱼康]鱼皮酶溶胶原蛋白肽对小鼠非酒精性脂肪肝的影响及作用机制

为探究[鱼安][鱼康]鱼皮酶溶胶原蛋白肽(pepsin-solubilized collagen peptides from Lophius litulo skin, PSCP)对高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝的影响及其机制,48只C57BL/6小鼠喂食高脂饲料4周诱导非酒精性脂肪肝模型,采用二甲双胍,低、中、高剂量PSCP处理模型小鼠6周,分别测定小鼠血清生理生化指标、肝脏氧化应激水平、肝脏组织病理学变化和蛋白的表达水平。实验结果表明:与模型组相比,二甲双胍和高剂量PSCP显著降低了小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein, LDL-C)水平及谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和谷丙转氨酶(alanime aminotransferase, ALT)活力,显著提高了高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;二甲双胍及中、高剂量PSCP显著升高了小鼠肝脏中谷胱甘肽(glutathione, GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)含量,显著降低肝脏丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平。苏木精-伊红染色和透射电镜结果显示,二甲双胍组和PSCP组小鼠肝脏结构明显好转。蛋白免疫印迹结果显示,与正常组相比,模型组小鼠肝脏中AMPKα、p-AMPKα和IκBα的蛋白表达量显著降低,SREBP-1和p65、p50、IKKα的蛋白表达量显著升高;而给予二甲双胍和PSCP后AMPKα、p-AMPKα和IκBα的蛋白表达量增加,SREBP-1和p65、p50、IKKα的蛋白表达量降低。研究结果表明,PSCP可显著改善非酒精性脂肪肝小鼠的生化指标,恢复肝组织结构,其改善机制可能与AMPK/NF-κB信号通路转导相关。

厚壳贻贝活性肽对酒精诱导小鼠肝损伤及肠道菌群的作用

【目的】探究厚壳贻贝活性肽(Mytilus coruscus peptides,MCP)对酒精诱导小鼠肝损伤的保护及肠道菌群的调节作用。【方法】将45只C57BL/6小鼠平均分成5组:正常组、模型组(无水乙醇EtOH)、阳性组(EtOH+50 mg/kg水飞蓟素)、MCP低剂量组(EtOH+200 mg/kg MCP)和高剂量组(EtOH+400 mg/kg MCP)。Lieber DeCarli液体饲料喂养C57BL/6小鼠3周建立酒精性肝损伤模型,检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝脏中抗氧化酶活性和抗炎因子水平,通过H&E染色和油红O染色观察肝脏组织形态变化和脂肪堆积情况,采用16s rRNA测序检测小鼠肠道菌群多样性变化。【结果】MCP显著提高肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,显著降低促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)含量,同时降低了肝脏中甘油三酯(TG)和丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);减少肝脏脂肪空泡,增加结肠杯状细胞,恢复了肝细胞和结肠细胞正常结构。改善了由于酒精引起的肠道中操作分类单元(OTU)总数增加的情况,并且降低了革兰阴性菌的比例。【结论】MCP对小鼠酒精性肝损伤具有明显的保护作用,同时能调节小鼠肠道菌群的组成。

鮟鱇鱼子低分子质量肽的制备及其抗氧化活性评价

以鮟鱇鱼(Lophius litulon)子为原料,利用复合酶解法制备低分子质量肽并对其抗氧化活性进行评价。利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对鮟鱇鱼子进行酶解,超滤后得到分子质量小于1 kDa的鮟鱇鱼子肽(MRP),并对其在体外的自由基(DPPH、ABTS及·OH)清除能力进行测定。此外,通过测定细胞活性、MDA、SOD、MDA和GSH-Px水平,研究其对H_(2)O_(2)诱导的RAW 264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,MRP对DPPH、ABTS和·OH具有良好的清除作用,且能保护H2O2对RAW 264.7细胞的氧化损伤,可提高细胞活性及细胞中CAT、SOD、GSH-Px的活力,下调MDA的含量水平。结果表明,MRP具有较好的抗氧化能力,可作为添加剂用于抗氧化相关产品研发。