健脾1号方对人结肠癌细胞作用及其机制研究

目的:探讨健脾1号方抑制人结肠癌细胞增殖和干细胞特性的作用机制。方法:以人结肠HCT116癌细胞株为模型,通过MTT实验检测不同浓度(0.4、2、10及50 mg/m L)健脾1号方对HCT116细胞的增殖抑制作用;以无血清悬浮培养实验检测健脾1号方对HCT116细胞干细胞特性的影响;通过Western-blot检测健脾1号方对HCT116细胞钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达的影响。结果:健脾1号方对HCT116生长具有抑制作用,且导致细胞形态发生变化,干预24、48及72h后的IC50值分别为2.32、1.78、1.31 mg/m L;健脾1号方具有抑制HCT116细胞成球能力,上调E-cadherin蛋白表达。结论:健脾1号方对HCT116细胞生长和干细胞特性具有明显的抑制作用,其机制可能和调节细胞上皮间质转化(EMT)有关。

多柔比星与槲皮素联载胶束逆转乳腺癌多药耐药研究

目的:以聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)为载体,构建多柔比星(DOX)与槲皮素(QUE)的PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束,并对其逆转乳腺癌多药耐药效果进行评价。方法:采用透析袋法制备载PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束,并对该药物递送系统的理化性质、体外释放特性、药效学以及安全性进行系统评价。结果:所制得的PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束平均粒径为(58. 2±5. 6) nm,联载胶束中DOX与QUE的载药量分别为(9. 12±0. 97)%和(8. 34±0. 92)%;细胞摄取实验结果表明联载胶束中的QUE可有效抑制乳腺癌耐药(MCF-7/ADR)细胞对DOX的外排作用,且PEGPLGA/DOX+QUE联载胶束对MCF-7/ADR细胞的细胞毒性显著大于游离DOX、游离DOX+QUE及PEG-PLGA/DOX胶束;体内药效学结果显示PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束可有效抑制荷瘤小鼠皮下瘤生长,并且显示出良好的生物相容性。结论:PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束可有效逆转乳腺癌多药耐药,增强对耐药肿瘤细胞的毒性作用,是一种有应用前景的抗肿瘤药物递送系统。

活血化瘀法在恶性肿瘤治疗中的应用

探讨活血化瘀在恶性肿瘤辨治中的应用方法。认为恶性肿瘤之病理变化与血瘀状态及瘀血产物密切相关,临证运用活血化瘀法,当与病机相应,重成瘀之因;与病程相应,明瘀成之时;与病位相应,知生瘀之处;与病理产物相应,晓瘀生之度。活血方药之用,以扶正为先,以正本清源为治;化瘀治法之用,中病即止,时时养血,以防瘀血再生。

大剂量附子治疗晚期恶性肿瘤的安全性评价及用药规律分析

目的评价大剂量附子在晚期恶性肿瘤中使用的安全性并分析附子的用药规律。方法收集2017年1月至2018年12月期间浙江省立同德医院肿瘤内科收治的晚期恶性肿瘤住院患者16例,提取其含大剂量附子的处方106张、共计378帖,回顾性分析患者用药前后心脏功能、肝肾功能、骨髓功能相关指标。运用聚类方法分析附子用药规律。结果配对t检验分析显示15 g、30 g、45 g、60 g附子用药后,患者的ALT、AST、TB、DB、IB、Scr、UREA、CK-MB、LDH、WBC、Hgb、PLT等相关指标均未发生明显异常,心电图、心超等检查未见明显异常。通过聚类热图分析得到了核心组合“附子-太子参-当归”等10个组合。结论含有大剂量附子的方药并未对晚期恶性肿瘤患者的心脏功能、肝肾功能、骨髓功能带来明显副作用,具有较好的安全性。

《金匮要略》治瘀法对改善恶性肿瘤高凝状态的临证启示

血液高凝状态是肿瘤预后不良的重要因素之一。中医认为其与血瘀状态及瘀血产物密切相关。中医治瘀,意在化瘀而生新,不可一味见瘀而攻瘀。本文系统梳理《金匮要略》治"瘀"诸法,提倡临证当明辨轻重缓急,注重从因论治、病证结合、注重融入现代科学研究成果而合理组方用药,起到改善恶性肿瘤高凝状态的效果。

扶肺煎对Lewis肺癌移植瘤生长及肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响

目的研究扶肺煎对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响。方法选取雄性C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌移植瘤模型,随机分为6组:模型组,扶肺煎低、中、高剂量组,顺铂组和扶肺煎中剂量联合顺铂组,每组8只。观察小鼠的一般情况及移植瘤大小。给药第15天后剥离肿瘤组织,计算各组抑瘤率;FCM检测肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs数量;免疫组化法检测Foxp3表达量;ELISA检测外周血细胞因子IL-10、TGF-β的表达水平。结果与模型组比较,各组平均瘤重均减小,顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组缩小明显(P<0.01),扶肺煎中剂量联合顺铂组抑瘤率最高(64.23%);扶肺煎中剂量联合顺铂组移植瘤中Foxp3^(+)Tregs数量减少(P<0.05),其余各实验组Foxp3^(+)Tregs数量减少均无统计学意义;扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组移植瘤中Foxp3表达量下降(P<0.01)。扶肺煎中剂量组、扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组外周血中细胞因子IL-10、TGF-β水平下降(P<0.01),IL-10下降幅度大。与顺铂组相比,扶肺煎中剂量联合顺铂组IL-10水平下降(P<0.01)。结论扶肺煎能有效抑制肺癌移植瘤的生长,对调控移植瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs数量影响不明显,对干预肿瘤微环境中Foxp3、TGF-β具有一定影响,对IL-10的影响十分显著。

中药抑肺饮对Lewis肺癌移植瘤生长及细胞EMT的影响

目的:观察中药抑肺饮对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用,研究其对细胞EMT的影响。方法:70只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分组为空白对照组、模型组、顺铂组、抑肺饮联合顺铂组、抑肺饮高剂量组、抑肺饮中剂量组和抑肺饮低剂量组,建立Lewis肺癌移植瘤模型,给药15 d后脱颈处死小鼠,取肿瘤组织并称重,计算各组抑瘤率。对肺组织进行HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化情况,同时检测肿瘤组织中E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果:抑肺饮具有抗肿瘤作用,其中抑肺饮联合顺铂组的抑瘤率最高,为72.39%。与模型组相比较,抑肺饮作用组瘤组织中的E-cadherin表达量呈上调趋势,Vimentin的表达量呈下调趋势,其中抑肺饮联合顺铂组的差异最为明显。结论:抑肺饮联合顺铂组显著抑制了C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长及Vimentin的表达,同时,上调E-cadherin的表达,说明抑肺饮的作用机制可能和调节肿瘤细胞EMT相关。

抑肺饮调控巨噬细胞表型干预肺癌转移的作用研究

目的:从TLR2信号通路着手,探讨抑肺饮调控巨噬细胞表型干预肺癌转移的作用机制。方法:利用肺癌细胞和巨噬细胞共培养体系,探讨抑肺饮对巨噬细胞表型以及对肺癌细胞生长、侵袭和迁移功能的影响;荧光定量PCR检测抑肺饮对肺癌细胞中TLR2信号通路相关分子mRNA表达水平的影响。通过小鼠肺癌移植瘤模型,考察抑肺饮对肺癌生长、转移以及肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润的干预作用。结果:在肺癌细胞与巨噬细胞共培养的条件下,抑肺饮作用后M2型巨噬细胞的比例下降,M1型巨噬细胞的比例上升;与空白血清对照组比较,抑肺饮含药血清组M2型巨噬细胞标志物Arg1和CD206的表达水平显著下调(P<0.01),M1型巨噬细胞标志物iNOS和CD86的表达水平显著上调(P<0.05),肺癌细胞的生长、侵袭和迁移能力受到抑制(P<0.01,P<0.05),TLR2、CCL2和CCL5 mRNA表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01)。在体内水平,抑肺饮具有抗肿瘤生长和转移的作用,其中顺铂+抑肺饮组的抑瘤率最高,抑制转移效果最佳;与模型组比较,抑肺饮高剂量组肿瘤组织中CD163的表达水平下调。结论:抑肺饮可能通过抑制TLR2信号通路,调节巨噬细胞表型,重塑肿瘤免疫微环境发挥干预肺癌生长和转移的作用。

油菜蜂花粉总RNA(含小RNA)大量提取及RT-qPCR检测

大量提取含小RNA的油菜蜂花粉总RNA,为研究油菜蜂花粉所含外源性miRNA在动物和人体内发挥的生理和病理功能研究奠定基础。改良苯酚-氯仿法大量提取油菜蜂花粉总RNA,Nanodrop 2000检测浓度和质量,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性;所得的总RNA经过RT-qPCR扩增。提取的总RNA260/280为2.11,产量高于1‰。电泳条带清晰,完整性良好。可扩增出油菜基因组中的miR-159和miR-166a,且可进行丰度差异比较。本方法能大量提取包括油菜蜂花粉在内的植物RNA(含小RNA),为中草药和其他植物来源天然产物中功能性miRNA在动物和人体内发挥的生物学功能研究奠定基础。

抑肺饮抑制肺癌转移的机制研究

【目的】观察抑肺饮对肺癌细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)-核转录因子kappaB(NF-κB)信号通路以及细胞上皮间质转化(EMT)的影响,探讨抑肺饮对肺癌细胞生长和转移的抑制作用及机制。【方法】制备抑肺饮含药血清,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验、侵袭实验和迁移实验观察抑肺饮对肺癌细胞A549增殖、侵袭和迁移能力的影响。以TNF-α诱导A549细胞建立细胞EMT模型,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法观察抑肺饮对细胞EMT的影响,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法观察抑肺饮对A549细胞中EMT标志物蛋白表达水平及NF-κB p65磷酸化水平的影响,采用荧光素酶报告基因实验观察抑肺饮对NF-κB启动子活性的影响。建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,称瘤体质量,观察肺脏转移灶情况,采用免疫组织化学法检测瘤组织磷酸化NF-κB p65的表达水平,荧光定量PCR法检测瘤组织B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的mRNA表达水平。【结果】(1)抑肺饮含药血清能够抑制肺癌A549细胞的增殖、侵袭、迁移能力;(2)抑肺饮含药血清能够上调上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平,下调间质细胞标志物波形蛋白(Vimentin)的表达水平,抑制NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB启动子活性;(3)体内研究结果显示,抑肺饮高剂量组的瘤质量和肺转移率,瘤组织中NF-κB p65磷酸化表达水平,靶基因Bcl-xL、CyclinD1的mRNA表达水平显著低于模型组,且抑肺饮联合顺铂使用时抑制效果最佳。【结论】抑肺饮可能通过干预TNF-α-NF-κB信号通路,调节细胞EMT,从而发挥抑制肺癌细胞增殖和转移的作用。

巨噬细胞炎性蛋白-3α在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者中的表达及其诊断价值

目的筛选乙型肝炎相关的慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)血清蛋白标志物并评价其在诊断中的应用价值。方法用HBV-ACLF中国诊断标准研究(COSSH-ACLF)队列,应用细胞因子抗体芯片对HBV-ACLF患者、慢性乙型肝炎(CHB)患者和正常健康志愿者(n=5/组)的血清样本进行检测,通过微阵列显著性分析和微阵列预测分析法寻找差异表达蛋白,初步筛查诊断HBV-ACLF的血清学标志物。通过酶联免疫吸附法(ELISA)、受试者操作特征曲线下面积(AUROC)分析以及肝组织免疫组织化学等方法进行验证,发现诊断HBV-ACLF的潜在标志物。用Student t检验或Mann-Whitney U检验比较两组间的连续计量数据,用方差分析和Kruskal-Wallis检验比较多组间的连续计量数据。结果通过细胞因子抗体芯片初始筛选,发现巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)、肝细胞生长因子、E-选择素、骨桥蛋白、生长分化因子15和癌胚抗原相关细胞黏附分子1这6个细胞因子在HBV-ACLF组中的表达水平显著升高。其中,MIP-3α的表达水平经132例HBV-ACLF患者、91例CHB患者和72名正常健康志愿者血清ELISA验证,在HBV-ACLF组中显著高表达(分别为CHB组的99.6倍、正常对照组的146.9倍,P<0.0001)。AUROC分析显示,MIP-3α在HBV-ACLF患者中的高表达可作为区分HBV-ACLF和CHB的标志物,AUROC为0.995(95%CI:0.990~1.000),灵敏度和特异度分别为95.5%和98.9%。免疫组织化学显示MIP-3α在HBV-ACLF来源的肝组织中表达为阳性,在CHB来源的肝组织和正常肝组织中表达为阴性。结论血清MIP-3α水平与HBV-ACLF病理特征密切相关,MIP-3α有潜力作为HBV-ACLF诊断的血清学标志物。

D-二聚体有助于乙型肝炎慢加急性肝衰竭的诊断与预后

目的探讨D-二聚体水平对乙型肝炎相关的慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者诊断和预测预后的价值。方法利用HBV-ACLF诊断中国标准研究(COSSH-ACLF)开放队列,随机纳入142例ACLF患者为研究对象,比较ACLF患者和非ACLF患者,不同ACLF等级患者血浆D-二聚体水平,并分别以28 d和90 d为终点比较生存组和病死组患者的D-二聚体水平;研究D-二聚体和其他实验室指标以及预后评分之间的相关性;通过受试者操作特征曲线下面积(AUROC)评估D-二聚体预测ACLF患者预后的价值。并利用外部125例ACLF患者进行验证。用Student t检验或Mann-Whitney U检验比较两组间的连续计量数据,用Kruskal-Wallis检验比较多组间的连续计量数据。结果ACLF组中血浆D-二聚体水平[2588.5(1142.8,5472.8)μg/L]与非ACLF组中的[1385.5(612.0,3840.3)μg/L]差异有统计学意义(P<0.001)。ACLF-3级患者的D-二聚体水平明显高于ACLF-1/2级(ACLF-3对比ACLF-1,P<0.001;ACLF-3对比ACLF-2,P<0.05)。28/90 d病死患者的D-二聚体水平显著高于生存组的患者(P<0.001)。D-二聚体水平与凝血酶原时间、国际标准化比值、高密度脂蛋白C等指标以及各项预后评分(COSSH-ACLFs、CLIF-C ACLFs、CLIF-OFs、MELDs)呈显著正相关。D-二聚体预测ACLF患者28 d和90 d预后的AUROC分别为0.751(95%可信区间:0.649~0.852)和0.787(95%可信区间:0.695~0.878),与其他评分的预测能力相比,差异无统计学意义(P>0.05)。125例外部验证组验证了类似结果。结论D-二聚体水平在ACLF患者中显著增高,同时是影响ACLF患者28 d和90 d预后的独立预测因素。