伪狂犬病病毒gE/gI基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

为获得具有生物活性的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gE/gI蛋白,建立PRV抗体快速检测方法。将含有PRV gE、gI基因的质粒pFastBacdual-GP67-gE/gI转化至宿主菌,经位点特异性重组和蓝白斑筛选后获得重组杆粒rBacmid-gE/gI,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。采用悬浮的Sf9细胞进行发酵并纯化产物,SDS-PAGE和Western blot分析镍柱纯化后的重组蛋白。结果显示,重组杆粒在4800 bp处克隆出预期大小的条带,表示重组杆粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot表明,在50 ku和65 ku处出现预期大小的条带,能与PRV标准阳性血清特异性反应,不与PRV gE/gI缺失疫苗免疫血清反应。结果表明gE/gI重组蛋白具有良好的反应原性,为PRV抗体快速检测及区分PRV野毒感染和疫苗免疫奠定了基础。

动物疫苗的使用与管理探讨

在动物养殖过程中及时接种相应的疫苗能够有效降低疫病发生几率。但如果动物疫苗保存、使用以及管理不规范,则会影响疫苗质量,降低免疫效果,因此做好动物疫苗的保存、使用以及管理工作具有重要的现实意义。1动物疫苗使用应注意的问题在使用动物疫苗的过程中除严格按照相关规定要求进行外,应注意以下问题:1.1选择合适的运输形式,不同的疫苗需采用不同的运输方式,冻干活疫苗必须进行冷藏运输,路途远、数量较多时可以选择使用冷藏车,短距离、数量较少时可以选择使用保温箱,并加入适量冰块,确保疫苗的活性不受影响。灭活疫苗在运输过程中应将温度控制在2~8℃。

Ⅳ型禽腺病毒Fiber-2(knob)蛋白的表达及免疫效力评价

表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2(knob)蛋白,以制备Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价。将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2(knob)。将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测纯化后的目的蛋白。将蛋白抗原与佐剂1∶3乳化,分组免疫100,50,25,0 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,攻毒剂量为10^(4.5) ELD_(50)/只,免疫后24 d攻毒,比较不同免疫剂量攻毒保护效果。又制备4批蛋白含量为24 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,比较不同批次间免疫效力差异。结果显示,成功构建pET28a-Fiber-2(knob)重组质粒,纯化后的蛋白纯度达到90%,质量浓度为3269 mg/L。当攻毒剂量为10^(4.5) ELD_(50)时,FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗攻毒保护率可达到100%(免疫蛋白抗原量为25~100μg/只),当攻毒剂量为5×10^(3.9) ELD_(50)时,最小免疫蛋白抗原含量为14.4μg/只时也可产生100%保护。不同批次间FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗均能刺激机体产生抗体,有效保护SPF鸡抵御FAdV强毒攻击,具有良好的免疫保护效力。

金黄色葡萄球菌凝集因子B的原核表达及其抗血清调理吞噬活性

金黄色葡萄球菌是导致医院院内感染的主要病原。由于金黄色葡萄球菌极易产生抗药性,因此疫苗免疫是预防该细菌感染的主要手段。作为一个粘附分子,凝集因子B(ClfB)的作用是使金黄色葡萄球菌能够在宿主黏膜定植,是预防该菌感染的一个重要的靶分子。本研究成功地在大肠杆菌中表达了可溶的ClfB N1-N3结构域蛋白(Truncated-ClfB),并且利用亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤技术对其进行了纯化。用纯化后的Truncated-ClfB免疫新西兰大白兔,收集三免后的血清检测其抗体水平并且利用流式细胞术检测抗血清的调理吞噬活性。检测结果表明,三免后的兔源Truncated-ClfB抗血清抗体效价高达1:640 000;与免疫前兔源血清相比,兔源Truncated-ClfB抗血清能够显著增加多形核白细胞(Polymorphonuclear leukocytes,PMN)对金黄色葡萄球菌的吞噬效率(P<0.01)。结果表明Truncated-Clf B有希望作为金黄色葡萄球菌疫苗的候选抗原。