枯草芽孢杆菌整合载体的构建及基因组的改造

构建了两种整合载体,分别为单交换整合载体pACC-BdbDC和双交换整合载体pDsbE,pDGC,转化野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis168,目的基因整合到基因组上,同时引入氯霉素抗性基因。利用FLP/frt重组系统将氯霉素抗性基因敲除,便于宿主菌的进一步改造。PCR结果表明共重新构建了6种宿主菌。复杂双交换整合载体pDGC成功将3个目的基因整合到基因组上,为多个基因同时整合提供了一种方便可行的方法。

P38-2G4蛋白在红系细胞分化过程中的动态表达分析

目的 分析小鼠P38-2G4蛋白在红系细胞分化中的表达及功能,初步研究该蛋白是否参与红系分化过程.方法 制备E10.5 ～E16.5胎肝细胞、FVA细胞及诱导剂丁酸钠和六亚甲基二乙酰胺诱导不同时间的小鼠红白血病细胞MEL,用Western blot检测P38-2G4蛋白在上述3种细胞中的表达,同时以联苯胺染色法检测细胞分化的标志蛋白血红蛋白的表达.结果 在不同分化期的胎肝细胞中,P38-2G4蛋白的表达先升高后降低;在FVA细胞分化过程中,P38-2G4表达量同样先增加后减少;而在诱导剂诱导MEL细胞分化过程中,P38-2G4表达量呈下降趋势.结论 P38-2G4蛋白在不同红系分化组织中的差异性表达提示该蛋白参与了小鼠红系细胞的分化过程.

小鼠胎肝红系细胞在分化过程中形态学观察及时序性表达分析

小鼠胎肝是小鼠发育早期主要的造血器官，红系细胞在胎肝造血过程中形态特征和组成成分等方面发生了明显变化。根据红系细胞体积的变化，利用Countstar细胞计数仪对小鼠E12．5-E17．5胎肝中直径8-14岬细胞进行数量统计，再结合观测到的红系细胞的形态特征和血红蛋白表达量的不同，将E9．5．E17．5胎肝中的细胞分为10类。统计结果显示，随着胎肝造血系统的发育，哺乳类红系细胞在终末分化时出现细胞体积减小、细胞核固缩、排核和血红蛋白表达量增加等时序性变化。红系细胞表面特异标志Terll9和CD71在EryD中高表达而在成体骨髓细胞和外周血细胞中表达较低的结果表明胎肝中红系细胞具有较高的分化能力。这些数据为研究红系分化、克隆红系分化相关基因及探讨红白血病发生的机制提供了理论依据。