乳源性小肽的抗氧化功能研究

采用D-gal致衰老动物模型,分别从组织结构、抗氧化生理生化指标以及血清细胞因子的变化情况来研究乳源小肽LPLP对受试小鼠的抗氧化能力和抗衰老能力的影响;结果表明:乳源性小肽LPLP能减轻致衰老小鼠的脾脏老化现象;在抗氧化生理生化指标层面上,LPLP对小鼠的肝脏和肾脏在SOD、MDA、T-AOC等指标上有显著性的改善作用;在细胞因子层面,LPLP能显著性降低小肽灌胃组小鼠血清中炎性细胞因子IL-6与TNF-a的分泌水平。综上所述,乳源性小肽LPLP具有改善动物的抗氧化功能并能够减轻小鼠在衰老过程中发生的老化性炎症。

乳源性小肽QEPV的抗衰老功能研究

通过果蝇实验模型,分别从果蝇的生存时间、繁殖能力、抗氧化等生理生化指标的变化来考察乳源性生物活性肽Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)的抗衰老功能。结果表明:乳源性生物活性肽QEPV在一定浓度下能够提高果蝇的平均寿命和最长寿命;能够提升果蝇的繁殖能力,并增强果蝇对H202的氧化应激能力;能够显著提高果蝇体内的SOD值、同时降低果蝇体内的MDA指标。因此,乳源性生物活性肽QEPV能够通过增强机体的抗氧化能力并降低机体组织中过氧化物的产生来延长果蝇寿命,故推测QEPV具有一定的抗衰老功能。

乳源生物活性肽QEPV体内外的吸收转运（英文）

发酵乳作为一种长寿食品备受关注。多肽Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)是一种来源于发酵乳,具有免疫调节作用的生物活性肽。通过Caco-2细胞单层膜模型及小鼠模型,研究乳源性生物活性肽QEPV在体外和体内的转运吸收情况。结果表明:乳源性生物活性肽QEPV具有非常好的稳定性,且能够穿过由Caco-2细胞形成的转运模型,但当QEPV质量浓度高于3.00 mg/mL时穿膜速率趋于稳定。流式细胞术和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱结果表明Caco-2细胞不能吸收QEPV,由于QEPV是不具有空间结构的小肽,可以初步推测出QEPV主要通过胞旁转运方式透过Caco-2细胞单层膜模型的结论。同时,QEPV可以经过腹腔注射和灌胃方式被小鼠吸收,但肠道吸收效率较差,腹腔吸收效率较好。

乳源性小肽DELQ的抗衰老功效研究

在体外研究结果表明,乳源性小肽DELQ具有良好的生物活性基础上,采用秀丽线虫为实验模型,研究DELQ的抗衰老功效。首先以生殖能力为指标,在线虫培养基中添加不同浓度的DELQ,选出最佳作用浓度;同时设立对照组和实验组,评价DELQ对线虫寿命以及生殖能力的影响。然后采用热应激和氧化应激实验,探讨DELQ的抗衰老机理。结果表明:400 mg/L的DELQ为最佳作用质量浓度;DELQ在一定质量浓度下能延缓线虫衰老,显著增加SOD质量浓度;提升线虫生殖能力;耐热力增加不明显;但能显著提高线虫的抗氧化力,MDA及ROS值均下降,SOD明显增高。因此,乳源性小肽DELQ能通过清除自由基,提升机体抗氧化力来延缓线虫衰老,故推测DELQ具有一定的抗衰老功效。

响应面法优化乳源蛋白水解工艺

本文在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合原理进行响应面实验设计,利用瑞士乳杆菌与蛋白酶结合的方式水解乳蛋白,以水解度为指标,进一步优化了工艺条件。结果表明最佳工艺条件为:复合胰蛋白酶是乳源蛋白最佳水解酶,发酵时间13 h,蛋白酶用量83 u/mL,发酵温度39℃。在此条件下蛋白水解度比单纯用瑞士乳杆菌发酵,水解度提高50.90%,实际水解度为72.21±2.12%。

瑞士乳杆菌胞内生物活性肽的分离鉴定

采用离心搜集菌体、超声波破壁、超滤及固相萃取提纯、HPLC-MS-Biolynx对比等方法和技术,建立了一种分离、纯化及鉴定瑞士乳酸菌胞内肽的方法。使用该方法分离鉴定发酵乳中瑞士乳杆菌胞内肽共20条,其中12条是本研究中新发现的多肽,说明本研究方法完整有效、切实可行,适用于胞内生物活性物质的分离鉴定。

生物活性多肽序列鉴定方法的研究

建立了一种鉴定生物活性多肽的方法,该方法通过计算机程序将MS分析得到的分子量与已知牛乳蛋白质氨基酸序列比对,得到预测的多肽序列,再根据该序列二级质谱图的az、by断裂情况,经过Biolynx软件分析证实是否为该序列。通过这种方法得到了来源于牛奶蛋白的119条多肽序列,包括已被前人报道过的具有ACE抑制活性的SG,LLP,QSLVY,VDGKEDL,有抗菌活性的EKF和KKISQ等。此外,还有些未被报道过的多肽序列。该方法能普遍用于复杂基质中生物活性肽的分析鉴定。

三种具有相同结构多肽的抗氧化功能构效关系的研究

本课题基础研究结果表明,瑞士乳杆菌在分解牛奶酪蛋白时可以产生三种具有相同氨基酸结构的多肽DELQ、DELQDKIH和DELQDKIHPF。为了探索这三种多肽是瑞士乳杆菌分解牛奶酪蛋白产生的中间产物还是最终功能性物质,采用DPPH法和ABTS法测定了这三种多肽的体外清除自由基能力和总抗氧化能力,在此基础上探讨了抗氧化肽的构效关系。实验结果表明,DELQDKIHPF的抗氧化活性最强,其次是DELQDKIH,DELQ,分析这三种多肽多数是瑞士乳杆菌分解酪蛋白时产生的中间产物,多肽的抗氧化活性与氨基酸的种类、数量和排列顺序等均相关,为今后抗氧化肽保健品、化妆品以及药物的开发奠定了基础。

莲心中总黄酮的提取工艺优化研究

以莲心为原料,以总黄酮得率和提取物得率为指标,考察提取温度、乙醇体积分数、提取时间和料液比4个主要因素,通过单因素和正交试验,研究莲心中总黄酮的最佳提取工艺。研究结果表明,莲心中总黄酮的最佳提取工艺为:乙醇体积分数70%,提取温度90℃,料液比1∶30,提取时间2.5h;在此工艺条件下,总黄酮得率1.669%,提取物得率30.748%。

预防性给予生物活性肽对巨噬细胞抵御LPS刺激的调节作用

预防性给予巨噬细胞(RAW264.7细胞)不同浓度的生物活性肽Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)后,用脂多糖(LPS)刺激细胞,通过检测细胞因子表达和炎性蛋白基因转录,观察生物活性肽QEPV对细胞抵御LPS刺激的调节作用。结果表明,0.1g/L的QEPV有显著的促进细胞增殖作用,0.5g/L浓度以下的QEPV对RAW264.7细胞无增殖抑制作用。0.5g/L QEPV预处理RAW264.7细胞后,用LPS刺激细胞,其IL-6、IL-12等促炎细胞因子的分泌降低,抗炎细胞因子IL-10分泌提前,分泌量增加,COX-2、iNOS基因的转录水平降低,说明乳源性生物活性肽QEPV对RAW264.7细胞抵御LPS刺激起正向调节作用。

响应面法优化酪蛋白源多肽制备工艺

以酪蛋白为原料,采用瑞士乳杆菌和蛋白酶组合的发酵方法,研究菌酶协同发酵方式对多肽产量的影响,并通过响应面法(Response Surface Methodology, RSM)进一步优化工艺参数。以多肽产量为检测指标,从酸性蛋白酶、复合胰蛋白酶、胃蛋白酶3种酶中确定酸性蛋白酶为最佳蛋白酶。在单因素实验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,研究发酵时间、酶用量、发酵温度对多肽产量的影响。结果表明,最佳工艺参数为发酵时间8.8 h,酶用量59 U/mL,发酵温度39.6℃。在此条件下多肽产量为(7.11±0.07)g/L,与单纯用瑞士乳杆菌发酵相比,多肽产量提高73.84%。

婴幼儿食品生产环境中阴沟肠杆菌的分离鉴定及其PFGE溯源分析

通过对婴幼儿食品生产环境中可能存在的阴沟肠杆菌污染点进行取样,共分离得到了30株菌株,16S r RNA鉴定结果表明有15株为阴沟肠杆菌,在检出菌株中占50%,且分布较为广泛,在成品区域检出率高达80%。同时,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对15株阴沟肠杆菌进行了溯源分析,发现生产环境可能成为阴沟肠杆菌二次污染源,原料样品中污染的阴沟肠杆菌经过一系列工序加工后,仍然存在于后续半成品或成品中。

小鼠骨髓来源巨噬细胞内多肽的分离鉴定

以小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)作为研究对象,分离鉴定巨噬细胞内的多肽。将获得的小鼠骨髓来源巨噬细胞分两组,实验组细胞用LPS刺激,对照组用PBS处理,共培养4 h,超声破碎、过10 ku超滤管后,采用液-质联用仪鉴定分析细胞内的多肽,并将得到的多肽序列与报道过的多肽序列进行比对,确定新发现的多肽。结果表明:发现由8～29氨基酸组成的、来源于小鼠骨髓巨噬细胞内多肽340条,其中102条是从未公开报道过。本研究发现的多肽,旨为开展动物体内具有特定功能的生物活性多肽的研究提供借鉴。