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非编码RNA与人类重大疾病的发生及其在生物医学领域内的应用 被引量:7
1
作者 郭艳合 张义玲 +2 位作者 刘立 蔡荣 钱程 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1232-1239,共8页
Noncoding RNA(ncRNA) is a kind of transcripts without the ability of coding proteins,which exist widely in highly eukaryotic.The amount of the ncRNA transcripts is up to 98% of the whole genome’s transcripts.The diff... Noncoding RNA(ncRNA) is a kind of transcripts without the ability of coding proteins,which exist widely in highly eukaryotic.The amount of the ncRNA transcripts is up to 98% of the whole genome’s transcripts.The difference in molecular structure and expressive pattern from other kinds of RNA endows them specific biological functions.Although exact functions of most ncRNA are not well known,it has been demonstrated that ncRNA was associated with some major human diseases.It would be helpful to design effective therapeutic strategies,if we understand how ncRNA is involved in the pathogenesis of human major diseases.This review will shed light on the expressive pattern and distribution of ncRNA,the relationship between diseases and ncRNA and finally the application of ncRNA in the therapeutic fields. 展开更多
关键词 非编码RNA 神经系统疾病 肿瘤 调节RNA
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乳腺生物反应器的研究和产业化进展 被引量:11
2
作者 付玉华 周秀梅 钱其军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第8期45-51,共7页
随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,... 随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,其中近30种进入临床试验不同阶段,用于治疗抗凝血酶缺乏症的抗凝血酶Ⅲ(ATryn)已上市,乳腺生物反应器生产重组蛋白显示出广阔的产业化前景。作者概述了乳腺生物反应器的原理、优点、国内外研究进展和产业化进程,讨论了其目前存在问题和应对策略。 展开更多
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 重组蛋白 多潜能干细胞
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抑制RNA沉默现象的机理及其在生物医学领域内的应用 被引量:1
3
作者 张义玲 魏旭斌 +1 位作者 蔡荣 钱程 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1246-1254,共9页
RNA沉默在机体防御病毒入侵和调控基因表达中发挥着重要的作用,目前已成为一种有效的工具应用于基因功能研究和疾病治疗等领域.RNA沉默现象普遍存在于真核细胞中,然而在宿主与病毒漫长的进化过程中,病毒已经演化出一系列逃逸或抑制RNA... RNA沉默在机体防御病毒入侵和调控基因表达中发挥着重要的作用,目前已成为一种有效的工具应用于基因功能研究和疾病治疗等领域.RNA沉默现象普遍存在于真核细胞中,然而在宿主与病毒漫长的进化过程中,病毒已经演化出一系列逃逸或抑制RNA沉默作用的方法和途径,使RNA沉默效果显著降低,另一方面,哺乳动物体细胞自身也存在调节RNA沉默功能从而使生命活动的调节更加精细完善.为了使RNA沉默发挥它的潜在效应,人们设计出一系列的策略针对抑制RNA沉默效应以达到弱化抑制的目的.全面总结抑制RNA沉默机制及其应用,从而使人们充分认识到使用RNA沉默技术时应考虑到存在的不利因素. 展开更多
关键词 RNA沉默抑制现象 RNA沉默 病毒 基因治疗
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蒽贝素(Embelin)通过阻断NF-κB信号通路抑制肝癌细胞Bel-7404生长的研究 被引量:6
4
作者 王世兵 雷文 +2 位作者 徐燕华 郭科妮 王毅刚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第2期161-167,共7页
蒽贝素(Embelin)是一种X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的小分子抑制剂,可以抑制XIAP的生成和活性,从而解除XIAP的抗凋亡作用,使凋亡顺利进行.研究了Embelin抑制肝癌细胞Bel-7404增殖的机制.采用不同... 蒽贝素(Embelin)是一种X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的小分子抑制剂,可以抑制XIAP的生成和活性,从而解除XIAP的抗凋亡作用,使凋亡顺利进行.研究了Embelin抑制肝癌细胞Bel-7404增殖的机制.采用不同浓度梯度,通过荧光显微镜、Hochest33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术和Western blot分别检测Embelin对Bel-7404细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡信号转导相关蛋白表达的影响.结果显示,Embelin能明显抑制Bel-7404细胞增殖,并通过激活caspase通路以及阻断NF-κB信号通路诱导Bel-7404细胞凋亡,为进一步利用Embelin进行肝癌治疗的研究打下一定的基础. 展开更多
关键词 XIAP小分子抑制剂 肝癌细胞 凋亡 CASPASE NF-ΚB
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MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究 被引量:6
5
作者 张静 李伟 +5 位作者 章康健 刘锡君 孔彦平 牛娜 蒋海 周秀梅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第6期627-634,共8页
MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透... MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Westernblot分别检测MG132对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响.结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长.通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡.同时,MG132可诱导Beclin1和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成.上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径:细胞凋亡和自噬. 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 肝癌细胞 凋亡 自噬 内质网应激
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诱导多潜能干细胞(iPSCs)的研究与应用进展 被引量:4
6
作者 付玉华 周秀梅 +1 位作者 徐凤青 钱其军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第2期101-112,共12页
诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获得多潜能的干细胞.iPSCs在疾病的模型建立与机理研究、细胞治疗、药物的发现与评价等方面有着巨大的潜在应用价值.在过... 诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获得多潜能的干细胞.iPSCs在疾病的模型建立与机理研究、细胞治疗、药物的发现与评价等方面有着巨大的潜在应用价值.在过去几年中,科学家们致力于改进体细胞重编程技术并取得许多突破.然而,为实现其在临床上的应用,必须克服体细胞重编程效率低和iPSCs成瘤风险两大挑战,而且重编程机制有待进一步阐明.结合iPSCs最新研究成果,评述了有关领域国内外研究进展,重点讨论当前存在问题,并展望未来研究方向. 展开更多
关键词 体细胞重编程 诱导多潜能干细胞 疾病模型 细胞治疗 小分子
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人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性 被引量:2
7
作者 钱炎珍 黎江 +7 位作者 李林芳 刘辉 刘韬 姜梨华 施乐华 苏长青 吴孟超 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期84-87,共4页
目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子... 目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。 展开更多
关键词 肝癌细胞系 原代培养 生物学特性
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携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究 被引量:1
8
作者 刘辉 王春红 +5 位作者 陈亚龙 李林芳 吴红平 钱炎珍 姜梨华 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期178-182,共5页
目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒... 目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 RGD-4C HI环 腺病毒载体 肝细胞癌
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HSV-tk联合GCV自杀系统对肝癌细胞株Huh-7杀伤作用的研究 被引量:2
9
作者 郭国英 谢国良 +2 位作者 何国清 孔彦平 王毅刚 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2011年第2期246-250,共5页
单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessi mplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统。本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告... 单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessi mplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统。本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告基因反映慢病毒的转染效率;基因组PCR及RT-PCR检测转染Huh-7细胞中的HSV-tk基因的整合及表达;MTT检测不同浓度药物处理后的细胞存活率;最后HSV-tk+与HSV-tk-的Huh-7细胞以不同比例混合,MTT测定GCV作用后细胞的存活率。结果表明,HSV-tk/GCV系统作用于Huh-7细胞后,细胞出现明显的凋亡现象,旁观者效应比较明显。 展开更多
关键词 HSV-TK GCV 肝癌细胞Huh-7 旁观者效应
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K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究
10
作者 牛娜 贾晓渊 +3 位作者 路巧然 李新 陈磊 陈侃 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2010年第5期795-798,804,共5页
腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细... 腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01)。 展开更多
关键词 5型腺病毒 K562 K562/ADR CAR 整合素αν
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表达人IL-21的细胞因子诱导的杀伤细胞对裸鼠肝癌的治疗研究 被引量:3
11
作者 陈晚华 刘辉 +3 位作者 王延春 朱洋洋 曲平波 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1045-1050,共6页
目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)作为人IL-21(hIL-21)基因的载体治疗肝癌的可行性。方法构建携带hIL-21、CopGFP基因的质粒pDC759-hIL-21、pDC759-CopGFP并分别与pAd5、pAd5F35共转染HEK293细胞... 目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)作为人IL-21(hIL-21)基因的载体治疗肝癌的可行性。方法构建携带hIL-21、CopGFP基因的质粒pDC759-hIL-21、pDC759-CopGFP并分别与pAd5、pAd5F35共转染HEK293细胞,包装表达hIL-21、CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒。分离培养CIK细胞并绘制生长曲线,将携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100、1 000)感染CIK细胞;将携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、20、50)感染SMMC-7721细胞48h后检测hIL-21蛋白的表达;将携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100)感染CIK细胞48h后检测hIL-21蛋白的表达。皮下注射SMMC-7721细胞致裸鼠成瘤,以表达hIL-21的CIK细胞治疗荷瘤裸鼠,评价疗效。结果成功构建出用于Ad5、Ad5F35病毒的质粒;构建的质粒与pAd5、pAd5F35脂质体共转染HEK293细胞,包装出表达hIL-21及CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒。携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒对CIK细胞的感染实验表明Ad5F35腺病毒感染率更高;携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒对SMMC-7721细胞的感染实验表明hIL-21表达量差异无统计学意义;携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以50MOI感染CIK细胞后hIL-21的表达量较高;动物实验统计分析说明表达hIL-21的CIK细胞对荷瘤裸鼠疗效较好。结论 hIL-21与CIK细胞在荷瘤小鼠体内联合发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 白介素21 细胞因子诱导的杀伤细胞 腺病毒 肝肿瘤
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肿瘤干细胞起源及其生物学特性 被引量:8
12
作者 陈晶 蔡荣 钱程 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第2期202-206,共5页
肿瘤干细胞与正常成体干细胞在自我更新与增殖分化能力、表型标记和强耐药性等诸多方面存在着相类似的生物学特征,所以肿瘤干细胞被推测为肿瘤发生的细胞起源。基于肿瘤干细胞与正常干细胞之间的相似性质和肿瘤发生的分子机制,科学家建... 肿瘤干细胞与正常成体干细胞在自我更新与增殖分化能力、表型标记和强耐药性等诸多方面存在着相类似的生物学特征,所以肿瘤干细胞被推测为肿瘤发生的细胞起源。基于肿瘤干细胞与正常干细胞之间的相似性质和肿瘤发生的分子机制,科学家建立了一系列从肿瘤组织或肿瘤细胞系分离肿瘤干细胞的实验方法和研究肿瘤干细胞起源的动物实验模型。现就目前在肿瘤干细胞起源和生物学特性领域的研究作概括阐述。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 成体干细胞 表型标记
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三种连接子多肽对抗癌融合蛋白翻译后剪切效果比较研究
13
作者 李红艳 周志明 +5 位作者 潘强 杨冬梅 顾锦法 沈佳妮 王世兵 章康健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第6期558-566,共9页
IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、... IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-EEED-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-F2A-Smac,并联合5-氟尿嘧啶(5-FU)处理研究各连接子介导的融合蛋白剪切效果.上述实验结果表明,在三种IL-24-linker-Smac双基因表达载体中,F2A连接子剪切效果最佳且与caspase活性成正相关.IETD、EEED连接子介导的融合蛋白都有一定的剪切,但IETD/EEED多肽影响了上游IL-24蛋白的半衰期,加速了剪切后IL-24蛋白的泛素化降解.本研究为构建靶向癌症应用的双基因或多基因载体提供了设计参考. 展开更多
关键词 连接子多肽 IETD EEED F2A caspase活性
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蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究
14
作者 陈磊 范丽 +5 位作者 李新 谢国良 何国清 路巧然 吴欣欣 李恭楚 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2011年第4期597-601,共5页
研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-κB与凋亡蛋白PARP表达的影响。采用CCK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;W... 研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-κB与凋亡蛋白PARP表达的影响。采用CCK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-κB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况。CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-κB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白。以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关。 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 KG-1细胞 细胞凋亡 NF-ΚB PARP
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LPS与巨噬细胞中htra2的表达及相关性研究
15
作者 韩文正 武虎 +4 位作者 李晓艳 李红艳 姚韵靓 郭科妮 周秀梅 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2013年第3期383-388,共6页
通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控。为了进一步证实LP... 通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控。为了进一步证实LPS刺激的特异性,实验建立VSV(vesicular stomatitis virus)病毒感染巨噬细胞模型,采用荧光定量PCR,免疫荧光方法分别从htra2的蛋白水平和定位上研究htra2的变化与LPS刺激巨噬细胞产生效应的相关性;构建了htra2基因过表达的质粒pKH3-htra2-HA,采用ELISA,Western Blot及荧光定量PCR等方法,检测过表达htra2对巨噬细胞产生和分泌炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-1b(Interleukin-1b)的影响。实验结果表明:htra2仅在LPS刺激巨噬细胞的体系中受到调控,且过表达的htra2会上调巨噬细胞IL-1b和IL-6的表达水平。 展开更多
关键词 巨噬细胞 LPS VSV 免疫荧光 IL-6
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融合蛋白sCAR-TSP-1原核表达纯化及诱导白血病细胞K562凋亡的研究
16
作者 梁天祥 谌贺宽子 +2 位作者 陈磊 武虎 唐斌 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2012年第4期584-588,共5页
根据thrombospondin-1(TSP-1)氨基酸序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR-TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程茵。该菌株经IPTG诱导后,高效表... 根据thrombospondin-1(TSP-1)氨基酸序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR-TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程茵。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-TSP-1。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE分析表明,有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-TSP-1对白血病细胞K562有明显凋亡作用。 展开更多
关键词 TSP-1 sCAR-TSP-1融合蛋白 原核表达 白血病细胞
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丁酸钠逆转H460/5-FU肺癌细胞耐药性的研究
17
作者 吴欣欣 李晓艳 +2 位作者 武虎 刘海燕 陈侃 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2012年第4期609-613,共5页
肺癌耐药是化疗成功的主要障碍,因此肺癌细胞的耐药逆转研究具重要意义。实验通过流式细胞术检测到对5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)耐受的细胞系H460/5-FU中的SP细胞含量较亲本细胞H460明显升高,经丁酸钠诱导分化后,H460/5-FU对5-FU... 肺癌耐药是化疗成功的主要障碍,因此肺癌细胞的耐药逆转研究具重要意义。实验通过流式细胞术检测到对5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)耐受的细胞系H460/5-FU中的SP细胞含量较亲本细胞H460明显升高,经丁酸钠诱导分化后,H460/5-FU对5-FU的敏感性增加,表现为细胞存活率降低,细胞凋亡率提高,而且这种改变随着丁酸钠浓度的增加而增强。结果提示丁酸钠具备逆转肺癌耐药细胞系H460/5-FU耐药的能力。 展开更多
关键词 肺癌 丁酸钠 SP细胞 耐药逆转
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SIK1在巨噬细胞中调控IL-6及IL-12表达的研究
18
作者 娄军 欧阳川 +4 位作者 郑明珠 姚韵靓 王珞 仇庆 周秀梅 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2011年第4期591-596,共6页
通过LPS(lipopolysaccharide)刺激巨噬细胞,发现盐诱导激酶(Salt Inducible Kinase 1,SIK1)基因的表达随着刺激时间呈现一定的变化趋势。提示SIK1在免疫系统中可能具有潜在的功能。实验构建了Sik1基因过表达的腺病毒载体Ad-Sik1,通过感... 通过LPS(lipopolysaccharide)刺激巨噬细胞,发现盐诱导激酶(Salt Inducible Kinase 1,SIK1)基因的表达随着刺激时间呈现一定的变化趋势。提示SIK1在免疫系统中可能具有潜在的功能。实验构建了Sik1基因过表达的腺病毒载体Ad-Sik1,通过感染RAW264.7细胞过表达Sik1基因,采用荧光定量PCR、ELISA及Western Blot等方法,分别从mRNA及蛋白质水平探讨SIK1与免疫炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-12(Interleukin-12)之间的关系。实验结果表明:SIK1能够上调免疫炎症因子IL-6I、L-12的表达。这将为免疫调节的研究及一些免疫相关疾病的临床诊断与治疗提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 SIK1 LPS刺激 IL-6 IL-12
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人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)基因的原核表达及酶活初步研究
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作者 马会彦 陈钊 +3 位作者 李杰 莫敏俐 谢国良 盛清 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2011年第5期789-794,共6页
人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)是一类分泌型蛋白,能在中性条件下改变硫酸肝素蛋白聚糖(HSPGs)的硫酸化状态,从而影响多种信号分子与其相应受体的结合,进而影响细胞信号通路。鉴于HSulf-1具有重要的潜在应用价值,为获得大量纯化蛋白以探索... 人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)是一类分泌型蛋白,能在中性条件下改变硫酸肝素蛋白聚糖(HSPGs)的硫酸化状态,从而影响多种信号分子与其相应受体的结合,进而影响细胞信号通路。鉴于HSulf-1具有重要的潜在应用价值,为获得大量纯化蛋白以探索其功能与应用,文章将HSulf-1功能域基因片段与pGEX-6p-1表达载体连接构建成重组质粒,在原核表达系统BL21中表达、分离纯化了HSulf-1的功能域片段,并以4-Mus为底物用荧光光度法进行了酶活性的测定。结果表明,原核表达能得到电泳纯级的HSulf-1纯化蛋白,但其具有酶活性的条件需要进一步探索。 展开更多
关键词 芳香基硫酸酯酶 HSulf-1 原核表达 酶活性
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卵巢癌病人腹水细胞的培养及其分化研究
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作者 路巧然 吴欣欣 +2 位作者 贾晓渊 陈磊 陈侃 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2011年第5期809-813,共5页
肿瘤干细胞是指能分化出不同表型、自我更新和不断分化的肿瘤细胞群,具有与干细胞相似的特征。文章通过流式细胞术分析从人卵巢癌腹水分离所得的细胞表面蛋白的分化特征,发现这些腹水细胞具有部分干细胞表面标志(CD44+,CD90+,β2M+)蛋白... 肿瘤干细胞是指能分化出不同表型、自我更新和不断分化的肿瘤细胞群,具有与干细胞相似的特征。文章通过流式细胞术分析从人卵巢癌腹水分离所得的细胞表面蛋白的分化特征,发现这些腹水细胞具有部分干细胞表面标志(CD44+,CD90+,β2M+)蛋白,但却不表达CD133和CD34,且体外培养2周后,腹水细胞表面标志发生了变化,这些结果为卵巢癌干细胞研究提出了新的启示。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 卵巢癌病人腹水细胞 表面标志
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