卡托普利上调缺血性脑卒中患者血小板一氧化氮合酶的实验和临床研究

目的 研究卡托普利对缺血性脑卒中患者血小板一氧化氮合酶 (NOS)的上调及临床应用。方法 测定急性缺血性脑卒中患者及健康体检者的血小板NOS及在体外加氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)、卡托普利后血小板NOS的活性 ;检测患者服卡托普利前、服后 1个月及 3个月的血浆oxLDL、NOS、一氧化氮 (NO) ,血小板NOS、NO ,同时检查神经功能。结果 (1)卒中组和对照组血小板加oxLDL后 ,NOS值均明显下降 (P <0 .0 1) ,卒中组下降更明显 ;(2 )两组血小板同时加卡托普利、oxLDL后 ,NOS值均明显升高 (P <0 .0 1) ,卒中组升高更明显 ;(3)两组血小板单纯加卡托普利后 ,其NOS值均明显升高 (P <0 .0 1) ,同样亦是卒中组升高更明显 ;(4 ) 4 0例缺血性脑卒中患者服用卡托普利后血浆oxLDL明显下降 ,血小板NOS、NO ,血浆NOS、NO明显增高 ,神经功能明显改善。结论 卡托普利有直接上调血小板NOS的作用 ,卡托普利通过提高血小板NOS活性的作用 ,可以改善内皮功能 。

浙江省湖州市手足口病临床特征和肠道病毒EV71与CoxA16型的分子特征分析

手足口病是由人肠道病毒引起的儿童常见的急性肠道传染病.大多数患者临床症状较轻,个别重症患者可并发心肌炎、无菌性脑膜脑炎等,甚至导致死亡[1-2].肠道病毒71型(ev71)和柯萨奇病毒a16型(coxal6)是引起该病最常见的病原体[3-4].

呼出气冷凝液CEA、P53蛋白、miRNA21检测对孤立性肺结节早期肺癌的诊断价值及临床相关性研究

目的探讨呼出气冷凝液(exhaled breath condensate,EBC)癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、P53蛋白、miRNA21在肺癌组患者中的诊断价值及临床相关性。方法随机选择2014年12月～2017年6月入住我院呼吸科的胸外科孤立性肺结节需手术切除患者51例,根据术后病理将孤立性肺结节患者分为肺癌组35例、非肺癌组16例,同期体检者12例为对照组。所有患者均采集呼出气冷凝液、空腹静脉血。采用全自动化学发光免疫分析仪测定CEA水平、酶联免疫吸附试验测定P53蛋白水平、实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR法)测定miRNA21水平,分析呼出气冷凝液CEA、P53蛋白、miRNA21对孤立性肺结节早期肺癌的诊断价值。结果肺癌组EBC的CEA、P53蛋白、miRNA21表达水平均高于非肺癌组与对照组(P<0.05);肺癌组患者EBC中CEA、P53蛋白、miRNA21表达水平与性别、年龄、TNM、病理类型差异均无统计学意义(P>0.05);联合检测EBC的CEA、P53蛋白、miRNA21对孤立性肺结节早期肺癌的诊断敏感性、特异性均优于单项检测(AUC 0,931 P<0.05)。结论联合检测呼出气冷凝液CEA、P53蛋白、miRNA21有助于孤立性肺结节早期肺癌的筛查,提高诊断的敏感性和特异性。

慢性肝病患者血清基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-2组织抑制因子与肝纤维化指标的关系

目的观察慢性乙型病毒性肝炎(乙肝)和乙肝后肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-2组织抑制因子(TIMP-2)和肝纤维化指标(HA、LN、ⅣC)及其相关性。方法检测36例慢性乙肝、36例乙肝后肝硬化和20例对照组的血清MMP-2及TIMP-2,同时检测上述肝病患者血清肝纤维化指标。分析MMP-2、TIMP-2和肝纤维化指标之间的相关性。结果慢性乙肝重度、肝硬化A级、B级、C级患者血清MMP-2、TIMP-2分别较对照组、慢性乙肝轻度、中度明显升高(P<0.001);而慢性乙肝轻度、中度患者MMP-2、TIMP-2与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。慢性乙肝轻、中度之间MMP-2、TIMP-2比较无明显差异(P>0.05)。血清MMP-2、TIMP-2水平分别与HA、LN、ⅣC有良好相关性;MMP-2与后三者的r值分别为0.928、0.909和0.826;TIMP-2与后三者的r值分别为0.688、0.556和0.644,P值均<0.001。结论TIMP-2、MMP-2在慢性肝病患者血清中明显升高,并且分别与肝纤维化血清学指标(HA、LN、ⅣC)有良好的相关性。MMP-2和TIMP-2可作为评价纤维化的指标之一。

浙江省湖州地区人感染H7N9禽流感七例临床分析

继严重急性呼吸综合征(SARS)、H5N1禽流感、甲型H1N1流感之后,2013年3月在中国局部地区又发生了人感染H7N9禽流感疫情.H7N9病毒是全球首次发现的新亚型流感病毒,病例分布于北京、上海、江苏、浙江、安徽、山东、河南、台湾和福建等地.浙江省湖州市中心医院作为市级定点医院,自2013年4月3日至5月7日共收治7例人感染H7N9禽流感患者,现对这些患者的临床资料进行分析.

下调gankyrin通过调节β-catenin/cyclin D1信号通路抑制胃癌细胞增殖

背景:Gankyrin是一个含锚蛋白重复序列的原癌蛋白,其高表达参与了多种恶性肿瘤的发生、发展进程。目的:探讨下调gankyrin表达对胃癌细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法:以携带gankyrin siRNA的慢病毒载体转染人胃癌细胞株MKN28,分别采用MTT实验、流式细胞术和蛋白质印迹法检测下调gankyrin表达对MKN28细胞增殖、细胞周期分布及其β-catenin/cyclin D1信号通路的影响。结果:慢病毒载体的转染效率在90%以上,转染gankyrin siRNA后,MKN28细胞gankyrin蛋白表达显著受抑(P<0.01)。与未转染慢病毒和转染对照病毒的细胞相比,转染gankyrin siRNA的MKN28细胞体外生长于第3天起显著受抑,细胞周期G1期细胞比率增高,S期细胞比率降低,细胞中的β-catenin和cyclin D1表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:下调胃癌细胞中的gankyrin表达可通过抑制β-catenin/cyclin D1信号通路引起细胞周期G1期阻滞和细胞增殖抑制,gankyrin有望成为胃癌靶向治疗的新靶点。

NF-κB、caspase-8在胃癌中的表达和临床意义

背景:研究显示活化的转录因子NF-κB可通过抑制caspase-8表达发挥抗凋亡效应,从而参与恶性肿瘤的发生、发展过程。两者在胃癌中是否存在类似联系,目前尚不十分清楚。目的:检测NF-κB、caspase-8在胃癌中的表达并探讨其临床意义。方法:收集54例手术切除胃癌标本及其配对癌旁非癌组织,以RT-PCR和免疫组化方法检测NF-κB、caspase-8 mRNA和蛋白表达,分析两者在胃癌中的相关性以及两者与胃癌临床病理特征的关系。结果:胃癌组织中NF-κB mRNA相对表达量、NF-κB蛋白表达强度和表达阳性率显著高于癌旁非癌组织(P<0.01),caspase-8 mRNA相对表达量、caspase-8蛋白表达强度和表达阳性率显著低于癌旁非癌组织(P<0.01),两者在胃癌组织中的表达呈负相关(P<0.05)。胃癌组织中的NF-κB蛋白表达与肿瘤分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移有关(P<0.01),caspase-8蛋白表达仅与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论:NF-κB信号通路活化参与了胃癌的发生、发展过程,其活化可能通过下调caspase-8表达发挥抗凋亡效应。NF-κB表达可在一定程度上提示胃癌患者的预后。

慢性阻塞性肺病急性发作期测定SAA、CRP的意义

目的 探讨SAA、CRP在慢性阻塞性肺病急性发作期的应用价值。方法 测定50例慢性阻塞性肺病急性发作期患者入院初及治疗后SAA、CRP ,并常规痰标本检查。结果 50例患者入院初及治疗后SAA分别为 (387.2±92.8)ng/ml和 (37.6±29.2)ng/ml,CRP(39.5±22.6)ng/ml和 (22.5±20.7)mg/L ,均有统计学差异 (p<0.001和P<0.002)。50例患者入院初SAA升高49例而CRP升高42例(χ2=4.390,p<0.05)。CRP升高者痰培养阳性仅15例 (36% )。 结论 SAA、CRP可作为慢阻肺急性发作期早期指标及治疗反应指标。

肾上腺节细胞神经瘤的超声特征与病理分析

目的探讨肾上腺节细胞神经瘤超声表现及病理特征以提高对该病诊断水平。方法回顾分析经手术病理证实的12例肾上腺节细胞神经瘤患者的超声及病理资料。重点观察病灶的部位、形态、大小、回声特点、有无钙化、彩色血流信号以及病灶与周围组织的关系。结果 12例中,9例发生在右侧肾上腺,3例发生在左侧肾上腺,均为单发,肿瘤直径1.8～12cm,多呈类圆形或椭圆形,部分呈不规则形或＂嵌入式＂生长,肿瘤均呈低回声,5例内部见强或高回声,病理证实为钙化,3例肿瘤可见少量点状彩色血流信号,12例肿瘤均与周围结构清晰。病理上肿瘤主要由神经节细胞及施旺细胞组成。结论肾上腺节细胞神经瘤的超声具有一定特征性,观察肿瘤生长部位、形态及回声特点,对该肿瘤的诊断具有重要价值。

新型靶向药物索拉菲尼对黑色素瘤细胞株A375细胞增殖及迁移能力影响的研究

目的探讨新型靶向药物索拉菲尼在体外对人黑色素瘤细胞株A375细胞增殖及迁移能力的影响。方法采用阿尔玛蓝法检测索拉菲尼对A375细胞增殖的影响,用划痕法检测索拉菲尼对A375细胞迁移的影响,并通过荧光定量PCR法及Western blot法检测细胞增殖及迁移相关因子MEK及ERK m RNA及蛋白表达。结果 24 h、48 h、72 h、96 h时,1 mol/L、5 mol/L和10 mol/L索拉菲尼组对A375细胞增殖抑制程度均明显大于DMSO对照组,差异有统计学意义(t分别=6.30、9.26、13.45;6.65、9.41、13.73;8.25、12.71、5.09;7.87、13.42、18.62,P均<0.05)。2 h、4 h、8 h、12 h时,5 mol/L、10 mol/L索拉菲尼组对A375细胞迁移抑制程度均明显大于DMSO对照组,差异有统计学意义(t分别=7.23、7.73;7.56、8.62;7.93、15.01;13.25、21.29,P均<0.05)。2 h、4 h、8 h时,1 mol/L、5 mol/L、10 mol/L索拉菲尼对MER m RNA、ERK m RNA的表达比较,差异没有统计学意义(F分别=1.18、1.71、0.28;0.03、0.03、0.03,P均>0.05)。索拉菲尼处理A375细胞后,MER、ERK以及磷酸化的MER、ERK都受到了不同程度的抑制。结论索拉菲尼对体外培养的人黑色素瘤细胞A375的增殖及迁移具有明显的抑制作用,其可能是通过干扰MEK/ERK信号通路而发生的。

慢性肝病患者血清MMP-9的检测及临床意义

目的 研究基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在慢性肝病患者肝纤维化过程中的表达和动态变化。方法 用酶标法检测 75例慢性乙型病毒性肝炎和 40例乙肝后肝硬化患者血清中MMP 9浓度。结果 血清MMP 9浓度在慢性肝病患者肝纤维化过程中逐渐升高 ,与正常对照组比较有显著性意义 (P <0 .0 1) ;其中轻度患者的MMP 9与中度、重度、肝硬化之间 ,肝硬化与中度、重度之间两两比较有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 血清MMP 9在慢性肝病患者肝纤维化过程中可能起促进作用 。

氧化型低密度脂蛋白对血小板一氧化氮合成酶的抑制作用及卡托普利的上调作用

目的 研究氧化型低密度脂蛋白 ( ox-L DL)对血小板一氧化氮合成酶 ( NOS)的抑制作用及卡托普利的抗氧化作用及对 NOS活性的上调作用。方法 测定 5 0例动脉粥样硬化患者和 3 0例健康老年体检者血小板悬液 NOS及加入 ox-LDL、卡托普利后 NOS活性的变化。结果 动脉粥样硬化组血小板 NOS活性明显低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;动脉粥样硬化组和对照组血小板加入 ox-LDL 后 NOS活性均显著降低 ( P<0 .0 1) ;两组血小板同时加入ox-LDL 和卡托普利后 NOS活性均明显升高 ( P<0 .0 1) ;两组血小板单纯加卡托普利后 NOS活性均明显升高 ( P<0 .0 1)。血小板 NOS活性变化与 ox-L DL呈负相关 ( r=-0 .989,P<0 .0 1) ,与卡托普利呈正相关 ( r=0 .987,P<0 .0 1)。结论 ox-LDL能抑制血小板 NOS活性 ,而卡托普利不仅有抗氧化作用 ,还能直接上调

多疣壁虎tubulin beta3基因克隆和多克隆抗体制备

Tubulin beta3(TUBB3)是特异表达于神经元的微管蛋白tubulin beta家族成员,被认为在维持轴突正常状态起着重要作用,是神经元特异的标志蛋白。该研究旨在获得多疣壁虎TUBB3全长cDNA序列并制备其多克隆抗体,为进一步研究多疣壁虎断尾再生提供基因和抗体工具。根据多疣壁虎中枢神经组织cDNA文库中TUBB3的EST片段序列,采用RACE-PCR方法,获得了全长cDNA,序列全长1790bp,编码450个氨基酸,与其他物种TUBB3蛋白高度同源;RT-PCR方法和Northern blotting检测了TUBB3组织表达谱及其转录本的大小;在GenBank登录号为JQ080315;NJ法构建的系统进化树分析表明,多疣壁虎的TUBB3蛋白与鸡的TUBB3蛋白在进化距离上较近;构建pET-32a-TUBB3原核表达载体,诱导表达并纯化TUBB3蛋白,获得兔抗壁虎TUBB3多克隆抗体,ELISA检测其效价大于1:65536,Western blotting方法证实所制备的多克隆抗体可特异识别多疣壁虎神经组织的的TUBB3蛋白。

超声弹性成像联合超声BIRADS分级在乳腺癌诊断中的应用价值

目的探讨超声弹性成像联合超声BIRADS分级在乳腺癌诊断中的应用价值。方法选择146例乳腺肿块患者,采用超声弹性成像进行乳腺检查,以病理结果为金标准,分别采用弹性应变量率比值、弹性成像评分、BIRADS分级及联合进行对乳腺肿块良恶性进行评价,比较不同诊断方法的诊断价值。结果弹性应变量率比值诊断乳腺癌灵敏度为83.54%,特异度为89.89%,准确度为86.90%;弹性成像评分诊断乳腺癌灵敏度为87.34%,特异度为92.26%,准确度为92.86%;BIRADS分级诊断乳腺癌灵敏度为88.61%,特异度为92.13%,准确度为90.48%;二联1法诊断乳腺癌灵敏度为92.41%,特异度为93.26%,准确度为92.86%;二联2法诊断乳腺癌灵敏度为89.87%,特异度为92.13%,准确度为91.07%;二联3法诊断乳腺癌灵敏度为93.67%,特异度为93.26%,准确度为93.45%;三联法诊断乳腺癌灵敏度为96.63%,特异度为95.51%,准确度为95.83%。二联1法、二联3法及三联灵敏度提高,三联法特异度和准确率明显提高(P<0.05)。三联Youden指数和Kappa值均最高,其次为二联3法。结论超声弹性成像的评价方法和超声BIRADS分级在乳腺癌的诊断中都有一定局限性,其中二联法评价可以一定程度提高灵敏度,但只有将弹性应变量率比值、弹性成像评分、BIRADS分级及三联进行评价时可明显提供灵敏度、特异度、准确度、Youden指数和Kappa值,具有较高的应用价值。

中期因子和微血管密度在乳腺癌中的表达

目的 探讨中期因子 (MK)与微血管密度 (MVD)的表达与乳腺癌生物学行为的关系及对预后的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 67例乳腺浸润性导管癌组织MK、MVD表达水平 ,并对其与乳腺癌临床病理特征的关系进行统计学分析。结果 本组 67例中 ,MK阳性表达者 3 7例 ,占 5 5 .2 %。MK表达水平及MVD值均与肿块大小 ,腋淋巴结状态及复发和转移有关。MK表达阳性者的MVD均值 (90 .75± 3 3 .0 5 )明显高于MK表达阴性组 (70 .48± 3 1.3 3 ,P <0 .0 1)。结论 MK在乳腺癌血管生成中发挥重要作用 ,MK的阳性表达与乳腺癌的发生、发展和预后密切相关 ,可作为一种有价值的肿瘤标志和预后指标。

区域动脉灌注5-氟尿嘧啶对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺血流的改善作用

目的 探讨区域动脉灌注 5 氟尿嘧啶 (5 Fu)对急性坏死性胰腺炎 (ANP)大鼠胰腺血流 (PBF)的改善作用。方法 SD大鼠 14 4只 ,随机分为对照组 (A组 )、ANP组 (B组 )、5 Fu外周静脉注射治疗组 (C组 )、5 Fu区域动脉灌注治疗组 (D组 )。用多普勒超声检测PBF ,取血测内皮素 1(ET 1)水平、血栓素B2 (TXB2 )和 6 酮 前列腺素F1α(6 K PGF1α) (T/P)比值 ,观察胰腺病理变化。结果 术后 12h ,D组血浆ET 1水平、T/P比值 2 11.0 8± 2 6 .2 3、6 .39± 0 .6 5较C组 2 45 .17±34.37、7.2 0± 0 .83下降明显 (P值均 <0 .0 5 ) ,PBF波幅 0 .2 1± 0 .0 7较C组 0 .14± 0 .0 5改善显著 (P<0 .0 5 ) ,胰腺病理损害程度较C组明显减轻。结论 区域动脉灌注 5 Fu能有效逆转ANP大鼠的病理损害 ,并改善PBF。

中期因子在胰腺癌组织中的定位与表达特点

目的 探讨中期因子(MK)的mRNA及其蛋白在胰腺癌(PC)组织中的定位与表达特点。方法采用原位杂交和免疫组织化学方法检测52例PC、12例慢性胰腺炎及6例正常胰腺组织中MK mRNA及蛋白的定位与表达水平。结果MK mRNA及蛋白水平在PC组织均呈过度表达,表达阳性率分别为71.2％和73.1％,都定位于PC细胞质,有淋巴结转移和Ⅱ-Ⅳ期的患者,MK阳性表达率明显高于无淋巴结转移和Ⅰ期患者(P<0.01)。在PC细胞外组织中也有MK表达,尤其在血管密集处明显。而在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中MK表达阴性。结论 MK mR-NA及其蛋白在PC组织中呈过度表达,并可能与促进PC血管生成和转移有关。检测MK表达情况可作为PC的辅助诊断指标之一。

乙型肝炎表面抗原、抗体共阳性者的病毒基因组S区、基本核心启动子区和前C区变异分析

目的 探讨HBsAg和抗-HBs共阳性患者HBV基因组S区、基本核心启动子（BCP）区和前C区变异特点.方法 慢性HBV感染者62例,其中血清HBsAg和抗-HBs共阳性者27例,HBsAg单阳性者35例.对患者血清中的HBV基因组S区、BCP区和前C区序列进行PCR扩增和测序,并对其变异位点进行分析.组间均数比较采用t检验,样本率和变异率的比较采用卡方检验.结果 HBsAg和抗-HBs共阳性组27例患者HBV基因S区发生156个氨基酸变异,HBsAg单阳性组35例患者发生100个氨基酸变异,共阳性组氨基酸变异率显著高于单阳性组（2.56％比1.26％,x2=32.07,P＜0.05）.在主要亲水区a决定簇,尤其是第一个茎环内,氨基酸变异频率共阳性组明显高于单阳性组（4.76％比1.02％,x2=11.58,P＜0.05）.共阳性组患者HBV基因组BCP区A1762T/G1764A双突变发生率显著高于单阳性组（59.3％比28.6％,x2=5.895,P＜0.05）;前C区A1846T变异也高于单阳性组（40.7％比17.1％,x2=4.265,P＜0.05）.共阳性组患者BCP区和前C区A1762T/G1764A＋G1896A联合突变发生率也高于单阳性组（37.0％比14.3％,x2=4.302,P＜0.05）.结论 HBsAg和抗-HBs共阳性患者S区a决定簇变异率、BCP区及前C区与肝细胞癌发生相关位点变异发生率明显高于HBsAg单阳性患者.

女性性工作者宫颈人乳头状瘤病毒感染特征分析

人乳头状瘤病毒（humanpa pillomavirus，HPV）感染是宫颈癌和癌前病变的主要致病因子。目前已经分离出100多种HPV亚型，其中感染生殖道上皮细胞的有40余种。根据致病力的不同，HPV被分为高危型和低危型。不同亚型的HPV感染其致病性不同，其中高危型HPV持续感染与宫颈癌的发生最为密切，是导致宫颈癌发生的主要因素心。我国女性性工作者HPV感染特征的评估较为困难。本研究通过对浙江省湖州地区女性性工作者和普通人群的宫颈HPV感染状态调查，分析本地区女性性工作者和普通人群HPV感染特征。

核苷（酸）类药物治疗后慢性乙肝患者HBV逆转录酶区变异特征分析

目的 探讨经核苷（酸）类药物治疗后慢性乙肝患者乙肝病毒逆转录酶（RT）基因变异情况.方法 应用PCR-直接测序方法对55例接受核苷（酸）类药物抗病毒治疗后慢性乙肝患者HBV基因组RT基因区进行扩增测序,分析不同核苷（酸）类药物治疗后RT区耐药相关位点和其他位点变异特征.结果 在11个经典耐药相关位点中检出7个耐药位点（rtL80、rtV173、rtL180、rtA181、rtM204、rtN236、rtN250）变异,未检出其他4个位点（rtI169、rtT184、rtA194、rtS202）变异.55例乙肝患者中有31例（56.4％）存在经典耐药相关位点变异,其中rtM204V/I变异检出率最高（27/31,87.1％）.rtM204I变异多伴rtL80I变异而rtM204V变异多伴随rtL180M变异出现.在RT区其他非经典耐药位点中发现rtA222T,、rtL229 F/S/W、rtS256C/G、rtQ267H等变异检出率较高,其中以rtA222T频率最高（40％,22/55）.结论 接受核苷（酸）类药物治疗后乙肝患者耐药相关位点变异模式复杂,还存在一些其他非经典耐药相关位点的变异,可能与耐药密切相关.乙肝治疗中应密切监测耐药相关位点变异,为及时合理调整治疗方案提供理论指导.