RNA结合蛋白Vigilin在翻译水平上对雌激素受体ER-beta的调控研究

Vigilin是一个由14个连续的KH结构域组成的RNA结合蛋白。它可以通过与mRNA结合调控mR-NA的翻译后表达水平,并能够结合脂蛋白。本实验室此前的实验中发现Vigilin参与了对雌激素信号传导通路的调控,为详细研究其调控机制,文章通过凝胶阻滞实验证明了Vigilin能在体外结合于雌激素受体3非翻译区(ER-beta 3UTR)。借助双荧光素酶报告基因实验发现,高表达Vigilin可以提高雌激素信号通路中的重要受体ER-beta的翻译效率。利用激光共聚焦显微镜和荧光蛋白定位实验,发现Vigilin在细胞内大量定位于p-body中。通过上述实验证明了Vigilin能够通过结合ER-beta 3UTR调控ER-beta的表达量,参与了细胞内雌激素信号传导通路。由于ER-beta是雌激素信号传导中非常重要的受体,因此该研究具有重要的意义。

人热激蛋白27基因的克隆表达及鉴定

用PCR技术扩增了人热激蛋白27(Hsp27)基因,构建了原核表达载体pGEX-4T-1-Hsp27。经IPTG诱导表达了带有GST标签的重组人Hsp27,SDS-PAGE鉴定显示该重组蛋白的分子量为44 kD。利用谷胱甘肽-琼脂糖树脂亲和层析纯化了该重组蛋白,经串联质谱检测证明了该重组蛋白为人Hsp27。本研究为制备Hsp27抗体及进行Hsp27的功能研究奠定了基础。

PBDC1蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

目的原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲和柱纯化得到PBDC1融合蛋白,并以此免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果经质谱鉴定,获得了高纯度的PBDC1蛋白。经Western blot验证,获得了抗PBDC1蛋白的多克隆抗体。结论成功获得抗PBDC1蛋白的多克隆抗体,为研究PBDC1在红系分化中的功能提供了有利工具。

杭白菊中黄酮类化合物的分离与鉴定

利用微波辅助提取法从杭白菊中提取黄酮类化合物,经石油醚、水饱和正丁醇萃取后,用大孔吸附树脂柱层析、聚酰胺柱层析初步分离,再用半制备型高效液相色谱分离制备单体化合物。单体化合物用紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁共振进行结构鉴定。从杭白菊中分离得到3个单体化合物,经鉴定分别为木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷(Luteolin 7-O-β-D-glucoside)、芹菜素7-O-β-D-葡萄糖苷(Apigenin 7-O-β-D-glucoside)、香叶木素7-O-β-D-葡萄糖苷(Diosmetin 7-O-β-D-glucoside)。

盐酸苯肼诱发小鼠网织红细胞条件的优化

目的利用盐酸苯肼诱发小鼠产生网织红细胞的最佳条件选择。方法每天背部皮下给ICR和BALB/c小鼠注射1%盐酸苯肼100～400μL,连续9 d。每天尾静脉取血,利用煌焦油蓝染色,观察染色后网织红细胞的诱发效率并进行统计学分析。结果注射200μL盐酸苯肼的小鼠诱发的网织红细胞状态最好,第4天诱发效率最高,可达83.16%±3.41%;注射300和400μL盐酸苯肼的小鼠诱发的网织红细胞形态不规则,细胞状态较差小鼠很快死亡。结论 ICR小鼠及BALB/c小鼠网织红细胞诱发的最佳条件为:体质量25～35 g的小鼠每天注射200μL 1%盐酸苯肼,连续注射4 d。

eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响

目的探究eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响。方法重组质粒载体eIF4H-shRNA-1或eIF4H-shRNA-2与pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2共同转染HEK293T细胞,获得可使eIF4H低表达的慢病毒。慢病毒侵染MEL细胞,获得eIF4H低表达的MEL细胞稳定株,Western blot检测干扰效果。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;联苯胺染色观察红系分化情况。结果与对照组相比较,eIF4H-shRNA-2组细胞eIF4H表达明显下调,细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),G1期细胞比例明显增加;经丁酸钠处理后eIF4H-shRNA-2组联苯胺阳性细胞明显增加(P<0.01)。结论成功构建eIF4H低表达MEL稳定株;eIF4H低表达抑制MEL细胞增殖能力;eIF4H低表达不能诱导MEL细胞红系分化,但可促进丁酸钠诱导MEL细胞红系分化。

甘草次酸抗肿瘤作用机制的研究进展

甘草次酸是中药甘草的主要有效成分之一。近年来,甘草次酸的抗肿瘤活性受到了广泛关注。研究表明,甘草次酸可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、阻遏细胞周期、抑制肿瘤细胞侵袭、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤多药耐药等途径发挥抗癌作用,并能与化疗药物协同作用,对于促癌剂诱发的癌变也表现出一定的抑制功能。随着甘草次酸抗肿瘤作用机制的进一步阐明,其在肿瘤临床治疗中将具有广阔的开发应用前景。

人源血管紧张素转化酶-C结构域在毕赤酵母中的表达

血管紧张素转化酶(ACE,EC3.4.15.1)在调节血压方面具有重要作用,研究证实,ACE-C结构域是体内使血管紧张素I(AngI)分解的主要活性位点。PCR扩增ACE-C结构域基因片段,克隆至分泌表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母GS115,阳性克隆再次电转,用G418筛选高拷贝的酵母菌落进行表达条件优化,获得0.5g/L的蛋白表达量及7.178U/mL的酶活力。经Ni+亲和层析纯化,获得纯度大于97%的目的蛋白。Captopril对酶的抑制试验证明ACE-C结构域可望成为新一代抗高血压药物ACE抑制剂筛选的理想酶靶。